Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Publica

Fenoloxidasa Modificada: Clave para identificar cepas de Cryptococcus neoformans

Cryptococcus neoformans es la única levadura patógena capaz de sintetizar pigmentos como la melanina mediante la actividad de su enzima llamada fenoloxidasa. El objetivo del presente estudio fue implementar y estandarizar la prueba de la fenoloxidasa, como técnica complementaria en la identificación de cepas de C. neoformans. Se estudiaron 21 cepas, identificadas previamente con métodos convencionales. La prueba de la fenoloxidasa fue modificada debido a que su empleo originaba 9,6% (2/21) de falsa negatividad. Esta prueba modificada se optimizó a 28°C a partir de un medio con baja concentración de glucosa. Ningún aislamiento falso negativo fue encontrado luego de repetir tres veces el ensayo, y el pigmento melanina fue detectado con mayor rapidez.

Cryptococcus neoformans is the only pathogenic yeast capable of forming melanin pigment by enzymatic activity of phenoloxidase. The objective of this study was to establish and standardize, the phenoloxidase test as a complementary technique for identifying C. neoformans strains. We studied 21 strains identified through conventional methods. The phenoloxidase test was modified because its use caused 9,6% (2/21) false negatives. The test was modified and optimized to 28°C using a medium with low glucose concentration. No false negative results were found in three repeated assays using each one of the strains; melanin pigment was quickly detected.

Tipificación Molecular del Vibrio cholerae O1 en el Perú

Este estudio de ribotipificación en 75 cepas de Vibrio cholerae O1 permitió identificar tres variantes ribotípicas, referidas como Per1, Per2 y Per3, aisladas durante el periodo 1991- 1999 en el Perú. La variante Per1 fue reportada tanto en la etapa epidémica y endémica del cólera, mientras que Per2 y Per3 se relacionaron sólo con la etapa endémica. Los resultados mostraron además una aparición constante y mayoritaria de la variante Per1, poniendo en evidencia la emergencia de un mismo grupo clonal en los brotes epidémicos del Perú. Las variantes ribotípicas encontradas fueron comparadas con los ribotipos de diferentes cepas referenciales de V. cholerae previamente caracterizadas. Se observó una identidad total del ribotipo Per1 con la variante ribotípica de aislamientos Asiáticos (Tailandia), encontrándose además altos índices de similitud entre los ribotipos Per1, Per2 y Per3, y evidenciándose una estrecha relación entre las cepas peruanas y los aislamientos asiáticos.

Control de Calidad de Discos de Calidad de Sensibilidad antibiótica comercializados en el Mercado Peruano (1998-1999)

Objetivo: Se realizó el control de calidad de los discos utilizados en la evaluación de la sensibilidad de microorganismos patógenos frente a los antibióticos. Materiales y métodos: Se evaluó la calidad de 36 lotes de discos de sensibilidad antibiótica de cinco marcas de diverso origen de fabricación, comercializadas en el mercado peruano, empleando la norma M2A5, Suplemento M100-S7 del NCCL-S (método de Kirby-Bauer). Se evaluaron lotes de discos de amicacina, amoxicilina/ácido clavulánico, ampicilina, ceftazidima, cefuroxima, cloranfenicol, eritromicina, estreptomicina, gentamicina y penicilina. Los resultados fueron comparados con los valores indicados en la norma, utilizando para ello la prueba de límites de confianza (t0,05). Resultados: 41,7% del total de lotes de discos evaluados cumplieron los requisitos de la norma; 48,3% de los lotes de discos de fabricación extranjera evaluados cumplieron con dichos requisitos, a diferencia de los discos nacionales, los cuales no cumplieron con los parámetros de la norma en ninguno de los casos. Conclusiones: La elevada proporción de discos no conformes sugiere que la calidad de los discos de sensibilidad antibiótica comercializados en el Perú no es la óptima, por lo que es necesario realizar monitoreos y controles periódicos a fin de asegurar la calidad de este producto en el mercado peruano.

Objective: We performed quality control testing of the disks used to assess the susceptibility of pathogenic microorganisms to antibiotics. Materials and Methods: The quality of 36 lots of antibiotic sensitivity disks of five different brands traded in the Peruvian market was assessed using NCCLS˝s (Kirby-Bauer technique) M2-A5, supplement M100-S7 standard . Lots of disks of Amicacine, Amoxiciline/Clavulánic Acid, Ampiciline, Ceftazidime, Cefuroxime, Cloranphenicol, Erithromicyn, Estreptomicyn, Gentamicyn and Penicillin were assessed. The findings were compared to the values stated in the standards, using the Confidence Limits Test (t0.05). Findings: 41,7% of the lots of disks assessed met the requirements stated by the standards; 48.3% of the disks manufactured abroad met the aforementioned requirements. On the other hand, none of the disks manufactured in Perú met the requirements. Conclusions: The high proportion of disks that do not meet the requirements point out that the quality of the antibiotic sensitivity disks available in Perú is not optimal and that, in order to assure the quality of this product in the Peruvian market, surveys and controls should be performed periodically.

Determinación de Anticuerpos IgM contra Virus dengue partir de sangre absorbida en papel filtro : Un método alternativo y sencillo

Objetivo: Se propone como alternativa la obtención de muestras de sangre total en papel filtro, para la determinación de anticuerpos IgM contra dengue, por ser un método de recolección sencillo y no requerir de muchos cuidados en el envío al laboratorio. Materiales y métodos: De 100 pacientes con diagnóstico clínico de dengue clásico, se obtuvieron en forma simultánea, muestras de suero en tubos al vacío y de sangre total en papel filtro. Ambas muestras fueron evaluadas con el método serológico ELISA Captura de IgM a los 30 días de obtenida la muestra. Resultados: De las 100 muestras 25 fueron positivas y 75 negativas en suero, y 24 positivas y 74 negativas en papel filtro. Se obtuvo una concordancia por índice Kappa de 0,97, sensibilidad y especificidad de 96,0% y 98,0% respectivamente; el valor predictivo positivo fue 96,0%, y valor predictivo negativo fue 98,0%. Conclusión: Se evidencia muy buena sensibilidad, especificidad y concordancia en la determinación de IgM contra dengue, al utilizar papel filtro en la obtención de muestra de sangre.

Objective: This study proposes the use of filter paper, in whole blood samples to test for Dengue, as an alternate method, due to the fact that it is very simple and does not require of much detail for shipping samples to the laboratory. Materials and Methods: Using vacutainers and filter papers, whole blood sample obtained simultaneously from 100 patients diagnosed as classic dengue. All samples were tested using IgM capture ELISA. Findings: Out of 100 samples, 25 were positive and 75 were negative in sera, in filter paper 24 positive and 74 negative, with a Kappa concordance index of 0,97 and a sensitivity and specificity of 96,0% and 98,0% respectively: the positive predictive value was 96.0% and the negative predictive value was 98,0%. Conclusions: A very good sensitivity, specificity and concordance in the determination of IgM antibodies against Dengue is evidenced using filter paper when obtaining blood samples.

Estudio de validación de la Metodología para la determinación de Vitamina A en Alimentos infantiles instantáneos por Cromatografía Líquida de alto rendimiento (HPLC)

Con la finalidad de controlar la calidad de alimentos infantiles instantáneos se efectuó la validación de la metodología para la determinación de la vitamina A por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). Para la precisión del sistema se evaluaron tres parámetros: tiempo de retención, área y altura, hallándose una desviación estándar relativa (RSD) máxima de 1,78%. En la linealidad se obtuvo un coeficiente de correlación r = 0,99 y una precisión con un RSD de 2,70%. La exactitud del método se evaluó en términos de recuperación mediante la adición de vitamina A al alimento obteniéndose un porcentaje de recuperación de 97,98%; y para la sensibilidad del método se obtuvo un límite de detección (LOD) de 0,06 μg/g y un límite de cuantificación (LOQ) de 0,58 μg/g. Con los resultados obtenidos se demuestra que el método en estudio es preciso, exacto, lineal y altamente sensible para ser utilizado en el control de calidad de alimentos infantiles instantáneos para la determinación de vitamina A.

Validation of the methodology used to determine Vitamin A through High Performance Liquid Cromatography (HPLC) was performed to assess instant food for children. Three parameters were assessed in order to determine the system´s accuracy: retention time, area and height and a maximum variation (RSD) of 1.78% was found. A correlative coefficient of r = 0.99 was obtained for the lineal parameter, and an accuracy with 2.70% for RSD. The accuracy of the method was evaluated in terms of recovery through the addition of Vitamin A to the food, the recovery percentage obtained was 97.98%, and for the sensitivity a limit of detection (LOD) 0,06 μg/g was obtained, as well as a limit of quantification (LOQ) 0,58%. The findings demonstrate that the method assessed is accurate, exact, lineal and highly sensitive to be used in quality control of instant food for children for the determination of Vitamin A.

Detección de Anticuerpos IgG Específicos para Sarampión mediante la Técnica de Inmunofluorescencia Indirecta

La técnica de ínmunofluorescencia indirecta para detectar anticuerpos IgG específicos a sarampión (IFI-IgG) fue evaluada con la prueba de neutralización por reducción de placas (PRN) con 128 muestras de suero de personas con edades entre 0 y 15 años, 64 con antecedente de vacunación y 64 sin éste antecedente. El IFI-IgG alcanzó una sensibilidad de 80,4% y una especificidad de 100,0%, mostrando ser una prueba sencilla, reproducible, y tener correlación con PRN, aunque menos sensible que ésta última, especialmente cuando la PRN estimó títulos bajos de anticuerpos. Se concluye que la técnica IFI-IgG puede ser usada como método de rutina para la confirmación de sarampión en muestras de fase aguda y convalesciente de la enfermedad (sueros pareados), así como para estudios de prevalencia de anticuerpos en la comunidad, aunque no reemplazaría a la PRN.

Indirect Immunofluorescence testing for detection of measles specific IgG antibodies (IF-IgG) performed in National Institute of Health (Perú) was assessed using Plaque Reduction Neutralization test (PRN) in 128 sera from people aged between 0 and 15 years, 64 vaccinated and 64 unvaccinated. IF-IgG facilitated the detection of IgG antibodies, showing be simple to perform, good reproducibility and correlation with PRN, although it was less sensible than this, especially when the titers for antibodies were low. IFI-IgG technique can be used as a routine method for the confirmation of measles in samples from acute and convalescent phase of the illness (serum pairs) and it would be also useful in studies of antibodies prevalence in the community, although it would not replace PRN. 95.31% of the vaccinated group and 71.88% of the unvaccinated group were positive for measles using PRN.

Caracterización Molecular de la Secuencia parcialdel Gen de la Glicoproteína NS1 del Virus Dengue 1 proveniente de Máncora, Perú

Se caracterizó una región genética que codifica la glicoproteína NS1 del virus dengue 1 proveniente de Máncora, Piura. Comparaciones de secuencias de nucleótidos revelaron un 93,32% de identidad entre el aislamiento peruano y una cepa de Hawai. A nivel de aminoácidos, se observaron cambios de tipo no conservativos en dominios epitópicos de reconocimiento humoral. De otro lado, el perfil hidropático de la región estudiada fue similar al de otros aislamientos referenciales. Los resultados sugieren realizar mayores análisis de identidad genética y mutaciones en dominios epitópicos en el virus dengue 1 peruano.

A 419bp-NS1 genetic region corresponding to Dengue virus 1 was characterised from an outbreak in Máncora Piura. The comparison of nucleotide sequences revealed that Peruvian isolates showed high correlation (93.32%) with a Hawaii strain. Amino acids comparisons revealed non-conservative changes into humoral response epitope domains. On the other hand, the hydropathy profile of NS1 was similar to other referential strains. The results suggest that more comparisons are needed regarding genetic identity and mutations into the epitope domain of Peruvian dengue 1 virus.

Diagnóstico Parasitológico de la Leishmaniasis Tegumentaria Americana

La demostración directa o indirecta de Leishmania en las muestras patológicas continúa siendo un importante desafío en el diagnóstico parasitológico de esta protozoosis. A pesar de los avances significativos surgidos en investigaciones de biología molecular, muchas de sus técnicas con potencial aplicación diagnóstica, continúan siendo solamente herramientas de los laboratorios de investigación científica. Pocas de ellas se encuentran en fase de valorización clínica y epidemiológica en áreas endémicas, y quizás, de manera optimista, muy pocas estarían a disposición de los laboratorios de diagnóstico de salud pública en la próxima década. Mientras tanto, seguiremos contando con el auxilio de los llamados métodos clásicos de la Parasitología básica que todavía, en las manos de individuos experimentados, diagnostican la gran mayoría de los casos. Este artículo identifica los métodos recomendados por los especialistas del tema, describe los procedimientos consagrados por su sensibilidad y reproductibilidad, concluyendo que éstos continuarán vigentes, siempre que sean correctamente ejecutados.

Direct or indirect demonstration of Leishmania in pathological samples still constitutes a critical challenge when it comes to the parasitological diagnosis of this protozoose. In spite of significant and novel advances in the field of molecular biology of Leishmania, many of the techniques with a real potential diagnostic application, still continue to be the tools for laboratory scientific investigation. Few methods are in the stage of clinical and epidemiological application in endemic areas. Being optimistic, very few techniques would be available at public health laboratories in the next decade in developing countries, where these parasites are prevalent. Meanwhile, we will have to continue to rely on the so called classical methods of Basic Protozoology, which under the supervision of experienced professionals will provide a diagnosis for the great majority of the cases. This overview identifies the methods recommended by experts in this field, it also describes the procedures widely recognized by its sensitiveness and reproducibility, and it demonstrates that these methods will continue to be used if they are appropriately performed.