Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Publica

Fondo Concursable: incentivando la investigación en salud pública en el Perú

La inmunocromatografía para el diagnóstico de la infección por Taenia solium en Mesocricetus auratus mediante la detección de coproantígenos*

Objetivo: Evaluar la técnica de inmunocromatografía para el diagnóstico de la infección por Taenia solium en Mesocricetus auratus "hámsters" mediante la detección de coproantígenos. Materiales y métodos: Se produjo en Oryctolagus cunniculus "conejo" IgG anti-antígenos de excreción/secreción (ES) de T. solium y en Capra hircus "cabra" IgG anti-IgG de conejo. Parte de las IgG anti-antígenos ES de T. solium fue conjugado con oro coloidal. La inmunocromatografía se llevó a cabo utilizando tiras de nitrocelulosa en las cuáles se fijó dos bandas con anticuerpos de captura; en la primera, las IgG anti-antígenos ES de T. solium (banda de prueba), y en la segunda las IgG anti-IgG de conejo (banda control). La técnica fue evaluada con un "pool" de tres muestras de medio de cultivo con antígenos ES de T. solium, Hymenolepis nana, Dyphillobotrium pacificum y de larvas de Anisakis simplex, así como con un "pool" de tres muestras fecales de hámsters no parasitados, de parasitados por H. nana y de siete muestras fecales de hámsters parasitados por T. Solium. Resultados: La inmunocromatografía permitió detectar antígenos de T. solium en muestras de medio de cultivo con antígenos ES específicas y en heces de hámsters parasitados por T. solium mediante la coloración de la banda de prueba, siendo negativo cuando se utilizó medios con ES de otros helmintos y sin antígenos, así como con muestras de heces de hámsters infectados por otros parásitos y de no parasitados. En todas las tiras usadas se observó coloración de la banda control. Conclusión: La técnica de inmunocromatografía es capaz de detectar antígenos de T. solium, tanto en medio de cultivo como en heces de hámsters, faltando evaluar la sensibilidad y la especificidad con muestras fecales humanas para el diagnóstico de la teniosis mediante la detección de coproantígenos.

Objective: To assess the immunochromatography assay for the diagnosis of Taenia solium infection in hamsters (Mesocricetus auratus) by coproantigen detection. Materials and methods: IgG anti-T. solium excretory/secretory (E/S) antigens were produced in rabbits and IgG anti-rabbit IgG, in Capra hircus "goat". A portion of the anti-T. solium E/S IgG antigens was conjugated with colloidal gold. Immunochromatography was performed in nitrocellulose paper strips in which two transversal bands with capture antibodies were fixed. The first band had rabbit anti-T. solium E/S IgG antigens (test band), and the second band had goat IgG anti-rabbit IgG (control band). The assay was assessed using a pool of three culture media samples with E/S antigens from T. solium, Hymenolepis nana, Dyphillobotrium pacificum and of Anisakis simplex larvae, as well a by a pool of three faecal samples from non-infected hamsters, from hamsters infected with H. nana, and from a pool comprising seven hamsters infected with T. solium. Results: Immunochromatography detected T. solium antigens in media samples with T. solium E/S antigens and in stool samples from hamsters infected with T. solium by staining of the test band. Negative results were obtained with culture media samples with E/S antigens from other helminths and in pooled stool samples from hamsters infected with H. nana as well as from non-infected animals. In all strips used the control band got stained. Conclusions: The immunocromatography assay is able to detect T. solium antigens, both in culture media and in stools from infected hamsters, but its sensitivity and specificity should be tested in human fecal samples for diagnosing Tenia infections through coproantigen detection.

Factores asociados a la adherencia al tratamiento de Malaria en Piura y Tumbes-Perú

La Organización Mundial de Salud considera al tratamiento temprano y adecuado como parte fundamental del programa mundial de control de la malaria. Un problema asociado a esta estrategia es la resistencia, especialmente de P. falciparum a las drogas antimaláricas. Objetivo: Determinar los factores sociales, culturales y de los servicios de salud asociados a la adherencia al tratamiento de malaria desde la perspectiva del usuario y del prestador, en poblados de los departamentos de Piura y Tumbes, Perú. Materiales y métodos: Se realizó un estudio transversal cualitativo en comunidades de los departamentos de Piura y Tumbes durante Febrero, y Marzo del 2000, para ello se aplicaron grupos focales y entrevistas en profundidad, bajo el principio de saturación. Estos fueron grabados, transcritos, revisados y codificados considerando los temas de interés, utilizando el software Atlas-ti. Resultados y conclusiones: Existen factores que influencian positiva o negativamente en la adherencia al tratamiento antimalárico. Dentro de las primeras, se identificó la conciencia de enfermedad, la confianza en la efectividad de los medicamentos, el conocimiento del riesgo de presentar complicaciones, medicamentos de fácil y corta administración, tratamiento gratuito y supervisado, y la participación de promotores de salud. Por otro lado, la rápida recuperación de síntomas, aparición de efectos adversos, presencia de población migrante y predominancia de actividad agrícola, la pobre accesibilidad, la mala calidad de atención y la automedicación influencian negativamente en la adherencia al tratamiento.

The World Health Organization considers early and adequate treatment as a basic strategy of the malaria control program. One problem associated to this strategy is antimalarial drug resistance mainly observed in P. falciparum. Objective: To determine social, cultural and health supply factors associated to malaria treatment compliance, both from the providers and users perspectives at communities in the Piura and Tumbes departments in Peru. Materials and methods: A qualitative crosssectional study was performed in communities in Piura and Tumbes departments during February and March 2000. Information was gathered through focus groups and in-depth interviews, using the saturation criterion. These interviews were taped, copied, reviewed and coded considering topics of interest, using the Atlas-ti software. Results and Conclusions: There are factors positively or negatively influencing malaria treatment compliance. Among the former, the following were identified: Consciousness of illness, knowledge of risk for developing complications, confidence on drug effectiveness, easy and short drug dosing, directly observed and free therapy, as well as the role of health promoters. Among factors with a negative influence, the following were identified: fast symptom recovery, occurrence of drug adverse reaction(s), being part of a migrant population with predominant agricultural activities, poor accessibility, poor quality of health care and self-medication.

Neutralización por reducción en placas como método específico para el Diagnóstico Serológico de Fiebre Amarilla

Objetivos: Estudiar la capacidad neutralizante de muestras séricas humanas para ser empleada como prueba de confirmación frente a otras técnicas y evaluar la relación de neutralización en diferentes poblaciones para cepas de FA: 287-78 (nativa) y 17D (referencial). Materiales y métodos: Se empleó la cepa 17D para la estandarización de la prueba en células VERO utilizando dos métodos (sólido y semi-líquido); además, se seleccionaron muestras séricas humanas en base al antecedente vacunal (presente o ausente), a la procedencia (endémica y no endémica) y la positividad a virus del dengue, las cuáles fueron evaluadas por ELISA. Las poblaciones seleccionadas se enfrentaron por la prueba estandarizada (PRNT) frente a las cepas de FA: 17D (cepa vacunal derivada del prototipo Asibi) y 287-78 (primer aislamiento de FA del Instituto Nacional de Salud del Perú). Resultados: Se obtuvieron buenos resultados con el método semi-líquido, siendo el séptimo día el óptimo de coloración de las placas. De los cuatro grupos seleccionados, tres fueron positivos por ELISA y los resultados por PRNT fueron para la suspensión 17D, 29 negativos y 67 positivos con títulos entre 1:10 y 1:2560; y para la cepa 287-78, 17 negativos y 79 positivos con títulos entre 1:10 y 1:2560. Conclusiones: La técnica semi-líquida con tiempo de coloración al séptimo día ofrece óptimos resultados en plaqueo y neutralización. Además, el ELISA resultó ser menos específico frente al PRNT y se encontró variación en relación a títulos y capacidad neutralizante en algunos sueros para ambas cepas.

Objectives: To study the neutralizing capability of human serum samples in order to be used as a confirmation test compared to other techniques, and to assess the neutralization relationship in different populations for 287-78 (native) and 17D (referential) YF strains. Materials and methods: The 17D strain was used to standardize the test in VERO cells using two methods (solid and semi-liquid). Additionally, human serum samples selected on the basis of having received YF vaccine (yes/no), their origin, and being positive for Dengue virus, and these samples were assessed using an ELISA. The selected populations were confronted using the standardized test (PRNT) with YF 17D strains (vaccinal strain derived from the Asebi prototype) and with YF 287-78 (the first YF strain isolated by the Peruvian National Institute of Health). Results: Accurate results were obtained with the semi-liquid technique, the seventh day was the optimum time for plate staining. Three of the four selected groups were positive for ELISA. The findings for PRNT were: using YF 17D strain, 29 negatives and 67 positives, with titers between 1:10 and 1:2560; and for YF 287-78, 17 negatives and 79 positive, with titers between 1:10 and 1:2560. Conclusions: The semi-liquid technique with the staining time at the seventh day showed up optimal results for plating and neutralization. Additionally, the ELISA method turned out to be less specific compared to PRNT and variations related to titers and neutralizing capability in some sera for both strains were detected.

Validación de sustratos atractivos a oviposición para la detección de Aedes Aegypti

Objetivo: Comparar tres tipos de atrayentes a oviposición para la detección de Aedes aegypti (agua local, infusión de pasto Stenotaphrum secundatum y solución acuosa de propionato de metilo al 0,5%) en tres ciudades endémicas de Dengue del Perú. Materiales y métodos: Entre Setiembre y Octubre del 2001 se realizó un muestreo dirigido en viviendas de localidades de las provincias de Tarapoto (departamento San Martín), Satipo (Junín) y Tumbes (Tumbes) en base al antecedente de haber presentado, un caso confirmado de dengue o la presencia de pupas y larvas de Ae. aegypti a la inspección. En cada vivienda se colocaron 4 ovitrampas (con las 3 soluciones y una solución control: agua mineral) y se observaron por 3 días consecutivos, inspeccionándolas cada 24 horas. Para el análisis se empleó el test de rango múltiple de Duncan y la prueba de Dunnett, siendo significativo un p<0,05. Resultados: De 248 ovitrampas instaladas (88 en Tarapoto, 88 en Satipo y 72 en Tumbes) en 62 lugares, resultaron positivas 13,7%. El promedio global de huevos por ovitrampa. fue 8,02 (rango: 0-131) y se encontró que el promedio de huevos en la infusión de pasto fue mayor al encontrado en las otras soluciones (p<0,05). Conclusión: La infusión de pasto resultó la más efectiva sustancia atrayente en las ovitrampas empleadas para detectar Ae. aegypti.

Objective: To compare three types of oviposition baits (local water, Stenotaphrum secundatum solution and 0.5%-methyl propionate solution) for the detection of Aedes aegypti in three Dengue endemic cities in Peru. Materials and methods: Based upon one confirmed Dengue case and in the occurrence of Aedes pupae and larvae, a selective sampling of houses in Tarapoto (San Martfn), Satipo (Junin) and Tumbes (Tumbes) was performed between September and October, 2001. Four traps (containing the three solutions, as well as a control solution: mineral water) were placed in each house and observed for a 3-day period, being supervised every 24 hours. The Duncan Multiple Test and the Dunnet Test (significance level, p < 0,05) were used to perform the analysis. Results: Of 248 traps placed (88 in Tarapoto, 88 in Satipo and 72 in Tumbes) in 62 houses, 13.7% were positive. The average egg content for each trap was 8,02 (range: 0-131) and the average egg content found in the vegetable infusion was higher than those met in the other solutions (p<0,05). Conclusion: The vegetable infusion is the most effective trap bait used for detection of Aedes aegypti.

**Producción de Bacillus thuringiensis H-14 var. Israelensis utilizando espárrago (Asparagus officinalis) y su uso potencial para el control de la Malaria en la Libertad- Perú**

Objetivo: Estandarizar un medio, de cultivo utilizando la infusión de espárrago (Asparagus officinalis) para la producción masiva de Bacillus thuringiensis (Bti) H-14 var. israelensis y determinar el efecto biolarvicida del Bti sobre Anopheles sp en criaderos naturales del distrito Laredo durante los meses de Enero a Diciembre del 2000. Materiales y métodos: Se ensayaron 3 medios a base de infusión de espárrago blanco: M1: 100 mL de la infusión, pH 9; M2: 50 mL de la infusión con 50 mL de buffer fosfato, pH 7; y M3: 25 mL de la infusión con 75 mL de agua destilada, pH 9. Como control se utilizó el medio estándar TPH. La producción de Bti en los medios de cultivo fueron evaluadas para determinar la efectividad biolarvicida a través del LC50 y LC90. El medio de cultivo óptimo (menor LC50 y LC90) sirvió para la producción masiva del Bti, el cual se sometió a bioensayos de laboratorio y aplicaciones en criaderos naturales. La efectividad fue determinada mediante la densidad larvaria pre y post aplicación del Bti. Resultados: El medio de cultivo óptimo para la producción de Bti fue M1 mostrando alta efectividad, con 100% de mortalidad en condiciones de laboratorio y 71-97% de mortalidad en el campo a las 24 horas de exposición con 3 aplicaciones realizadas semanalmente. Conclusiones: M1 es el medio optimo para cultivar Bti, con alta efectividad para controlar larvas de Anopheles en el laboratorio y en el campo.

Objective: To standardize a culture medium using asparagus infusion (Asparagus officinalis) for the massive production of Bacillus thurigiensis (Bti) H-14 var. israelensis and to determine Bti bio-larvicide effect upon Anopheles sp. in natural breeding sites in Laredo district from January to December, 2000. Materials and methods: Three media based on white asparagus infusion were tested: M1: 100-mL infusion, pH: 9; M 2: 50-mL infusion plus 50-mL buffer phosphate, pH: 7, and M 3: 25-mL infusion plus 75-mL distilled water, pH: 9. The standard TPH medium was used as a control. Bti production in the different culture media was assessed in order to determine the bio-larvicide effectiveness using LC50 and LC90 The optimum culture medium (lower values for LC 50 and LC90) served for Bti production, and it was evaluated in laboratory and natural breeding sites. Effectiveness was determined measuring larval density prior and after Bti application. Results: The optimum medium for Bti production was M,. It showed high effectiveness, with 100% mortality under laboratory conditions, and 71-97% mortality in the field after 24 hours of exposition with three weekly applications. Conclusions: M1 is the optimum medium for culturing Bti, with high effectiveness for controlling Anopheles larvae both under laboratory and field conditions.

Características de la población de roedores y pulgas en áreas de diferente riesgo para peste de tres provincias del departamento de Piura-Perú

Objetivo: Identificar las especies de roedores y pulgas en áreas de bajo, mediano y alto riesgo para peste de tres provincias de Piura, determinando su distribución geográfica y densidad poblacional. Materiales y métodos: En este estudio transversal analítico se realizaron capturas de roedores y pulgas en 80 localidades de tres provincias de Piura-Perú entre Marzo del 2000 y Febrero del 2001, realizándose la identificación de sus especies. Las localidades fueron agrupadas en tres áreas: bajo, mediano y alto riesgo para peste. Se tomaron muestras de vísceras de 382 roedores para el aislamiento de Yersinia pestis, mediante cultivo e inmunofluorescencia directa, y muestras de sangre en tiras de Nobuto a 376 roedores y 286 perros para evaluar la presencia de anticuerpos contra Yersinia pestis, a través de la prueba de aglutinación en látex. Se calcularon indicadores de densidad poblacional para roedores y pulgas. Resultados: Akodon sp. (50,4%) y Rattus rattus (32,5%) fueron las especies de roedores predominantes. 23 localidades tuvieron un índice de atrape de roedores (IAR) mayor a 5%. Pulex irritans y Ctenophalides felis fueron las especies de pulgas más frecuentes. Xenopsilia cheopis sólo alcanzó un porcentaje de 0,2%, no encontrándose Polygenes litargus. Los indicadores de densidad poblacional de pulgas fueron bajos. Todas las muestras para cultivo, inmunofluorescencia y serología resultaron negativas. Conclusiones: La población de roedores fue alta en 23 localidades, sin embargo, la densidad poblacional de pulgas y la ausencia de circulación de Yersinia pestis no indican riesgo para la aparición de brotes de peste.

Objective: To identify rodent and flea species in low, medium and high risk areas for plague in three provinces in Piura, determining their geographic distribution and population density. Materials and methods: In this transversal analytic study, rodents and fleas were caught in 80 sites from three provinces in Piura, Peru, between March 2000 and February 2001, and their species were identified. The sites were grouped according to three categories: low, medium, and high risk for plague. Samples from internal organs from 382 rodents were taken in order to isolate Yersinia pestis using culture and direct immunofluorescence techniques; and blood samples using Nobuto strips were taken from 376 rodents and 286 dogs in order to determine the presence of antibodies against Yersinia pestis, using the latex agglutination test. Population density indicators were calculated for both rodents and fleas. Results: Akodon sp. (50.4%), and Rattus rattus (32.5%) were the predominant rodent species. 23 sites had a rodent trapping index (RTI) higher than 5%. Pulex irritans and Ctenophalides felis were the most prevalent flea species. Xenopsilla cheopis reached 0.2%, and Polygenes fitargus was not found. The population density indicators for fleas had low values. All samples for culture, immunofluorescence, and serology were negative. Conclusions: The rodent population was high in 23 sites; however, flea population density and the absence of Yersinia pestis circulation do not indicate a risk for plague outbreaks.

**Infección experimental del hámster (Mesocricetus auratus) con metacercarias de Paragonimus mexicanus (peruvianus)**

Un hámster hembra adulta infectada oralmente con 11 metacercarias de Paragonimus mexicanus (peruvianus) murió a los 10 días de ser infectado. A la autopsia del animal, se observaron y recuperaron 5 ejemplares juveniles de Paragonimus mexicanus (peruvianus) aún móviles: 2 en tejido pulmonar, 2 en cavidad toráxica y 1 en tejido graso del peritoneo abdominal.

An adult female hamster orally infected with 11 Paragonimus mexicanus (peruvianus) metacercariae spontaneously died after 10 days. When the autopsy was performed, 5 young and still mobile Paragonimus mexicanus (peruvianus) forms were recovered: 2 were found in lung tissue, two in the thoracic cavity, and one in the fat tissue from abdominal peritoneum.

Lista de Phlebotominae (Diptera: Psychodidae) para el Perú y especies consideradas como vectores naturales e incriminadas en la transmisión de patógenos de la Leishmaniosis Tegumentaria y la Enfermedad de Carrión (verruga peruana)

Se da a conocer la lista de 149 especies de flebotominos presentes para el Perú, distribuidos en 23 de los 24 departamentos del país. La clasificación taxonómica se basó en los trabajos de Galati (1990 y 1995), reportándose los siguientes géneros: Warileya (5 especies), Brumptomyia (6), Oligodontomyia (1), Micropygomyia (7), Sciopemyia (5), Lutzomyia (30), Migonemyia (4), Pintomyia (16), Pressatia (4), Trichopygomyia (2), Evandromyia (7), Psathyromyia (117), Viannamyia (3), Martinsmyia (1), Bichromomyia (4), Psychodopygus (116), Nyssomyia (8) y Trichoporomyia (113). Además, se menciona la distribución geográfica de Pitanomyia verrucarum, vector natural del agente etiológico de la enfermedad de Carrión ("verruga peruana"); de cinco especies de flebotominos (P. robusta, P. maranonensis, P. serrana, Lu. peruensis y Lu. pescei) incriminados como vectores de la Bartonella bacilliformis; de tres especies de flebotominos (Lu. ayacuchensis, Lu. peruensis y Lu. Tejadai), considerados vectores naturales; y de dos especies (P. verrucarum y Lu. pescei) incriminados como vectores de los agentes etiológicos de la leishmaniosis tegumentaria en los valles occidentales e interandinos del norte, centro y sur del Perú.

A list including 149 phlebotominae species present in Peru and distributed in 23 of 24 Peruvian Departments is presented. Taxonomy classification was based upon studies performed by Galati (1990 and 1995), and the following genera were found: Warileya (5 species), Brumptomyia (6), Ofigodontomyia (1), Micropygomyia (7), Scippemyia (5), Lutzomyia (30), Migonemyia (4), Pintornyia (16), Pressatia (4), Trichopygomyia (2), Evandromyia (7), Psathyromyia (17), Viannamyia (3), Martinsmyia (1), Bichromomyia (4), Psychodopygus (16), Nyssomyia (8), and Trichoporomyia (13). The geographic distribution of Pifanomyia verrucarum, the natural vector for Carrion's disease ("Peruvian wart") is also mentioned, as well as for five Phlebotomus species (P. robusta, P. maranonensis, P. serrana, L. peruensis y L. pescei), implicated as vectors for Bartonella bacilliformis; three Phlebotomus species (L. ayacuchensis, L. peruensis y L. tejadai), also considered as natural vectors, and two species (P verrucarum and L. pescei) incriminated as vectors for the agents causing tegumentary leishmaniasis in the western and inter-Andean valleys in the northern, central, and southern regions in Peru.