Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú

Identification of porocephalus stilessi (pentastomid) in the peruvian snake lachesis muta

Se realizó la necropsia a una serpiente venenosa Lachesis muta (Familia Vipiridae), procedente de Satipo, Junín, de 1.95 cm de longitud y 9 años, que se encontraba cautiva en el serpentario de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima. Se encontró cuatro pentastómidos en la cavidad corporal y en la serosa pulmonar. Los parásitos fueron fijados en formol al 10% y diafanizados con lactofenol. El estudio morfológico determinó que tres de ellos eran hembras, pues tenían el gonoporo en el extremo posterior y el cuerpo cilíndrico semejante al de un anélido, en tanto que el cuarto parásito era macho, ya que presentaba la parte anterior dilatada y el poro genital en la región anterior, cerca de la boca. La presencia de 4 ganchos, donde los situados en la zona más externa tenían un apéndice poco esclerotizado y frágil, revelaba que eran adultos. Las hembras presentaban 47 anillos y medían 8.3, 7.5 y 6.9 cm de longitud, y el macho medía 3.7 cm y tenía 39 anillos. Estas características corresponden a individuos de la especie Porocephalus stilessi, considerándose el primer reporte de esta especie en serpientes del Perú.

A necropsy was conducted in a venomus snake Lachesis muta (Family Vipiridae), originary from Satipo, Junín. This snake was 1.95 cm long, 9 years old, and was captive at the serpentarium of Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima. Four pentastomids were found in the corporal cavity and lung serosa. The parasites were fixed in 10% formol and cleared with lactofenol. The morphologic evaluation revealed that three of them were females (gonopore close to the end body and cylindrical body shape similar to an annelid) and one male (expanded front body and genital pore near the mouth). The parasites had 4 hooks where two of them showed some sclerotic appendixes compatible with adult forms. Females had 47 rings and a length of 8.3, 7.5 and 6.9 cm, respectively, while the male had 39 rings and a length of 3.7 cm. These characteristics corresponded to the species Porocephalus stilessi. This is the first report of this parasite in Peruvian snakes.

Effect of ketoprofen on the pulmonary arterial pressure in jersey calves subjected to high altitud hypoxia

Se estudió el efecto del ketoprofeno, un antiprostaglandínico bloqueador de la enzima ciclooxigenasa, sobre la presión arterial pulmonar media (PAPm) en 10 terneros Jersey machos, de 1 a 2 meses de edad, nacidos a nivel del mar y expuestos durante 3 días a una hipoxia ambiental de 3,320 m de altitud. Los terneros se distribuyeron en un grupo de 5 animales que recibió placebo (grupo control) y un grupo que recibió ketoprofeno en dosis de 3 mg/kg de peso vivo, por 5 días consecutivos, durante su estadía a nivel del mar (grupo tratado). La PAPm se determinó mediante la técnica de cateterismo cardiaco a nivel del mar y al tercer día de su estadía en la altura. Los valores promedio de la PAPm (mm Hg) a nivel del mar fueron de 19.00 ± 0.94 para el Grupo control y 21.00 ± 3.39 para el Grupo tratado, y en la altura de 39.50 ± 6.00 para el Grupo control y 31.25 ± 5.70 para el Grupo tratado, no existiendo diferencia significativa. Sin embargo, se observó diferencia por exposición a la altura al analizar la información de ambos grupos en conjunto (a nivel del mar: 20.00 ± 2.68 y al tercer día de exposición a la altura: 35.28 ± 7.16) (p<0.05). Estos resultados sugieren que el ketoprofeno no tuvo efecto sobre la PAPm en terneros Jersey sometidos durante 3 días a la hipoxia de la altura.

The effect of ketoprofen, an antiprostaglandin substance that inhibits the enzyme ciclooxigenase, on the mean pulmonary arterial pressure (mPAP) was evaluated in 10, male Jersey calves, of 1-2 months of age. Calves were born at sea level and exposed during 3 days to an environmental hypoxia of 3,320 m of high altitude. A group of 5 animals received destiled water as placebo (Control group), and other group received ketoprofen in dose of 3 mg/kg body weight for 5 consecutive days while at sea level (Treated group). The mPAP was measured by cardiac cateterism at sea level and 3 days after arriving to the high altitude. The mean values of mPAP (mm Hg) at sea level were: Control group 19.00 ± 0.94 and Treated group 21.00 ± 3.39; whereas at the high altitude were: Control group 39.50 ± 6.00 and Treated group 31.25 ± 5.70, and without significant differences. When data of the two groups were joined and analysed together, the values for mPAP at sea level (20.00 ± 2.68) were statistically different (p<0.05) from those at day 3 of exposition to high altitude (35.28 ± 7.16). The results suggested that ketoprofen had not effect on mPAP in Jersey calves exposed during 3 days at high altitude hypoxia.

Effect of two antioxidants (tempo and tempol) on ram semen cryopreservation using the tris extender

Se emplearon 32 muestras de semen procedentes de cuatro ovinos a fin de ser criopreservadas con la adición dos antioxidantes: Tempo (2,2,6,6 tetrametil-1-piperidiniloxil) y Tempol (4-hidroxi 2,2,6,6 tetrametil-1-piperidiniloxil), en concentraciones de 0.5, 1.0 y 2.5 mM, para evaluar el efecto postdescongelamiento que pudieran tener sobre la motilidad progresiva, la viabilidad e integridad acrosomal y la capacitación espermática prematura. En cada concentración de los dos antioxidantes y del grupo control se utilizó un dilutor en base a Tris, realizándose ocho repeticiones, cada una con cuatro muestras de semen. Los resultados obtenidos demuestran que la adición de Tempo a una concentración de 0.5 mM mejora significativamente la calidad del semen criopreservado en comparación con el grupo control (p<0.05), incrementado los porcentajes de motilidad progresiva (79 vs. 67%), viabilidad e integridad acrosomal (70 vs. 58%) y reduciendo la capacitación espermática prematura (9 vs.15%). Por otro lado, la adición de Tempol disminuyó la calidad seminal postdescongelamiento en comparación con el control. En conclusión, la adición de Tempo 0.5 mM en un dilutor en base a Tris, al finalizar la fase de enfriamiento, podría constituir una estrategia para mejorar la calidad de semen ovino criopreservado.

Thirty-two semen samples from four rams were frozed using two antioxidants, Tempo (2,2,6,6 tetramethyl-1-piperidinyloxyl) and Tempol (4-hidroxi 2,2,6,6 tetramethyl-1-piperidinyloxyl), each one in concentrations of 0.5, 1.0, and 2.5 mM, to evaluate the effects on post-thawing motility, viability, acrosomal integrity, and earlier sperm capacitation. Eight replications for each antioxidant concentration and control group, were done using four semen samples per replication. Semen samples were diluted on a Tris extender. Results showed that Tempo 0.5 mM improved frozen semen quality in comparison with control group (p<0.05), by increasing progresive motility (79 vs. 67%), viability and acrosomal integrity (70 vs. 58%), and decreasing earlier sperm capacitation (9 vs. 15%). On the other hand, Tempol decreased frozen semen quality. In conclusion, the use of Tempo 0.5 mM on a Tris extender, at the end of the cooling process, could be an alternative for improving the quality of frozed ram semen.

Ovine semen cryopreservation using three extenders and four combinations of permeant and non permeant agents

El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de tres dilutores y cuatro combinaciones de dos agentes crioprotectores permeantes más dos no permeantes sobre la calidad del semen ovino post-descongelamiento. Para esto, en una primera fase se evaluaron entre tres dilutores (A, B y C) y el más adecuado se usó en una segunda fase, donde se evaluaron las siguientes combinaciones de agentes crioprotectores permeantes y no permeantes: 1) Glicerol - Trehalosa, 2) Glicerol - Sacarosa, 3) Etilenglicol - Trehalosa y 4) Etilenglicol - Sacarosa. En el experimento 1, se encontró que el Dilutor A mantenía mejor la motilidad progresiva, viabilidad e integridad acrosomal post-descongelamiento en comparación con los dilutores B y C, por lo que el Dilutor A se empleó en el experimento 2. En este ensayo se encontró que la motilidad progresiva, la viabilidad e integridad acrosomal, la termoresistencia y la integridad de membrana plasmática post-descongelamiento fue mejor en los grupos con glicerol-sacarosa y glicerol-trehalosa en comparación con los grupos con etilenglicol-sacarosa y etilenglicol-trehalosa. Esto demuestra que el glicerol es un mejor crioprotector permeante en comparacion con el etilenglicol; sin embargo, no hubo diferencia en el uso de sacarosa o trehalosa. Se concluye que un dilutor con las características del dilutor A, utilizando glicerol más trehalosa o sacarosa, constituye una buena alternativa para la criopreservación de semen ovino.

The objective of the study was to evaluate the effect of three extenders and four combinations of two permeant and two non permeant cryoprotectant agents on the quality of post thaw ram semen. In Experiment 1, three extender were evaluated (A, B, and C) in order to select the best for the next step. In Experiment 2, different combinations of cryoprotectant agents were evaluated as follow: 1) Glycerol-Trehalose, 2) Glycerol-Sucrose, 3) Ethylene glycol-Trehalose, and 4) Ethylene glycol-Sucrose. In experiment 1, motility, viability and acrosomal integrity in extender A were higher than in extender B and extender C, and therefore, extender A was used for experiment 2. In this assay, motility, viability and acrosomal integrity, thermoresistance, and plasmatic membrane integrity were higher in groups Glycerol-sucrose and Glycerol-trehalose in comparison with groups Ethilene glycol-sucrose and Ethilene glycol-trehalose. However, there were not significative differences between sucrose or trehalose. In conclusion, an extender with characteristics of extender A using glycerol plus trehalose or sucrose constitute a good alternative for cryopreservation of ram semen.

Leptin determination and serum levels in adult alpacas with different body condition

El presente estudio tuvo como objetivo determinar la presencia de la hormona leptina en alpacas adultas, cuantificar sus valores y relacionarlos con la condición corporal. Se utilizaron 36 alpacas hembras adultas, vacías y sin cría, las cuales fueron divididas en dos grupos, según su condición corporal (CC): G1: CC <3.0 y G2: CC >3.0, de acuerdo a una escala 1 - 5 (1: emaciada, 5: obesa). Se tomaron muestras de sangre por punción de la vena yugular y el suero resultante fue mantenido en congelación a -20 ºC hasta su análisis. La determinación de leptina fue realizada mediante la técnica de radioinmunoensayo (RIA). La media general de la concentración de leptina fue de 17.23 ± 0.81 ng/ml. Los valores encontrados para G1 fueron de 18.14 ± 1.12 ng/ml y para G2: 16.32 ± 1.15 ng/ml, sin diferencias estadísticas entre grupos. Los resultados obtenidos permiten evidenciar la presencia de leptina en alpacas.

The aim of this study was to determine the presence of leptin in adults alpacas, in order to quantify leptin values for these animals, and to relate them with body condition. For this purpose, 36 non pregnant and non nursing female adult alpacas were used. They were divided in two groups according to body condition (BC): G1: BC <3.0 and G2: BC>3.0, using the 1 to 5 scale (1: emaciate, 5: obese). Blood samples by jugular venipunction to obtain serum were taken. Serum samples were maintained at -20 ºC until analysis. The leptin determination was carried out by the radioimmunoassay technique (RIA). The mean of leptin concentration was 17.23 ± 0.81 ng/ml. Values for G1 were 18.14 ± 1.12 ng/ml and for G2. were 16.32 ± 1.15 ng/ml, without statistical differences between groups. The results showed that the leptin hormone is also present in alpacas.

Effect of the follicular development stage at the time of mating on the ovulation and embryonic survival in alpacas

El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto del estadio del desarrollo folicular del folículo dominante (fd) al momento de la cópula, sobre la ovulación y supervivencia embrionaria en alpacas. Se utilizaron 116 animales con descanso post-parto ≥ 15 días, que fueron evaluadas por ecografía transrectal para distribuirlas en 4 grupos: G1 (fd en estadio de crecimiento, diámetro: 6 mm), G2 (fd en estadio de crecimiento, diámetro: ≥ 7 y ≤ 12 mm), G3 (fd en estadio estático, diámetro: ≥ 7 mm) y G4 (fd en estadio de regresión, diámetro: ≥ 7 mm). Posteriormente, fueron sometidos a monta controlada, a excepción de 5 alpacas del grupo G1 que rechazaron al macho. El día del empadre fue considerado el día 0. Evaluaciones ecográficas adicionales se realizaron los días 2 (ocurrencia de ovulación), 9 (presencia y tamaño del cuerpo lúteo); 20, 25, 30 y 35 (presencia de vesícula embrionaria o embrión). El día 15 post cópula se realizó la prueba de receptividad sexual. El 97.3% de alpacas empadradas (n = 111) presentaron ovulación al día 2 post cópula, sin diferencia significativa (p<0.05) entre grupos. En el día 9 post cópula, no se encontraron diferencias significativas en el tamaño promedio del cuerpo lúteo entre grupos. El porcentaje de supervivencia embrionaria fue estadísticamente similar para todos los grupos, aunque hubo una tendencia a un mayor nivel de supervivencia para el grupo G2 (65.5%) en comparación con los demás grupos al día 35 post cópula. Estos resultados indicarían que el estadio del desarrollo folicular del folículo dominante al momento de la monta no tendría efecto significativo sobre la tasa de ovulación y supervivencia embrionaria en alpacas.

The objective of this study was to evaluate the effect of the stage of the dominant follicle (df) at mating on the ovulation and embryonic survival in alpacas. A total of 116 alpacas with ³15 day-post-partum resting period were used and evaluated by transrectal ultrasonography in order to distribute them in 4 groups: G1 (df in growing stage, diameter: 6 mm), G2 (df in growing stage, diameter: ≥ 7 ≤ 12 mm), G3 (df in static stage, diameter: ≥ 7 mm,) and G4 (df in regression stage, diameter: ≥ 7 mm). Subsequently, all alpacas were mated except 5 alpacas of group G1 that rejected the male. Mating day was considered as day 0. Additional ultrasound evaluations were carried out on days 2 (occurrence of ovulation), 9 (presence and size of the corpus luteum); 20, 25, 30 and 35 (presence of embryonic vesicle or embryo). On day 15, a sexual receptiveness test was performed. Ovulation occurred in 97.3% of alpacas that were mated (n=111) but without significant differences (p<0.05) between groups. On day 9, no significant difference in the average size of the corpus luteum was observed among groups. The embryonic survival rate was also not significantly different among the groups, but there was a tendency to a greater rate of survival for group G2 (65.5%) on day 35 after mating. These results suggested that the stage of follicular development of the dominant follicle during mating does not have a significant effect on the rate of ovulation and embryonic survival in alpacas.

Evaluation of the hematology test in the diagnosis of canine ehrlichiosis

Se determinó el grado de concordancia entre el examen hematológico y la prueba de ELISA directa en el diagnóstico de ehrlichiosis canina. Se emplearon 77 muestras de sangre de perros con signos clínicos compatibles a ehrlichiosis canina y 20 controles clínicamente normales que fueron obtenidos en la Clínica de Animales Menores de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Se encontró un 84.7 ± 11.0% de grado de concordancia mediante la prueba de Kappa. Así mismo, se determinó que la trombocitopenia, leucopenia, anemia y el antecedente de contacto con garrapatas tuvieron una relación significativa con la presencia de la enfermedad (p<0.05). Se concluye que el examen hematológico es muy importante en el diagnóstico de la ehrlichiosis canina y que el ELISA directo es una excelente prueba confirmatoria.

The present study evaluated the level of agreement between the hematology test and the direct ELISA assay for the diagnosis of canine ehrlichiosis. It was used 77 samples from dogs with clinical signs compatible with canine ehrlichiosis and 20 control samples from the Hospital of Small Animals of the Veterinary Medicine Faculty, San Marcos National University. The results showed 84.7 ± 11.0% of concordance by the Kappa test. Likewise, the thrombocytopenia, leukopenia, anemia and history of tick infestation were significantly related (p<0.05) to clinical evidence of the disease. The results revealed that the hematology test was important in the diagnosis of canine ehrlichiosis and that the direct ELISA was an excellent confirmatory test.

Caprine brucellosis in three districts of the cañete province, lima

El objetivo del presente estudio epidemiológico fue estimar la prevalencia de brucelosis en cabras criadas bajo un sistema semi-estabulado, en los distritos de San Vicente, Nuevo Imperial y San Luis de la provincia de Cañete, en Lima. Se colectaron muestras de sangre de 385 cabras de tres o más meses de edad, procedentes de 21 hatos y no vacunados contra brucelosis caprina. Hubo cuatro cabras serorreactoras con la prueba Rosa de Bengala, y sólo una fue confirmada mediante la prueba de Fijación de Complemento, dando una prevalencia de brucelosis caprina de 0.26 ± 0.04%. Esta baja prevalencia podría deberse al efecto positivo del Programa de Control y Erradicación de Brucelosis Caprina conducido por el Ministerio de Salud del Perú (MINSA) y el Servicio Nacional de Sanidad Agraria (SENASA) desde el año 2000 en la provincia de Cañete.

The objective of the present epidemiological study was to determine the prevalence of brucellosis in raised goats under a barn-feeding system in the districts of San Vicente, Nuevo Imperial and San Luis, Cañete Province, Lima. Blood samples were collected from 385 goats of three or more months of age, not vaccinated against caprine brucellosis and belonging to 21 herds. Results showed four sero-positive goats to the Rose Bengal test and only one to the Complement Fixation test. The prevalence of caprine brucellosis was estimated at 0.26 ± 0.04%. This low prevalence could be due to the positive effect of the Control and Eradication Program of Caprine Brucellosis conducted by the Peruvian Ministry of Health and the National Service of Agrarian Health (SENASA) since the year 2000 in the province of Cañete.

Bovine viral diarrhoea and persistently infected animals in dairy herds in Majes, Arequipa

El objetivo del presente estudio fue determinar la prevalencia del virus de la diarrea viral bovina (VDVB) y de animales persistentemente infectados (PI) en bovinos productores de leche en la Irrigación de Majes, Arequipa. En la primera fase del estudio, se colectaron 204 muestras de leche de tanque (una por hato) en la planta local de procesamiento de leche, para la detección de anticuerpos contra el VDVB mediante la prueba de ELISA indirecta. En la segunda fase se seleccionaron de modo arbitrario a 57 hatos con anticuerpos contra el VDVB con densidades ópticas (DO) iguales o mayores a 0.900. Se colectaron 286 muestras de suero sanguíneo de estos hatos para conocer el estado serológico de cada animal y la búsqueda de animales PI mediante ELISA indirecta y ELISA de captura, respectivamente. En la tercera fase se obtuvieron muestras de suero de la totalidad de terneras y vaquillas (n = 20) de tres hatos que tuvieron animales PI a fin de buscar más animales PI. El 98.0 ± 1.9% (200/204) de las muestras de leche resultaron positivas a anticuerpos contra el VDVB con DO que fluctuaron entre 0.300 a 2.350. De las 286 muestras de suero pertenecientes a los 57 hatos, el 47.2% (135/286) tuvieron anticuerpos contra el VDVB; además, dentro del grupo de animales seronegativos se detectaron cuatro (2.7%) animales PI que pertenecieron a tres de los 57 hatos muestreados. En los animales de riesgo de los tres hatos (n = 20), se detectaron otros dos animales PI, sumando un total de seis (4.0%); además, estos seis animales PI no presentaron anticuerpos contra el VDVB. En conclusión, los resultados muestran una amplia distribución del VDVB en la población bovina de los hatos de la Irrigación Majes; así mismo, las muestras que presentan altas DO evidencian la presencia de animales PI y, por último, la muestra de leche de tanque reemplaza al suero en la detección de anticuerpos contra el VDVB.

The objective of this study was to determine the prevalence of bovine viral diarrhoea virus (BVDV) and persistently infected (PI) animals in dairy herds located in Majes, Arequipa, Peru. In the first phase, 204 bulk tank milk samples from to 204 herds were collected al the local commercial processing plant in Majes for detection of antibodies against BVDV by indirect ELISA test. In the second phase, 286 blood samples were collected from 57 strong positive (Optical Density [OD] ≥ 0.900) herds for the detection of antibodies against BVDV and in PI animals by the indirect and capture ELISAs respectively. In the third phase, blood samples were collected from all animals ranging from 6 to 24 months of age from three herds that had at least one PI animal. The prevalence of BVDV in the 204 herds was 98.0 ± 1.9% (200/204), and the level of antibodies ranged from 0.300 to 2.350 OD. The 47.2% (135/286) of serum samples had antibodies against BVDV, and within the negative samples, four (2.7%) animals from three herds were PI. Later on, additional PI animals were also detected in these three herds, and none of the six (4.0%) developed antibodies against BVDV. In conclusion, the results indicate that BVDV is widespread in dairy herds in Majes, the high level of antibodies suggests the presence of PI animals in the bovine population and finally, bulk tank milk samples are very useful for antibody detection from milking cows.

Relationship between rotavirus and fimbriated Escherichia coli in enteric infections of neonatal alpacas

El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia y la asociación entre rotavirus y la Escherichia coli fimbriada como agentes patógenos causantes de las infecciones entéricas en condiciones naturales en alpacas neonatas. La detección de rotavirus y de antígenos fimbriales se realizó mediante aglutinación con anticuerpos monoclonales embebidos en látex y la biotipificación se realizó mediante el sistema API 20E. En el 9.3% de las muestras de heces se detectó rotavirus. Se encontró 10 biotipos de E. coli, donde se detectó un 26% de antígeno F41 en alpacas neonatas con infección entérica en contraste con el 48% en los aislamientos de E. coli de alpacas clínicamente sanas. Rotavirus se encuentra en asociación con el 18.8% de los aislamientos de E. coli identificados como biotipos A y C. El 57.8% de aislamientos de E. coli de alpacas neonatas con infección entérica que contienen antígeno fimbrial F41 se encuentran en conjunto con la presencia de rotavirus. Por lo tanto, la asociación entre rotavirus, el biotipo de E. coli y el antígeno fimbrial F41 podría ser la causa de diarrea en el 18.8% del 30-40% de la población de alpacas afectadas.

The objective of the present research was to determine the presence and the association between rotavirus, biotype E. coli and fimbriated E. coli in the enteric infections of neonatal alpacas under natural conditions. The detection of rotavirus was carried out by agglutination with monoclonal antibodies, the biotyping of E. coli by API 20E system and the detection of fimbrial antigens by agglutination using monoclonal antibodies. In 15 out of 160 (9.4%) of fecal samples from neonatal alpacas with enteric infection was detected rotavirus. Ten biotypes of E. coli was found and 26% of the E. coli isolates from alpaca neonates with enteric infection had the F41 antigen in contrast with 48% from clinically healthy neonatal alpacas. Rotavirus was found in association with 18.8% of the E. coli isolates identified as biotypes A and C. The 57.8 % of E. coli isolates from neonatal alpacas with enteric infections which contained the fimbrial antigen F41 were found in association with rotavirus. In the present research has been found that under natural conditions, rotavirus is present in conjunction with a different biotype of E. coli and fimbrial antigens F41 in 18.8%; therefore, the association between rotavirus, E. coli biotype and fimbrial antigen F41 may be the cause of diarrhea in 18.8% of 30-40% of neonatal alpacas affected.

Serological evidence of the presence of canine herpes virus type 1 in Lima province

El Virus Herpes Canino tipo 1 (VHC-1) es responsable de la enfermedad hemorrágica canina en cachorros menores de cuatro semanas de vida y de algunos problemas reproductivos en perras adultas. En el Perú, la enfermedad no ha sido reportada, aunque existen hallazgos que sugieren su presencia. El objetivo del presente estudio fue demostrar la presencia de anticuerpos contra el VHC-1 entre la población canina con antecedentes asociados a problemas reproductivos. Se recolectaron muestras de sangre de 28 animales procedentes de siete distritos de la provincia de Lima que tuvieron algún antecedente relacionado a problemas reproductivos o mortalidad neonatal. Las muestras fueron analizadas con la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) donde nueve canes (32 ± 17%) resultaron positivos.

The canine Herpesvirus type 1 (CHV-1) is responsible for the canine hemorrhagic disease in puppies aged less than four weeks and for some reproductive problems in adult bitches. In Peru, the disease has been not reported, although there are findings suggesting its presence. Thus, the aim of this study was to show the presence of antibodies against CHV-1 among the canine population associated with history of reproductive problems. Blood samples from 28 animals belonging to seven districts of the province of Lima were collected. These dogs had a history of reproductive problems or neonatal mortality. Samples were submited to the indirect immunofluorescense test (IFAT), and nine of them (32 ± 17%) were positive to the test.