Revista Peruana de Biología

In Memoriam doctora Nelly Carrillo Tarazona de Espinoza (1927 - 2017)

Description of the male of Bistriopelma matuskai Kaderka 2015 and a new species of Bistriopelma from Peru (Araneae: Theraphosidae: Theraphosinae)

The male of Bistriopelma matuskai Kaderka 2015 is described and illustrated, the species is rediagnosed and complemented by new biogeographical data. Additionally, a new species of Bistriopelma, B. titicaca sp. nov., from the Puno region in Peru is described, diagnosed and illustrated. An updated general description and distribution map of Bistriopelma are provided

Se describe e ilustra el macho de Bistriopelma matuskai Kaderka 2015, se presenta una nueva diagnosis de la especie junto con nuevos datos biogeográficos. Adicionalmente, se describe, diagnostica e ilustra una nueva especie de Bistriopelma, B. titicaca sp. nov., del departamento de Puno en Perú. Se provee una descripción general actualizada y un mapa de distribución para el género

**A New Species of Dodecacius Schwarz (Coleoptera: Elateridae) from Madre de Dios, Peru**

Dodecacius Schwarz is reviewed, it includes two species known only from the eastern lower slopes of the Andes and adjacent Amazonia in southeastern Peru. Dodecacius paititi new species is described. Dodecacius testaceus Schwarz is treated as a new synonym of D. nigricollis Schwarz.

El género Dodecacius Schwarz es revisado, incluye dos especies conocidas solamente de las laderas orientales bajas de los Andes y la Amazonia adyacente en el sureste de Perú. Se describe la nueva especie Dodecacius paititi y Dodecacius testaceus Schwarz es considerado como un nuevo sinónimo de D. nigricollis Schwarz.

**Biological aspects of Archaeoprepona demophon muson (Fruhstorfer, 1905) (Lepidoptera: Nymphalidae, Charaxinae) in the Peruvian Amazon**

El objetivo de este trabajo fue elucidar el ciclo biológico de la mariposa diurna Archaeoprepona demophon muson, determinar las especies de plantas con las que se relaciona, caracterizar su hábitat y contribuir al conocimiento sobre sus enemigos naturales. El trabajo de campo se desarrolló en dos áreas cercanas a la ciudad de Iquitos (Perú). Para describir el ciclo biológico se utilizó 20 huevos recientemente depositados en las hojas de su planta hospedera. La duración del ciclo, desde huevo hasta adulto fue de 85.40 ± 4.66 días en condiciones de laboratorio. El periodo de huevo se extendió por 5.60 ± 0.52 días. La larva pasa por cinco estadíos: el primero duró 8.61 ± 0.77 días, el segundo 6.12 ± 0.68 días, el tercero 11.44 ± 0.73 días, el cuarto 8.13 ± 0.34 días, y el quinto 27.37 ± 1.29 días. El periodo de la prepupa duró 3.60 ± 0.51 días y el de pupa 14.13 ± 2.62 días; los adultos nacieron aproximadamente entre las 9:00 a 11:00 h. La hembra vivió 41.00 ± 6.35 días y el macho 19.25 ± 4.49 días. Las plantas alimenticias utilizadas fueron Siparuna bifida (Poepp. & Endl.) A.DC., Pouteria caimito (Ruiz & Pav.) Radlk. y Musa x paradisiaca L. Registramos dos enemigos naturales, una araña y un hongo

The aim of this study was to elucidate the life cycle of the butterfly Archaeoprepona demophon muson, determine the species of plants to which it relates, characterize its habitat and contribute to the knowledge about their natural enemies. Fieldwork was conducted in two areas near Iquitos (Peru). For the description of the life cycle 20 eggs laid on leaves of it host plant were used. The cycle from egg to adult lasted 85.40 ± 4.66 days under laboratory conditions. The egg period took 5.60 ± 0.52 days. The larva goes through five stages: the first one lasts 8.61 ± 0.77 days; the second 6.12 ± 0.68; the third 11.44 ± 0.73; the fourth 8.13 ± 0.34; and the fifth 27.37 ± 1.29. The prepupa lasted 3.60 ± 0.51 days and the pupa 14.13 ± 2.62; adults were born approximately between 9:00 to 11:00 h. The female lived 41.00 ± 6.35 days and the male 19.25 ± 4.49 days. The host plants were Siparuna bifida (Poepp. & Endl.) A.DC., Pouteria caimito (Ruiz & Pav.) Radlk. and Musa × paradisiaca L. We report two natural enemies, a spider and a fungus

Genetic differentiation of red and gray tilapia (Oreochromis niloticus) using microsatellites and SCAR markers as indicators of genetic sex

El objetivo del trabajo fue realizar la estandarización de los protocolos moleculares, diferenciar los linajes de la tilapia roja y gris mediante microsatélites de ADN y evaluar los marcadores SCAR5F-X/5R y SCAR-5F/5R-Y como indicadores del sexo genético de O. niloticus. El microsatélite UNH106 permitió diferenciar genéticamente los linajes de la tilapia roja de la gris. Los microsatélites UNH136, UNH115 y UNH995 presentaron loci monomórficos tanto en la tilapia roja como en la gris en el lote poblacional del Centro Experimental de Genética de la Universidad Nacional de Trujillo. Se describen los tamaños de fragmentos para los microsatélites y del gen de referencia β actin. También se confirmó la efectividad de los marcadores SCAR como informativos en la determinación del sexo genético evaluados en hembras XX y YY y machos XY y YY de O. niloticus roja y hembras XX y machos XY de O. niloticus gris.

The aims of this work was to develop a standardized molecular protocols, to differentiate red and gray tilapia lineages using DNA microsatellites and to evaluate SCAR-5F-X/5R and SCAR-5F/5RY markers associated with the phenotypic sex of O. niloticus. The UNH106 microsatellite allowed differentiating genetically the lineages of red tilapia from gray. The markers UNH136, UNH115 and UNH995 presented monomorphic loci in both the red and gray tilapia in the population stock of the Centro Experimental de Genética of the Universidad Nacional de Trujillo. Fragment sizes for microsatellites and the reference gene β actin are described. The effectiveness of SCAR markers as informative in the determination of the genetic sex in XX and YY females and XY y YY males of red tilapia and XX females and XY males of gray tilapia was also confirmed.

Wild Mammals and birds used by inhabitants of the Abujao river basin (Ucayali, Peru)

La Amazonia peruana esta clasificada como un ecosistema mega-diverso. La riqueza de especies de fauna y flora acrecienta la diversidad de la población humana. La cuenca del río Abujao está poblada por mestizos y grupos indígenas Ashéninka y Shipibo-Conibo, los cuales todavía guardan parte de sus tradiciones, conocimientos ancestrales y ecológicos. Esta investigación se realizó con la finalidad de conocer el uso de especies de mamíferos y aves silvestres por la población indígena y mestiza en la cuenca del río Abujao. Se determinaron categorías de uso; entre las categorías determinadas predomina el mayor conocimiento de mamíferos y aves silvestres para el uso alimenticio, medicinal y comercial; relativamente pocas especies y parte de estas son para uso ritual, mágico y ornamental debido a la pérdida de conocimientos y tradiciones ancestrales. Rescatando estos conocimientos el presente trabajo tiene una gran importancia en la conservación de aves y mamíferos y el conocimiento ecológico de la Amazonía Peruana

The Peruvian Amazon is classified as one of the mega-diverse ecosystem of the world. Local populations have benefited from the uses of its richness of fauna and flora, promoting the emergence of a wide variety of uses. The Abujao river basin, located in the Peruvian Amazon, is home for mestizos and indigenous groups of Ashéninka and Shipibo-Conibo, whose traditions, and ancestral and ecological knowledge are still alive and closely related to their natural environments. This research was carried out to determine how and to what extent present groups of indigenous and mestizo in the Abujao river basin have been using the wild species of mammals and birds in their locations. Categories of its uses were determined. Among of all defined categories, the most predominant one was the use of wild animals for human consumption, traditional medicine and commercial trades. In contrast, relatively few species, in whole or part, were still used for rituals, and ornamental due to the loss of some ancestral knowledge and traditions on these uses. Revaluing this set of knowledge and uses has a great importance in the conservation of birds and mammals as well as the ecological knowledge of local populations in the Peruvian Amazon

**The genus Attalea (Arecaceae) of Bolivia: regional ecologic system affinities**

La documentación de las especies neotropicales de la familia Arecaceae, basada en los recientes aportes a su taxonomía y su relación con los paisajes naturales, actualiza los patrones espaciales a los cuales se adaptan en su rango de distribución. En este caso se relevan 121 registros de especímenes de las 11 especies del género Attalea de Bolivia y su relación con 30 sistemas ecológicos que aproximan su ámbito de distribución a nivel regional. Para ello se sistematizó, se verificó y corrigieron las coordenadas geográficas vs. localidades de todos los especímenes coleccionados del género Attalea con el fin de cotejarlos con los sistemas ecológicos, utilizando las herramientas del ArgGis. Seguidamente elaboramos un dendrograma (especies vs. sistemas ecológicos) utilizando el método de distancia mínima en el programa R. El análisis de la relación de las especies con los sistemas ecológicos resalta una especie que no compone al sudoeste amazónico: A. eichleri y que procede de sistemas ecológicos del Cerrado. Entre las especies de Attalea amazónicas, A. blepharopus (endémica de Bolivia) se aísla de las demás y el resto subagrupa a especies según su presencia afín en bosques y sabanas, además del subandino y aluvial, como es para A. princeps, que se encuentra en 17 sistemas (57%). Ocho especies de Attalea son comunes con Perú y 10 con Brasil. Es importante relacionar la agrupación jerárquica de las especies de Attalea con los sistemas ecológicos en función a dinámicas paisajísticas para documentar sus patrones de espacio y también para su conservación.

The documentation of the Neotropical species of the Arecaceae family, based on the recent contributions to its taxonomy and its relationship with natural landscapes, updates the spatial patterns to which they adapt in their range of distribution. In this case 121 records of specimens of the 11 species of the genus Attalea of Bolivia and their relationship with 30 ecological systems that approximate their scope of distribution at regional level are released. To this end, the geographical coordinates were systematized, verified and corrected. Localities of all the specimens collected from the genus Attalea in order to compare them with ecological systems, using the ArgGis tools. We then elaborate a dendrogram (species vs. ecological systems) using the minimum distance method in the R program. The analysis of the relation of the species with the ecological systems highlights a species that does not compose to the southwest amazon: A. eichleri and that is native to ecological systems of the Cerrado. Among the SW Amazonian Attalea species, A. blepharopus (endemic to Bolivia) is isolated from the others and the rest subgroup species according to their presence in forests and savannas, in addition to the subandean and alluvial, as it is for A. princeps, which is found in 17 systems (57%). Eight species of Attalea are common with Peru and 10 with Brazil. It is important to relate the hierarchical grouping of the Attalea species with ecological systems in function of landscape dynamics to document their space patterns and also for their conservation.

**Mutations in the Determining Region of Quinolone Resistance (QRDR) of the gyrA gene of eisseria gonorrhoeae present in clinical samples of men who have sex with men**

Neisseria gonorrhoeae resistente a quinolonas (QRNG) es un problema muy importante en salud pública por su rápido desarrollo de resistencia a quinolonas, por lo que la OMS recomienda reforzar la vigilancia de resistencia antimicrobiana para orientar el tratamiento. En Perú hay pocos reportes sobre vigilancia de QRNG, y menos aún trabajos relacionados a patrones de mutación. Este estudio busca encontrar mutaciones en la Región Determinante de Resistencia a Quinolonas (QRDR) del gen gyrA de N. gonorrhoeae a partir de 1096 muestras clínicas de orina e hisopados, colectadas entre 2012 y 2013, provenientes de 367 hombres que tuvieron sexo con hombres (HSH). Se detectaron 58 muestras positivas a N. gonorrhoeae en 45 HSH mediante el ensayo de APTIMA Combo 2, y 11 muestras positivas a QRNG de 11 HSH mediante PCR en Tiempo Real. Las bacterias resistentes a quinolonas fueron analizadas por secuenciamiento e identificamos que el patrón frecuente de mutación fue la doble mutación de Ser-91 a Phe y de Asp-95 a Gly en la QRDR del gen gyrA. En conclusión, estas dobles mutaciones en la secuencia QRDR del gen gyrA indicarían la presencia de N. gonorrhoeae con fenotipo resistente a quinolonas en muestras clínicas de HSH de Lima-Perú, resaltando que éste es el primer estudio hecho en Perú sobre esta población de alto riesgo

Neisseria gonorrhoeae resistant to quinolones (QRNG) becomes a very important problem in public health due to the development of rapid resistance to quinolones, which is why the WHO recommends reinforcing antimicrobial resistance monitoring to guide treatment. In Peru there are few reports on QRNG surveillance and still less work related to mutation patterns. This study aims to find mutations in the Determinant Region of Quinolone Resistance (QRDR) of the gyrA gene of N. gonorrhoeae from 1096 clinical samples of urine and swabs from 367 men who have sex with men (MSM) collected during the period 2012-2013. We detected 58 N. gonorrhoeae positive samples in 45 MSM by means of the APTIMA Combo 2 assay, and 11 QRNG positive samples of 11 MSM by Real Time PCR. The quinolone-resistant bacteria were analyzed by sequencing and we identified that the frequent mutation pattern was the double mutation of Ser-91 to Phe and Asp-95 to Gly in the QRDR of the gyrA gene. In conclusion, these double mutations in the QRDR sequence of the gyrA gene would indicate the presence of N. gonorrhoeae with quinolone resistant phenotype in clinical samples of MSM from Lima-Peru, noting that this is the first study done in Peru on this high population risk

**Detection of rhlAB, rhlR and rhlR genes in Pseudomonas aeruginosa natives overproducers of ramnolipids**

Se realizó la caracterización molecular de los genes asociados a la producción de ramnolípidos (RL), en 61 cepas bacterianas de la colección del Laboratorio de Microbiología y Biotecnología Microbiana (LAMYBIM) de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Perú. Las cepas provenian de entornos peruanos contaminados con hidrocarburos y fueron catalogadas como sobreproductoras de RL(n= 21), productoras de RL (n=20) y no productoras de RL (n= 20). Las 61 cepas fueron identificadas bioquímicamente con el sistema API 20 NE. La identificación molecular se realizó empleando el gen del RNAr 16S. Se encontró que Pseudomonas aeruginosa fue el microorganismo de mayor prevalencia en los estratos sobreproductores y productores de ramnolípidos. Además, se encontraron: Burkholderia cepacea, Pseudomonas fluorescens, Aeromonas hydrophila y Chryseobacterium indologenes. Los microorganismos no productores de ramnolípidos, también fueron caracterizados bioquímicamente. Mediante amplificación de PCR y electroforesis en gel de agarosa, estandarizados por la UNAM, se evidenció que las cepas seleccionadas poseen los genes: rhlA, rhlB, rhlR y rhlC. Para el secuenciamiento de la región génica rhLABR, se seleccionaron cuatros especies: Pseudomonas aeruginosa T2X-2, Pseudomonas aeruginosa IIIT1P2, Pseudomonas aeruginosa 6K-11 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, siguiendo metodología estandarizada por la UNAM y fueron comparados con Pseudomonas aeruginosa PAO1. Nuestros resultados muestran que los genes estudiados en las cepas seleccionadas son sinónimas de sus homólogos en la cepa patrón Pseudomonas aeruginosa PAO1, por lo que las diferencias genotípicas que expliquen la sobreproducción de ramnolípidos deberían hallarse en otros marcadores moleculares no cubiertos en el presente estudio.

Genes associated to rhamnolipids production were molecularly characterized in 61 bacterial strains from LAMYBIM bacterial collection (Laboratorio de Microbiología y Biotecnología Microbiana, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Perú). Strains were isolated from peruvian environments hydrocarbons polluted and were classified as RL overproducers (n= 21), RL producers (n = 20) and non-producers (n = 20) producers. Molecular identification using the 16S rRNA gene was preceded by the biochemical identification of 61 strains selected with the API 20 NE system. Pseudomonas aeruginosa was the most prevalent strain of the RL overproducers and RL producers. Species such as Burkholderia cepacea, Pseudomonas fluorescens, Aeromonas hydrophila and Chryseobacterium indologenes, were found too. In the same way, non-producers microorganisms were also characterized. The PCR amplification and agarose gel electrophoresis techniques, standarized by the UNAM laboratory, showed that the selected strains had the genes: rhlA, rhlB, rhlR and rhlC. For the sequencing of the rhLABR gene region, four strains were selected: Pseudomonas aeruginosa T2K2, Pseudomonas aeruginosa III T1P2, Pseudomonas aeruginosa 6K-11 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, applying the methodology standardized by the UNAM and were compared with Pseudomonas aeruginosa PAO1. Our results show that the genes studied in the selected strains are synonymous with their homologues in Pseudomonas aeruginosa PAO1 standard strain. Therefore, genotypical differences that explain the overproduction of rhamnolipid might be found in other molecular markers not covered in this study.

**Biochemical study of venom sea anemone Phymactis papillosa (Actiniidae)**

En este trabajo se ha estudiado bioquímicamente el veneno de Phymactis papillosa, colectadas en la bahía de Ancón. El veneno fue obtenido mediante shock hipotónico y luego se liofilizó. El análisis electroforético del veneno soluble mostró la presencia de 5 bandas proteicas con pesos moleculares entre 5 y 25.1 kDa. El veneno soluble fue fraccionado por cromatografía de filtración en una columna de Sephadex G-50, obteniéndose cuatro picos de proteína (I, II, III y IV). Tanto en el veneno soluble como en las fracciones colectadas se midió actividad de proteasa, fosfolipasa, hialuronidasa, fosfatasa ácida y fosfatasa alcalina; así como, actividad hemolítica y neurotóxica. Se encontró actividad proteolítica sobre caseína, en el veneno soluble y en los picos I y III. No se detectó actividad de fosfolipasa, hialuronidasa, fosfatasa ácida y fosfatasa alcalina. La actividad hemolítica, ensayada sobre eritrocitos humanos, se encontró en el veneno soluble y en el pico II. Finalmente, tanto el veneno soluble como el pico III mostraron ser neurotóxicos al ser inyectados en ratones albinos vía intraperitoneal. Se concluye que el veneno soluble de P. papillosa tiene actividad proteolítica, hemolítica y neurotóxica

In this work, the poison of Phymactis papillosa collected in Ancón bay has been studied biochemically. The venom was obtained by hypotonic shock and then lyophilized. Electrophoretic analysis of the soluble poison showed the presence of 5 protein bands with molecular weights between 5 and 25.1 kDa. The soluble venom was fractionated by filtration chromatography on a Sephadex G-50 column, yielding four protein peaks (I, II, III and IV). In the soluble venom and collected fractions was measured protease activity, phospholipase, hyaluronidase, acid phosphatase and alkaline phosphatase; as well as hemolytic and neurotoxic activity. Proteolytic activity on casein was found in the soluble venom and peaks I and III. Was not detected phospholipase activity, hyaluronidase, acid phosphatase and alkaline phosphatase. Hemolytic activity on human red cells tested, was found in the soluble venom and peak II. Finally, the soluble venom as the peak III showed be neurotoxic when injected into white mice intraperitoneally. It is concluded that the soluble venom of P. papillosa has proteolytic, hemolytic and neurotoxic activity

**Photographic record of andean cat (Leopardus jacobita) in Salinas y Aguada Blanca National Reserve, Peru**

El gato andino es uno de los felinos más raros de América del Sur, habita en los altos Andes de Argentina, Bolivia, Chile y Perú; se encuentra la categoría de En Peligro según la UICN. En Perú, se ha reportado en nueve departamentos y en cuatro áreas naturales protegidas; presentamos dos registros para la Reserva Nacional Salinas y Aguada Blanca, de principios de 2015; la primera cerca del pueblo de Pillones y la segunda cerca de Viscachani. Siendo las primeras imágenes para la Reserva Nacional Salinas y Aguada Blanca, registros anteriores fueron de pieles y ADN fecal. Ambos registros son los más recientes para Perú y las primeras imágenes completas de gato andino.

The Andean cat is a rarest wildcat of South America, categorized as Endangered by IUCN. Its habitat is in the high Andes of Argentina, Bolivia, Chile and Peru. In Peru, it has been reported in nine departments, and in four natural protected areas. We present two records from Salinas y Aguada Blanca National Reserve from early 2015, in two different locations. The first was near the Pillones village and the second near to Viscachani village; those are the first image record for Salinas y Aguada Blanca National Reserve; previous records were from skins and fecal DNA. Both records are the most recent from Peru and the very firsts complete images of full Andean cats live in the county.

**First record of cannibalism in the Lima leaf-toed gecko, Phyllodactylus sentosus (Reptilia, Phyl-lodactylidae)**

Se reporta un caso de canibalismo en el gecko de Lima, Phyllodactylus sentosus Dixon & Huey, 1970 donde un macho adulto devoró a un juvenil. Tras una búsqueda de literatura, no se encontró casos reportados en otras especies del mismo género, por lo que se considera que este es el primer reporte de canibalismo en Phyllodactylus

We report a case of cannibalism for the Lima leaf-toed gecko, Phyllodactylus sentosus, in which an adult male devoured a juvenile. No reported cases were found in other species of the same genus, so we consider that this is the first report of cannibalism in Phyllodactylus

**Finding of fimbriocercus of Taenia sp. (Cestoda: Taeniidae) in the yellow-rumped leaf-eared mouse (Phyllotis xanthopygus)**

En el presente trabajo se describe metacestodos colectados del ratón orejón de ancas amarillas (Phyllotis xanthopygus) provenientes del distrito de Marangani en Cusco, Perú. Un total de 6 metacestodos fueron estudiados e identificados como fimbriocercos de Taenia sp. Los fimbriocercos presentaron un cuerpo ligeramente alargado y esférico, con una masa de tejido denso y de color blanquecino lechoso. Cada fimbriocerco presento un escólex invaginado el cual tenía 4 ventosas y un róstelo armado con 22 a 25 pares de ganchos. El estudio demuestra que el ratón P. xanthopygus participa como hospedero intermediario para una especie de Taenia en la sierra sur del Perú.

Metacestodes were collected from the peritoneal cavity of the yellow-rumped leaf-eared mouse (Phyllotis xanthopygus) from the Marangani district in Cuzco, Peru. A total of 6 metacestodes were studied and identified as fimbriocercus of Taenia sp. The fimbriocercus had a slightly elongated and spherical body, with a mass of dense tissue and whitish milky color. Each fimbriocercus had an invaginated scolex which had 4 suckers and a rostellum armed with 22 to 25 pairs of hooks. This study shows that the mouse P. xanthopygus participates as an intermediate host for a Taenia species in the southern highlands of Peru.

In vitro multiplication and somatic embryogenesis of Perezia pinnatifida (Asteraceae) medicinal Andean plant

Se presentan los procedimientos para la propagación in vitro de Perezia pinnatifida (Humb. & Bonpl.) Wedd., conocida como "valeriana". Se utilizaron las metodologías de multiplicación de brotes y embriogénesis somática indirecta. El medio de cultivo basal para todas las etapas fue Murashige y Skoog a mitad de sales, suplementado con sacarosa 2.0%, phytagel 0.3% y pH 5.67; y fue usado con o sin fitohormonas en los diferentes tratamientos. Los suplementos hormonales fueron: para la multiplicación de brotes BAP 1.0 mg.L-1 + ANA 0.01 mg.L-1 ó BAP 1.0 mg.L-1; para la inducción de callos embriogénicos ANA ó 2,4-D (1.0 mg.L-1 y 2.0 mg.L-1); y para la germinación de embriones BAP (0.5 y 1.0 mg.L-1) o BAP 0.5 mg.L-1 + ANA 0.05 mg.L-1. El mayor número de brotes se obtuvo en el medio suplementado con BAP 1.0 mg.L-1. En la embriogénesis somática, ANA a 1.0 mg.L-1 indujo mayor área de callos embriogénicos, y BAP a 0.5 mg.L-1 permitió mayor germinación de los embriones somáticos

This work inform on in vitro propagation of the "valeriana" Perezia pinnatifida (Humb. & Bonpl.) Wedd. Shoot multiplication and indirect somatic embryogenesis methodologies were performed. The basal culture medium for all stages was Murashige and Skoog, middle of salts supplemented with 2.0% sucrose, 0.3% phytagel and pH 5.67; the treatments were prepared with or without phytohormones. The hormonal supplements for the shoot multiplication were: BAP 1.0 mg.L-1 + ANA 0.01 mg.L-1, and BAP 1.0 mg.L-1; for embryogenic callus induction were: ANA or 2,4-D (1.0 mg.L-1 and 2.0 mg.L-1); and for the embryo germination were: BAP (0.5 and 1.0 mg.L-1) or BAP 0.5 mg.L-1 + ANA 0.05 mg.L-1. BAP 1.0 mg.L-1 produced the higher number buds. For somatic embryogenesis, ANA 1.0 mg.L-1 induced a greater area of embryogenic callus, and BAP 0.5 mg.L-1 allowed major germination of the somatic embryos