INTRODUCCIÓN

El modo más común de transmisión de Salmonella es a través de la ruta fecal-oral, cuando se ingieren alimentos contaminados (^{Smith et al., 2018}). Sin embargo, el mayor número de brotes de Salmonella de la última década está relacionado con las aves de corral como reservorio principal (^{EFSA, 2018}, ²⁰¹⁹). El humano también puede ser portador de Salmonella a nivel intestinal, aunque de menor importancia, de allí que el rol de los animales en las infecciones humanas es de relevancia (^{Cummings et al., 2012}). Se tuvo un brote en 2010 en EE. UU. con más de 2000 casos reportados en personas por efecto de la contaminación en la cadena de producción de alimentos, lo que llevó a un retiro masivo de más de medio billón de huevos (^{Cummings et al., 2012}).

Los serovares de Salmonella que causan enfermedades están influenciados por la distribución geográfica del serovar o patogenicidad de la cepa. Según los CDC, los principales serovares de Salmonella que son responsables de la mayoría de los brotes en los Estados Unidos incluyen principalmente serovares no tifoideos de Salmonella (SNT) como: Enteritidis, Typhimurium, Newport, Infantis, Thompson, Mississippi (^{Bhunia, 2018}). En la Unión Europea serovares de SNT como Enteritidis (48.7%), Typhimurium (12.4%), Typhimurium monofásico (11.1%), Infantis (12.4%) son los serovares más importantes en salud pública, reportados a partir de 694 brotes transmitidos por los alimentos en 2020 (^{EFSA, 2021b}).

En 2014 se reportó en Perú una prevalencia de 29.8% de serovares de SNT en la producción primaria avícola, donde se identificaron seis serovares: Infantis (91.4%), Senftenberg (2.9%), Enteritidis (2.1%), Derby (1.4%) y Agona (0.7%), siendo en las granjas de pollo de engorde (48.7%) seguida de las granjas de ponedoras comerciales (13.2%) donde se observó la mayor prevalencia (^{Valderrama et al., 2014}). A nivel de faenamiento de pollo de engorde se hallaron prevalencias del 25.6% en carcasas evisceradas en centros de beneficios clandestinos en Lima (^{Zambrano et al., 2013}). En 2022, el Servicio Nacional de Sanidad Agraria del Perú (SENASA) encontró un incremento en los aislados de SNT en carne de pollo (12.3%; 20/163) de muestras frente al 1.4% (3/213) de muestras positivas de 2020, siendo Lima el departamento con mayor porcentaje de aislados (30%) (^{SENASA, 2022}).

En el estudio de ^{Parra-Payano et al. (2019}) se revisaron los aislados de Salmonella invasiva a partir de 70 casos en niños menores de 4 años y ancianos con síntomas de fiebre, diarrea y decaimiento de un hospital de Lima, encontrando que el 85.7% de los casos se debió a Salmonella no tifoidea.

La subtipificación bacteriana es una herramienta que se usa para discriminar entre cepas bacterianas; lo que permite estudios filogenéticos, investigación de brotes y la vigilancia de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA). Dentro de los métodos de subtipificación que se han utilizado para Salmonella, la electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) ha demostrado superioridad y poder de permanencia en comparación con otros métodos que se desarrollaron al mismo tiempo (^{PulseNet, 2017}). PFGE permite determinar la relación de casos individuales, detectar, establecer brotes y determinar el vínculo entre la salmonelosis humana y el consumo de alimentos de origen animal (^{Khaitsa y Doetkott, 2012}). Por ello, el objetivo del presente estudio fue caracterizar molecularmente mediante PFGE los aislados de serovares de Salmonella no tifoidea provenientes de muestras humanas y productos aviares para determinar la relación existente entre ellos mediante porcentajes de similitud, de manera de poder sugerir mejores estrategias de control y prevención de la diseminación de esta bacteria, aportando en el Programa de Vigilancia y Control de ETA.

MATERIALES Y MÉTODOS

RESULTADOS

Perfiles de PFGE de Salmonella Typhimurium

Los análisis de restricción realizados con la enzima XbaI distribuyeron los siete aislados de Salmonella Typhimurium en cinco pulsotipos con un porcentaje mayor o igual a 90% de similaridad: Typ1, Typ2, Typ3, Typ4 y Typ5. Los pulsotipos Typ1, Typ2, Typ3 y Typ5 son todos de origen aviar y están representados por un único aislado cada uno. El pulsotipo Typ4 contiene salmonelas de origen humano y aviar. Los aisladosA4 (carcasa de broiler) y H1 (heces humanas) son indistinguibles (similaridad del 100%). Asimismo, el aislado H1 está relacionado con el aisladoA5 (Hisopado cloacal de broiler) con un 96% de similaridad.

Perfiles de PFGE de Salmonella Kentucky

Los análisis de restricción realizados con la enzima XbaI distribuyeron los cuatro aislados de Salmonella Kentucky en tres pulsotipos: Ken1, Ken2 y Ken3 con un porcentaje mayor o igual a 90% de similaridad. Los pulsotipos Ken1 y Ken2 (de origen aviar) están representados por un único aislado cada uno. El pulsotipo Ken3 contiene salmonelas de origen humano y aviar que se encuentran relacionadas con un porcentaje de 92.9 % de similaridad.

Perfiles de PFGE de Salmonella Enteritidis

Los análisis de restricción realizados con la enzima XbaI distribuyeron los ocho aislados de Salmonella Enteritidis en cuatro pulsotipos con un porcentaje mayor o igual a 90% de similaridad: Ent1, Ent2, Ent3 y Ent4. Los pulsotipos Ent1 (de origen aviar) y Ent3 (de origen humano) están representados por dos aislados cada uno. El pulsotipo Ent4 contiene solo salmonelas de origen humano y está representado por tres aislados, que son indistinguibles (similaridad del 100%). Por último, el pulsotipo Ent2 está representado por un único aislado de origen aviar. Se observan porcentajes de similaridad de hasta 96% entre los aislados aviares, así como similaridades de hasta 100% entre los aislados humanos. No se observó relación entre los aislados aviares y humanos que mostraron una similaridad de 68.5%.

Perfiles de PFGE de Salmonella Infantis

Los análisis de restricción realizados con la enzima XbaI distribuyeron los 30 aislados de Salmonella Infantis en nueve pulsotipos con un porcentaje mayor o igual a 90% de similaridad: Inf1-Inf9 (Figura 1). Se observó que los pulsotipos Inf2, Inf4, Inf5 e Inf8 agrupaban aislados de origen humano y aviar. El pulsotipo Inf2 están representados por cuatro aislados: H8 y H9 (origen humano), A18 yA19 (origen aviar). Los aislados H8 (heces humanas) y A18 (carcasa de broiler) fueron indistinguibles (similaridad del 100%). El pulsotipo Inf4 está representados por cuatro aislados: H10 (origen humano), A23, A24 y A25 (origen aviar). Los aislados A23 (cáscara de huevos) y H10 (heces humanas) fueron indistinguibles (similaridad del 100%). El pulsotipo Inf5 estuvo representado por cuatro aislados: H11 y H12 (origen humano), A26 y A27 (origen aviar). Los aislados H11 (heces humanas), A26 (carcasa de broiler) y A27 (cáscara de huevos) fueron indistinguibles (similaridad del 100%). El pulsotipo Inf8 estuvo representado por tres aislados: H13 y H14 (origen humano); y A31 de origen aviar.

Figura 1. Análisis de PFGE de aislados de Salmonella Infantis obtenidos de casos clínicos humanos y productos avícolas 

DISCUSIÓN

La salmonelosis es la tercera causa de muerte en todo el mundo; por lo tanto, Salmonella enterica continúa siendo considerada como uno de los más importantes patógenos transmitidos por los alimentos. Los serovares de Salmonella enterica no tifoideos (SNT) son generalistas; es decir, tienen la capacidad de infectar tanto a los humanos como a los animales. La salmonelosis humana se relaciona principalmente con el consumo de productos animales contaminados (^{Ghoddusi et al., 2019}). Las aves de corral y sus subproductos (como carne y huevos) son conocidos reservorios de estas bacterias (^{Moulana y Asgharpour, 2022}). Los síntomas causados por SNT son principalmente diarrea en humanos, pero en algunos casos pueden llegar a causar infecciones invasivas similares a las formas tifoideas (^{Ferrari et al., 2019}). Los reportes anuales de salmonelosis humana confirmadas indican que los cinco serovares más prevalentes en orden decreciente son Enteritidis, Newport, Typhimurium, Javiana y Typhimuriummonofásico4,[5],12:i:» en los Estados Unidos (^{CDC, 2016}) y Enteritidis, Typhimurium, Typhi-murium monofásico 1,4,[5],12:i», Infantis y Newport en la Unión Europea (^{EFSA, 2018}).

En el presente estudio se evaluaron siete (n=7) aislados de Salmonella Typhimurium. Este serovar presenta una alta frecuencia en aves de corral y se convierte en una fuente de transmisión importante para el humano. De acuerdo a los informes de los CDC (²⁰¹⁶) y EFSA (²⁰¹⁸) es el segundo serovar de importancia en Europa y ocupa el tercer lugar en los Estados Unidos. En el presente estudio se observaron aislados de origen humano y pollo broiler (carcasa e hisopados de cloaca) relacionados con una similaridad entre el 96 y 100%. Resultados similares fueron obtenidos por ^{Henry et al. (2015}), donde los aislados aviares (broilers) y aislados humanos de muestras clínicas de S. Typhimurium estuvieron altamente relacionados con porcentajes de similaridad (90.4 y 100%). Este serovar se ha generalizado en una amplia variedad de alimentos y por ello está involucrado en casos de brotes, donde los productos aviares (carne y huevos) están implicados en el 10.4% del total de casos en todo el mundo (^{Knight-Jones et al. (2010}) y ^{Ferrari et al. (2019}).

Salmonella Kentucky no es uno de los principales serovares implicados en la salmonelosis humana y animal, pero se reportan casos clínicos humanos. Así, se informó su compromiso en el 0.2% de los casos de salmonelosis en los Estados Unidos entre 2003 y 2013, mientras que en Europa fue el séptimo serovar aislado con mayor frecuencia en 2011 (^{Haley et al., 2019}). Además, fue el serovar identificado con mayor frecuencia en pollos broiler entre 1998 y 2013 por el Servicio de Inspección y Seguridad Alimentaria del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (USDA, FSIS) (^{FSIS, 2013}), lo que representa entre el 25 y 51% de todos los aislados (^{Haley et al., 2019}). En el presente estudio, se encontró en el pulsotipo Ken3 de S. Kentucky que los aislados H2 (heces humanas) y A9 (hisopado cloacal de carcasa de broiler) están relacionados con un 92.9 % de similaridad. Sobre estos hallazgos, si bien es cierto la relación de este serovar con brotes de salmonelosis en humanos es poco común, la posibilidad existe debido a los altos niveles de aislamiento en aves y subproductos (^{Ferrari et al., 2019}).

Los aislados aviares de S. Enteritidis obtenidos en el presente estudio a partir de huevos (yema) y de la producción primaria (cama de ave) presentaron porcentaje de similaridad de hasta 96%. De la misma manera los aislados humanos presentaron similaridades de hasta 100% entre ellos. Estos resultados muestran que este serovar es altamente clonal, tal como fue observado por ^{Rahmani et al. (2013}), donde encontraron patrones indistinguibles entre los aislados de S. Enteritidis de origen aviar. Asimismo, ^{Quino et al. (2020}) encontraron una relación filogenética de dos clados bien definidos entre los aislados de S. Enteritidis de origen humano en Perú entre los años 2000-2018.

Los casos humanos de S. Enteritidis están más comúnmente relacionados con el consumo de huevos y aves de corral contaminados (^{Howard et al., 2012}; ^{Long et al., 2017}). Por ejemplo, ^{Mütak et al. (2021)} encontraron perfiles de S. Enteritidis de origen humano y origen aviar con una similaridad mayor al 99%. Sin embargo, a pesar de la alta homogeneidad genética observada en los aislados de cada origen por separado (aviar o humano), no se encontró en el presente estudio una relación importante entre los pulsotipos de Salmonella Enteritidis de origen humano con los de origen aviar (yema de huevo y cama de ave). Tal como lo indica ^{EFSA (2021a)}, existen otras fuentes importantes de salmonelosis como los productos de panadería, carne de cerdo y sus productos y alimentos mixtos. También se le ha identificadoen40% de los brotes de ETA asociado a productos lácteos (^{EFSA, 2019}). La frecuencia de ETA relacionadas con verduras y frutas también está en aumento (^{Wan et al. 2020}).

Salmonella Infantis es el cuarto serovar más importante asociado a enfermedades humanas (^{Montoro et al., 2023}) y muchos de estos aislados se asocian a perfiles de multidrogoresistencia (^{Quino et al., 2019}). Existe evidencia que el serovar Infantis está fuertemente ligado al pollo broiler y sus derivados (^{Montoro et al., 2023}). Los pulsotipos de Salmonella Infantis encontrados en el presente estudio estuvieron altamente relacionados. Así, los pulsotipos de origen humano tuvieron similaridades mayores al 93% y los de origen aviar superiores al 92%, tal como lo menciona ^{Rahmani et al. (2013}). En otros estudios, ^{Vinueza-Burgos (2016}), ^{Nógrády et al. (2012}), ^{Taheri et al. (2018}) y ^{Pate (2019}) encontraron altas similaridades entre los aislados de S. Infantis provenientes de carne y heces de pollos broiler y huevos de ponedoras. Esto se debe posiblemente a que Salmonella Infantis tiene un ancestro reciente, con un número limitado de cambios evolutivos importantes acumulados en ese momento (^{Hauser et al., 2012}; ^{Rahmani et al., 2013}).

Se observó que los pulsotipos de origen humano están altamente relacionados con los pulsotipos encontrados en carcasa de broilers (similaridad de 95.5 al 100%), similaridad que han sido reportadas en otros estudios. Así, ^{Raseta et al. (2015}) encontraron pulsotipos con una similaridad del 100% entre aislados de S. Infantis de la piel de carcasa de broilers y humanos infectados. Esta alta homogeneidad sugiere el resultado de la expansión de un mismo clon de S. Infantis entre ambas matrices (^{Pate et al., 2019}).

CONCLUSIONES

Se muestra una alta relación genética entre algunos aislados de origen aviar y aislados clínicos humanos de los serovares Typhimurium, Kentucky e Infantis, lo cual demuestra la transmisión de Salmonella de productos aviares a humanos en la región. En ese sentido, las entidades responsables como MINSA y SENASA deben implementar acciones de vigilancia y monitoreo más rigurosas en toda la cadena de producción; y programas para guiar y sensibilizar a los consumidores, los manipuladores de alimentos y los avicultores.

Los aislados de origen aviar y humano del serovar Enteritidis poseen pulsotipos que no se relacionan o corresponden a un grupo clonal diferente.