Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Publica

Sistemas de información geográfica y su aplicación en la salud pública

**Diseño y evaluación de tres oligonucleótidos para la detección de Leishmania por PCR**

La leishmaniasis afecta la salud pública en 88 países del mundo y representa un serio obstáculo para su desarrollo socioeconómico. Los métodos para diagnosticar la enfermedad toman tiempo y muchas veces son traumáticos para el paciente. Objetivo: Se aplicó PCR como método alternativo para el diagnóstico rápido de esta enfermedad. Materiales y métodos: A diferentes especies de Leishmania se les extrajo ADN genómico. Se diseñaron tres oligonucleótidos (LEISH 1, LEISH 2 y LEISH 3) dirigidos al extremo carboxilo terminal de la histona H2B de Leishmania (V.) peruviana cuya secuencia parcial sirvió para diseñar dichos oligos, los cuales fueron probados en un sistema de PCR. Resultados: Los oligonucleótidos amplificaron exitosamente regiones de 123 pb (LEISH 1 / LEISH 2) y 139 pb (LEISH 1 / LEISH 3) de esta secuencia parcial utilizada. La sensibilidad del PCR fue de hasta 1 fg de ADN purificado de L. (V.) peruviana y de 2 parásitos cuando se realizó la técnica de manera directa. La especificidad fue 100% (solo reconoció a Leishmania y no a Trypanosoma ni a humano). Los oligonucleótidos diseñados también amplificaron todas las especies de Leishmania evaluadas. Conclusión: El sistema de PCR diseñado puede ser aplicado en la detección del parásito a partir de cualquier tipo de muestra convirtiéndose en un método alternativo de diagnóstico de la enfermedad por su rapidez, especificidad y sensibilidad.

Leishmaniasis affects public health in 88 countries of the world and represents an important obstacle for their socioeconomic development. The methods used to diagnose this disease take time and are frequently traumatic to the patient. Materials and methods Genomic DNA from different Leishmania species were extracted. The carboxi-end terminal of a partial sequence of the H2B histone of Leishmania (V.) peruviana was used to design three oligonucleotides (LEISH 1, LEISH 2, LEISH3) to design a PCR technique as an alternative method to diagnose this disease rapidly. Results: A PCR was performed with these primers, which amplified succesfully 123bp (LEISH 1/ LEISH 2) and 139bp (LEISH1/ LEISH3) of the partial sequence studied. The sensitivity of direct PCR was appropiate even when 1fg of purified DNA of L. (V.) peruviana and 2 parasites was used. The specificity was 100% in all Leishmania species analyzed and did not recognized neither Trypanosoma nor human DNA. Conclusions: The oligonucleotides designed could be used in the detection of parasite from different kind of samples like fresh blood with anticoagulant, biopsy and dermal scrapping. PCR has become an alternative method to diagnose leishmaniasis because of its speed, specificity and sensitivity.

**Caracterización de las mutaciones en el gen rpoβ asociadas a la rifampicina en pacientes con tuberculosis pulmonar**

Antecedentes: La resistencia a rifampicina en M. tuberculosis involucra mutaciones en el gen rpoβ que codifica a la subunidad β de la ARN polimerasa. Objetivo: Identificar las mutaciones del gen rpoβ , en cepas de M. tuberculosis asociadas con resistencia a rifampicina aisladas de la Subregiσn de Salud Lima Norte, Perϊ. Materiales y métodos: Se cultivó en Lowestein - Jenseen 73 muestras de esputo de pacientes con tuberculosis pulmonar. A 62, con más de 10 colonias por tubo, se les comprobó susceptibilidad a isoniazida, rifampicina, estreptomicina y etambutol. Se realizó la extracción de ADN por PCR, clonación en el vector pGEM-T, transformación, selección de clonas recombinantes y secuenciamiento del ADN plasmídico para la determinación de los polimorfismos del gen rpoβ. Resultados: 52 (83,9%) cepas fueron resistentes a rifampicina (Rif r) y 10 (16,1%) susceptibles (Rif s ). Se encontró alteraciones en el gen rpoβ en 51 de 52 cepas Rif r Se identificaron 20 mutaciones. Las mutaciones mαs frecuentes fueron encontradas en los codones Ser-531 (62,7%), His-526 (15,7%), Asp-516 (11,8%) y Gln-513 (5,9%). No se observσ mutaciσn alguna en las 10 cepas Rif s. 94,2% de nuestras cepas Rif r fueron también resistentes a isoniazida. Conclusiones: Se encontraron mutaciones en el gen rpoB de casi todas las cepas Rif r ; asimismo, casi todas las cepas Rif r fueron también resistentes a isoniazida.

Background: Rifampicin resistance in M. tuberculosis involves mutations in the rpoβ gene, encoding the β subunit of RNA polymerase. Objective: To identify the rpoβ gene mutations in strains of M. tuberculosis isolated from the Health Sub-Region in North Lima, Perϊ. Materials and methods: 73 sputum samples from patients with pulmonary tuberculosis were cultured on Lφwenstein-Jensen media. 62 samples, with more than 10 colonies per tube, were analyzed for susceptibility to isoniazid, streptomycin, rifampicin and ethambutol. DNA was isolated, amplified by PCR, followed by the cloning of the amplified product in the vector pGEM-T, transformation of competent E. coli bacteria, selection of recombinant clones and sequencing of the plasmid DNA for the determination of the polymorphisms in the rpoβ gene. Results: 52 strains out of 73 isolates (83,9%) were resistant to rifampicin (Rif r ), while 10 isolates (16,1%) were found to be rifampicin susceptible (Rif s ). 51 out of 52 Rif r strains contained mutations in the rpoβ gene associated with rifampicin resistance. 20 mutations were identified. The most frequently observed mutations were localized in the codons Ser-531 (62,7 %), His-526 (15,72%), Asp-516 (11,78%) and Gln-513 (5,88 %). No mutations were detected in the 10 Rif s strains. 94,2% of the Rif r strains were also resistant to isoniazid. Conclusions: rpoβ gene mutations associated with rifampicin resistance were present in almost all Rif r strains analyzed. Almost all Rif r strains were also resistant to isoniazid.

Uso del sistema de información geográfica para determinar la relación entre la severidad de la crisis asmáticas en niños y la cercanía a fábricas con chimenea en un distrito de Lima - Perú

Objetivo: Determinar la relación geográfica entre la severidad de las crisis asmáticas en niños atendidos en el servicio de emergencia del Hospital Nacional Cayetano Heredia (HNCH) entre enero 1997 y diciembre 1998 y la localización de fábricas con chimenea en el distrito de San Martín de Porras (SMP), Lima - Perú. Materiales y métodos: Estudio transversal analítico. Utilizando la información de registros e historias clínicas, se consignó edad, sexo, número de crisis severas del último año, hospitalización previa por crisis asmática, domicilio del paciente y puntaje de Bierman y Pierson al ingreso. Mediante el mapa digitalizado de SMP indexado a la base de datos de la ubicación geográfica, se obtuvo la dirección de los pacientes y las de 10 fábricas con chimenea. Se definió como área de impacto aquella que tenía fábricas con chimenea y 2-4 casos de crisis asmática severa. Por modelamiento geoespacial se determinaron zonas de impacto y de no impacto asociadas a más casos y presencia de fábricas. Resultados: Se incluyeron 932 niños con edad promedio de 6,5±3,2 años. Aquellos que vivían dentro de las áreas de impacto presentaron mayor porcentaje de hospitalización (75,4% vs 24,6%, p<0,05) y número de crisis asmáticas severas en el último año (4,5±1,2 vs 1,8±0,7, p<0,05) que aquellos residentes de las áreas de no impacto. Conclusiones: Existe mayor número de crisis asmáticas severas y hospitalizaciones en pacientes que viven cerca de las fábricas de chimenea del distrito de SMP.

Objectives: To determine the geographic relation between the severity of asthmatic crisis and the place of factories in emergency room San Martin de Porres (SMP) district in children attented in Hospital Nacional Cayetano Heredia from January 1997 to December 1998. Materials and Methods: A cross-sectional analytic study. Age, sex, number of severe asthmatic crisis in last year, previous hospitalization for asthmatic crisis, home address and Bierman and Pierson score were obtained from medical records. Through the digitalized map of SMP with the database of geographic location, address of patients and of ten factories in the district were identified. We defined impact area as one with factories and 2-4 severe asthmatic crisis cases. By geospatial modeling we determined impact and no impact areas associated with more cases and factories. Results: 932 children were included, aged 6,5±3,2 years old. The children from impact zones had higher percent of hospitalization (75,4% vs 24,6%, p<0,05) and number of severe asthmatic crisis in last year (4,5±1.2 vs 1,8±0.7, p<0,05). Conclusions: There are higher number of severe asthmatic crisis in last year and hospitalizations in patients whose home is near factories from SMP.

**Variabilidad genética de Plasmodium falciparum en pacientes con malaria grave y malaria no complicada en Iquitos - Perú**

Objetivo: Determinar la diversidad genética del gen que codifica la proteína rica en glutamato (GLURP) de Plasmodium falciparum en pacientes con malaria complicada y no complicada circulante en un área del departamento de Loreto, distrito de Maynas. Materiales y métodos: La diversidad genética fue analizada usando reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en 30 muestras sanguíneas de pacientes con malaria no complicada (MNC) y 46 con malaria grave complicada (MGC). Resultados: Ocho genotipos fueron detectados en pacientes con MNC (Genotipo I,II,III, IV,V, VI,VII y VIII ) y cuatro genotipos en los pacientes con MGC (Genotipo V,VI,VII,VIII). Asimismo, en 50% de las muestras con MNC fueron detectadas infecciones múltiples, a diferencia de las muestras de MGC en donde no se detectó infecciones múltiples. Conclusión: Existe una diversidad genética en esta región del gen GLURP de P. falciparum, para esa época (marzo 1998 - abril 1999) y esa área del país. En tal sentido, nuestros resultados podrían servir de base para llevar a cabo estudios epidemiológicos posteriores, ya que permitiría conocer la distribución de las cepas circulantes en nuestro país.

Objetive: Determine the genetic variation in the glutamate-rich protein (GLURP) encoding gene of Plasmodium falciparum in patients with severe and Non Complicated Malaria (NCM), Loreto (Maynas). Material y Methods: Genetic diversity was analyzed by using Polymerase Chain Reaction (PCR) in 30 blood samples from patients with Non Complicated Malaria (NCM) and 46 blood samples from patients with severe and complicated malaria (SCM). Results: Eight genotypes were detected in patients infected with NCM (I,II,III, IV,V, VI,VII y VIII genotypes) and four (V,VI,VII,VIII genotypes) in patients with SCM. Moreover, 50% of the samples of NCM patients multiple infections while no other infections were detected in SCM patients. Conclusion: A genetic diversity was found in this region of the GLURP gene of P. falciparum, during this period of time in this region of Peru. Our results could be useful as initial data for future epidemiologic studies, since they snow the distribution of (Plasmodium f. stroins) in our country.

**Helmintofauna de Rattus rattus (Linnaeus, 1758) y Rattus norvegicus (Berkenhout, 1769) (Rodentia: Muridae) en el distrito de San Juan de Lurigancho, Lima - Perú**

Objetivo: Se investigaron algunos aspectos de los componentes comunitarios e infracomunitarios de la parasitofauna de dos ratas simpátricas Rattus rattus (Linnaeus) y Rattus norvegicus (Berkenhout) en especimenes recolectados en las márgenes de la cuenca baja del río Rímac, Lima, Perú. Materiales y métodos: Todos los helmintos fueron colectados, procesados, identificados y cuantificados usando los procedimientos parasitológicos estandarizados. Resultados: Se determinaron 4 especies de parásitos con diferentes prevalencias y abundancias: Hymenolepis diminuta (Rudolphi) (Cestoda) (84% y 4,3), Protospirura chanchanensis Ibáñez (Nemátoda) (47% y 1,2), Syphacia obvelata (Rudolphi) (Nemátoda) (6,3% y 0,09) y Heterakis spumosa Schneider (Nemátoda) (3,1% y 0,03). Hymenolepis diminuta fue considerada una especie central, P. chanchanensis una especie secundaria y S. obvelata y H. spumosa especies satélites. Hymenolepis diminuta tuvo el valor más alto de frecuencia de dominancia (65,6%). No se observó correlación entre la intensidad y prevalencia de parásitos y la longitud estándar y el sexo de ambos huéspedes, a excepción de P. chanchanensis, en que los machos (promedio ± desviación estándar = 1,4 ± 1,6) presentaron mayor abundancia que las hembras (promedio ± desviación estándar = 0,33 ± 0,70). La diversidad de especies fue baja H= 0,08 ± 0,13. H. diminuta y P. chanchanensis no mostraron una asociación interespecífica. Conclusión: P. chanchanensis es un nuevo helminto registrado para R. rattus. S. obvelata y H. spumosa son nuevos helmintos registrados para R. norvegicus.

Objective: A research at the component community and infracommunity level of the enteroparasite fauna of two sympatric rat species . Rattus rattus Linnaeus and Rattus norvegicus (Berkenhout)was conducted. Specimen were collected in the low basin of the Rimac river, Lima, Peru, in October 1998. Materials and methods: All the helminthes were collected, processed, identified and quantified employing standarized parasitological procedures. Results: 4 parasite species were found with different prevalence and abundance mean of infection respectively: Hymenolepis diminuta (Rudolphi) (Cestoda) (84 % and 4,3), Protospirura chanchanensis Ibañez (Nematoda) (47 % and 1,2), Syphacia obvelata (Rudolphi) (Nematoda) (6,3 % and 0,09) and Heterakis spumosa Schneider (Nematoda) (3,1 % and 0,03). Hymenolepis diminuta was a core species; P. chanchanensis a secondary species, and finally, S. obvelata and H. spumosa were rare species. H. diminuta had the highest frequency of dominance (65,6 %). No significant relationship between mean intensity and parasite prevalence with bodys standard length and sex of both hosts was observed. Only the mean abundance of P. chanchanensis was significantly higther in males (average ± DS = 1,4 ± 1,6) than females (average ± DS = 0,33 ± 0,70) rats. The species diversity was low, H± DS = 0,08 ± 0,1. There was no significant association between H. diminuta and P. chanchanensis. Conclusion: P. chanchanensis is a new registered helmith for R. rattus. S. obvelata and H. spumosa are new registered helmithes for R. norvegicus in Peru.

Validación de la metodología para la determinación de ácido domoico (biotoxina ASP) en moluscos bivalvos por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC)

El ácido domoico es una neurotoxina, competidora del glutamato, que se halla en los mares y océanos del mundo. Objetivo: Validar la metodología para determinar ácido domoico (biotoxina ASP) por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC ). Materiales y métodos: Se analizó una muestra de 1 000 g de moluscos bivalvos (conchas de abanico) extraídos de la zona sur del Perú. Para la precisión del sistema se evaluó: tiempo de retención, área y altura; la exactitud del método se estimó en función de recuperación, analizándose el material de referencia (MUS 1B) y mediante la contaminación de moluscos con solución de ácido domoico. La sensibilidad del método se evaluó por la determinación del límite de cuantificación (LOQ). Resultados: En la detección lineal se obtuvo un coeficiente de correlación r=0,99 y la precisión del método tuvo un coeficiente de correlación de 3,61%. Los porcentajes de recuperación fueron 92,52% y 91,10%, respectivamente, obtuviéndose un límite de cuantificación (LOQ) de 1,30 mg/g AD. Conclusión: Nuestra validación demostró que el método en estudio es preciso, exacto, lineal y altamente sensible para ser utilizado en el control de calidad de moluscos bivalvos.

Objective: To validate the methology for the analysis of Domoic Acid (ASP biotoxin) by High performance liquid chroma Objective: To validate the methodology to determine Domoic Acid (ASP biotoxin) by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Material and methods: 1000 g of bivalved mollusks extracted from the south of Peru were analized. Three parameters for a precise system were evaluated: retention time, area and height. Accuracy of the method was determined as a function from recovery, analyzing reference material (MUS 1B) and using mollusks samples with known quantities of standard solution of domoic acid added. Sensibility of the method was evaluated by the determination of quantitive limit (LOQ). Results: The correlation coefficient for the linear analysis was 0,99 and the coefficient of variation (RSD) obtained was 3,61% for the precision of the method. Recovery rates 8% REC) were 92,52% and 91,10% and the quantification limit (LOQ) was 1,3 mg/g AD. Conclusions: The results obtained from the method developed in this study indicate that this method is precise, accurate, selective and highly sensitive and sholud be used in quality control of mollusks samples.

La prueba intradérmica de Montenegro (IDR) en pacientes con enfermedad de Chagas: observación preliminar

Objetivo: Evaluar la reacción cruzada de la prueba intradérmica de Montenegro (IDR), cuya indicación es el diagnóstico de leishmaniasis, en pacientes con la enfermedad de chagas. Materiales y métodos: Se aplicó 25 30 µg/mL de leishmanina, antígeno de Leishmania (Viannia) peruviana, en 7 personas infectadas por Trypanosoma cruzi, 4 con diagnóstico parasitológico (gota gruesa o hemocultivo) confirmatorio y presencia de signo de Romaña y los 3 restantes con demostración de anticuerpos anti Trypanosoma cruzi mediante las pruebas ELISA e Inmunofluorescencia Indirecta (IFI). Resultados: La lectura de la prueba intradérmica a las 48 horas, reveló que ninguna de las siete personas presentó reacción de hipersensibilidad cutánea a la aplicación del antígeno. Conclusión: La prueba intradérmica de Montenegro con la leishmanina producida en el INS, evaluada en 7 pacientes con la enfermedad de chagas, no ha mostrado reactividad evidenciando una alta especificidad.

Objective: To evaluate the skin test of Montenegro, in Chagasdisease patients . Material and methods: 25-30 µg/mL of "Leishmanina", an antigen contained in Leishmania (Viannia) peruviana, was injected intradermically in seven infected persons by Trypanosoma cruzi, 4 acute cases (thick smear or culture positive) and 3 with antibodies antiTrypanosoma cruzi showed by ELISA and Inmunofluorescense test. Results: No body showed positive reactions of hypersensitivy to the antigen. Conclusion: "Leishmanina", our prepared antigen has no cross reactions in 7 patients with Chagasdisease showing high specificity.

Hepatitis virales B y delta: epidemiología y prevención en el Perú

Se describe la epidemiología de las hepatitis virales B (HVB) y Delta (HVD) en el Perú, destacando su disímil prevalencia según áreas geográficas que, sin embargo, tienden a ser cada vez más similares debido a la intensa migración interna. Igualmente, se mencionan mecanismos de transmisión diferentes a los clásicamente reportados en la literatura, así como las consecuencias de la infección crónica, traducidas en cirrosis hepática y hepatocarcinoma. Finalmente, se describen las intervenciones para la prevención de la HVB mediante programas piloto de inmunización integradas al programa ampliado de inmunizaciones (PAI), los cuales han mostrado su impacto en la reducción de las tasas de prevalencia en áreas hiperendémica intervenidas, y que han derivado en la incorporación de la vacuna contra HVB en el PAI del Ministerio de Salud del Perú.

Viral hepatitis B and Delta epidemiology in Peru is described, highlighting its dissimilar prevalence according to geographical areas that however due to the intense internal migration tend to be more similar every time. Moreover different transmission mechanisms from classically reported in the literature are mentioned, as well as the consequences of chronic infection; hepatic cirrhosis and hepatocarcinoma. Finally, the interventions for the prevention of the HBV by means of pilot programs of immunization integrated to the enlarged program of immunizations (EPI) are described. Their impact in the reduction of the prevalence rates in hyperendemic areas intervened, are showed, that derived in the incorporation of the vaccine against HBV in the EPI of the Ministry of Health of the Peru.