ARTÍCULO ORIGINAL

 

Vibrio cholerae No O1 en muestras de aguas no cloradas consumidas por pobladores de las localidades de Santa y Coishco (Ancash), 2003 - 2004

 

Ana García P¹; Leoncio Pedreros R¹; Blanca Huapaya²

¹ Hospital de Apoyo La Caleta. Dirección Regional de Salud Ancash. Chimbote, Perú.
² Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud. Lima, Perú.

 

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RESUMEN

Objetivo: Identificar la presencia de Vibrio cholerae en muestras de agua no cloradas para consumo humano en las localidades de Santa y Coishco. Materiales y métodos: Entre julio de 2003 a junio de 2004 se tomaron muestras de agua, en forma semanal, provenientes de siete pozos con bomba manuable y de seis pozos con reservorio. A cada muestra de agua se le midió in situ el cloro residual mediante un comparador de cloro Hatch, método colorimétrico, usando para ello las pastillas DPD 1. En las muestras con cloro <0,05mg/L se realizó el cultivo según los manuales de procedimientos del Instituto Nacional de Salud (INS, Lima). Las cepas aisladas se enviaron al INS para confirmación diagnóstica y pruebas serológicas. Resultados: Se incluyeron 308 muestras de agua para consumo humano en ambos distritos (201 de pozos con bomba manuable y 107 con reservorio). Se realizó el aislamiento en 70(22,7%) muestras: Aeromonas caviae 34(11,0%), Aeromonas hidrophyla 17(5,5%) y Vibrio cholerae No O1 19(6,2%), no se encontró V. cholerae del serotipo O139. El Vibrio cholerae No O1 se aisló en 11(5,5%) muestras de pozos con bomba manuable y en 8(7,4%) pozos con reservorio, respectivamente. Conclusión: El agua de consumo humano proveniente de pozos tubulares representa un reservorio potencial para bacterias como Aeromonas y Vibrio cholerae, resaltando la necesidad de realizar la desinfección correspondiente de ésta antes de su consumo. 

Palabras clave: Vibrio cholerae no-O1; Aeromonas; Aguas subterráneas; Consumo de agua (fuente: DeCS BIREME).

 

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ABSTRACT

Objective: Identify the presence of Vibrio cholerae in unchlorinated water samples intended for human consumption in locations of Santa and Coishco. Materials and methods: Between July 2003 and June 2004, water samples were collected weekly from seven water wells with manual pumps and from six wells with reservoir. Residual chlorine levels were measured at the site using a Hatch chlorine comparing tool, chlorimetric method, using DPD 1 pills. Well samples were cultured according to National Institute of Health (INS Lima) standard operating procedures. Isolated strains were submitted to the INS for diagnostic confirmation and serologic testing. Results: A total of 308 drinking water samples from both districts were included (201 from wells with manual pumps and 107 with reservoir). Isolates were obtained from 70(22,7%) samples. Aeromonas caviae 34(11,0%), Aeromonas hidrophyla 17(5,5%) and Vibrio cholerae non-O1 19(6,2%) were detected; V. cholerae O139 was not found. Vibrio cholerae non-O1 was isolated in 11(5,5%) samples from manual pump wells and 8(7,4%) from wells with reservoirs. Conclusions: Drinking water from tubular wells represents a potential reservoir for bacteria, such as Aeromonas and Vibrio cholerae, highlighting the need for disinfection before use.

Keys word: Vibrio cholerae non-O1; Aeromonas; Groundwaters; Water consumption (source: DeCS BIREME). 

 

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INTRODUCCIÓN

En 1991 el cólera golpeó a Latinoamérica luego de aproximadamente 100 años de ausencia1,2. Esta enfermedad se dispersó tan rápidamente en el Perú que, según los resultados de coprocultivos confirmados en 1995, los casos de diarrea acuosa fueron ocasionados en 52,7% por Vibrio cholerae serovar Ogawa3,4.

El V. cholerae se clasifica en dos serogrupos O1 y No O1, dentro del serogrupo O1 existen tres serotipos (Ogawa, Inaba e Hikojima) y dos biotipos (Clásico y El Tor), en el grupo No O1 se han identificado hasta 154 variedades antigénicas, algunas de ellas responsables también de casos de cólera, como el serotipo O1395,6,7.

A través de los años se ha logrado un mejor control de la enfermedad diarreica aguda (EDA) en nuestro país, las tasas de morbi-mortalidad han ido disminuyendo y el grado de saneamiento ambiental ha ido mejorando, reduciendo los reportes de aislamientos de V. choleare7.

Sin embargo, en ciertas zonas del país la situación es diferente, tal es el caso de la jurisdicción de la Unidad Territorial de Salud (UTES) La Caleta, ubicada en Chimbote, Ancash, ciudad de la costa del Perú, donde la frecuencia de casos de EDA durante los años 2001 y 2002 fue alta: 18112 y 17951 casos, respectivamente. Además, según los coprocultivos realizados en dicha UTES, desde el año 1999 el Vibrio cholerae No O1 fue identificado como otro agente causal de EDA (datos estadísticos obtenidos en el Área de Microbiología del Departamento de Laboratorio Clínico del Hospital La Caleta Chimbote).

Por otro lado, pese a la promoción del consumo de agua segura por parte del sector salud, hasta el año 2003 el Laboratorio de Microbiología de dicha UTES ha reportado muestras de agua no cloradas con un alto número de coliformes totales, las cuales en su mayoría provienen de los distritos Santa y Coishco. En estos distritos algunas localidades se proveen de agua para consumo humano a través de pozos tubulares, que son abastecidos por las aguas subterráneas que contienen cierto grado de salinidad, necesaria para el crecimiento de algunas especies de Vibrio cholerae6.

Un tipo de pozos tubulares son los construidos artesanalmente, provistos de una bomba manual para extraer el agua subterránea desde aproximadamente 11 metros de profundidad, no requieren personal dedicado, pero no permiten la cloración del agua (pozo con bomba manuable). Otro tipo son los pozos subterráneos provistos de motores con capacidad de extraer agua a unos 50 metros de profundidad y poseen reservorios ubicados a una altura aproximada de 10 a 15 metros, y requieren personal dedicado para su mantenimiento y cloración del agua (pozo con reservorio).

Dentro de las actividades para el control de la diarrea y el cólera, el Laboratorio de Microbiología y la Unidad de Saneamiento Ambiental de la UTES La Caleta realizan en forma conjunta el control del agua de consumo humano directo en casas y reservorios, midiendo la presencia de cloro residual y realizando cultivos bacteriológicos para la detección de coliformes fecales y totales, restringiendo la búsqueda de Vibrio cholerae sólo a las aguas del mar, donde se encuentra mayoritariamente8.

Por lo expuesto, a fin de contribuir al planteamiento de estrategias donde las comunidades participen enel control de sus servicios como la cloracion de agua, decidimos investigar la presencia de Vibrio cholerae en muestras de agua no cloradas para consumo humano en las localidades de Santa y Coishco.

MATERIALES Y METODOS

Estudio descriptivo prospectivo, realizado en localidades de los distritos de Santa y Coishco, de la provincia de Santa, departamento de Ancash, en la costa central del Peru (Figura 1); durante un periodo de 12 meses, de julio de 2003 a junio de 2004. Los distritos tienen una poblacion de 32 234 habitantes, y en sus respectivos centros de salud acuden un promedio de 700 pacientes con sintomas diarreicos al ano.

 

Para la muestra del estudio, se seleccionaron arbitrariamente los pozos de las localidades que segun estudios bacteriologicos realizados por la Direccion Ejecutiva de Saneamiento Ambiental tenian agua contaminada con mayor frecuencia, escogiendo para el seguimiento seis pozos tubulares de cada tipo. En cada pozo tubular se tomo una muestra de agua con las respectivas condiciones de esterilidad, en forma semanal, durante un ano. A cada muestra de agua se le midio in situ el cloro residual mediante un comparador de cloro Hatch, metodo colorimetrico, usando para ello las pastillas DPD 1 (Dietil Parafenileno Diamino). Aquellas muestras de agua con valores de ≥ 0,05 mg/L de cloro residual fueron excluidas (segun el reglamento de la Ley General de Aguas Ley° 17752).

Cuando el cloro residual era <0,05mg/L, se tomo una segunda muestra de agua para ser llevada al Laboratorio de Saneamiento Ambiental de la UTES La Caleta donde se realizo el respectivo analisis bacteriologico, ademas de medir el pH y la temperatura de la muestra. El metodo de aislamiento consistio en filtrar 100 mL de muestra con el equipo de filtracion Millipore, mediante una membrana de acetato de celulosa de 0,22µ de porosidad, seguido de incubacion en agua peptonada alcalina (APA) por seis a ocho horas a 35 oC, y, finalmente, se sembro una alicuota del caldo de enriquecimiento en una placa de TCBS por estriado para el aislamiento de colonias. La metodologia fue realizada siguiendo las pautas establecidas por el Instituto Nacional de Salud (INS) para el aislamiento V. cholerae en muestras ambientales9. El control de calidad de los aislamientos se realizo en el Laboratorio de Referencia Nacional de Enteropatogenos, del Centro Nacional de Salud Publica del INS en Lima, para confirmacion diagnostica y enfrentamiento a los serotipos O1 y O139.

El presente estudio conto con la aprobacion de la Direccion del Hospital La Caleta, la jefatura del Departamento de Laboratorio Clinico y la jefatura de la Unidad Tecnica de Saneamiento Ambiental. Por no involucrar a seres humanos, fue exonerado de revision por un comite de etica en investigacion.

Los datos fueron incluidos en un base de datos, previo control de calidad se analizaron con el paquete estadistico SPSS v.11.0, para comparacion de promedios se uso la prueba t student para muestras independientes previa comprobacion de su distribucion normal con la prueba de Kolomogorov-Smirnov. Se considero significativo con un p<0,05.

RESULTADOS

De julio de 2003 a junio de 2004 se realizo la colecta de muestras de agua en siete pozos con bomba manuable y en seis con reservorio; al tercer mes de seguimiento, una localidad inauguro un pozo con reservorio y clausuro su bomba manuable.

Fueron tomadas 389 muestras de agua para consumo humano en ambos distritos. De ellas 76 fueron excluidas por presentar cloro residual ≥ 0,05 mg/L y otras cinco por no contar con tal medicion; todas provinieron de pozos con reservorio.

De las 308 muestras finalmente incluidas, 201 correspondieron a pozos tubulares con bomba manuable y 107 a pozos tubulares con reservorio (Tabla 1), los resultados microbiologicos mostraron aislamiento en 70 (22,7%) muestras: Aeromonas caviae en 34 (11,0%), Aeromonas hidrophyla en 17 (5,5%) y Vibrio cholerae No O1 en 19 (6,2%), no se identificaron V. cholerae del serotipo O139.

 

Se realizo el aislamiento en 47 (23,4%) muestras de pozos con bomba manuable y en 23 (21,5%) de pozos con reservorio. El Vibrio cholerae No O1 se aislo en 11 (5,5%) muestras de pozos con bomba manuable y en ocho (7,4%) muestras de pozos con reservorio, respectivamente.

Al comparar los valores promedio de cloro residual, pH y temperatura en muestras con (+) y sin (-) aislamiento, se encontro diferencia significativa solo en el nivel de temperatura, aproximadamente 1 °C mas en las que se aislo algun agente. De la misma manera, al comparar estas caracteristicas segun tipo de pozo de procedencia, se observo diferencias significativas solo en el nivel de cloro residual, que fue superior en los pozos con reservorio (Tabla 2).

 

DISCUSIÓN

Estudios previos han demostrado la presencia del Vibrio cholerae en agua marina de la costa norte, centro y sur de nuestro pais (1998-2000)10, reportandose inclusive cuadros compatibles de colera antes del inicio de la epidemia11; afortunadamente, ninguno encontro presencia del serogrupo O1397. Este estudio muestra que el agua de consumo humano proveniente de pozos tubulares representa un reservorio potencial para bacterias como Aeromonas y Vibrio cholerae, resaltando la necesidad de realizar la desinfeccion correspondiente de esta antes de su consumo, ya sea hirviendola o adicionandole cloro. Tanto Aeromonas como Vibrio cholerae No O1 causan alteraciones gastrointestinales, por lo que una ingesta considerable de estos germenes podria provocar enfermedades diarreicas agudas13,14.

Existe evidencia que muestra la presencia natural de Vibrio cholerae en ambientes calidos y salinos6,12. Debemos considerar que, incluso en areas endemicas, resulta dificil el aislamiento de Vibrio cholerae O1 del ambiente, particularmente durante periodos interepidemicos, mientras que el Vibrio cholerae No O1 es detectado con mayor facilidad15. Ello podria explicar el hecho de encontrar serotipos No O1; sin embargo, dados los antecedentes en nuestra region, podemos acreditar que la ausencia del serotipo O1 se debe a una situacion real mas que a un defecto de aislamiento.

Si bien el nivel optimo de salinidad para el crecimiento esta entre 5 y 25%, Vibrio cholerae es uno de los pocos Vibrios que pueden tolerar salinidades menores16,17. Al respecto, se realizo un seguimiento de cinco meses (hasta diciembre de 2004) en las mismas localidades, encontrandose valores de salinidad de 0 a 1% en pozos con bombas manuales y de 0 a 0,7% en pozos con reservorio, con solo un aislamiento (Aeromonas sp.) en 86 muestras de cuatro pozos con bomba manuable y ninguno en las 35 muestras de seis pozos con reservorio. Considerando que la salinidad del agua subterranea se mantiene estable a lo largo del ano, entonces el aislamiento de especies del genero Vibrio demostraria su tolerabilidad a niveles bajos de salinidad.

Por otro lado, la ausencia de aislamientos durante el seguimiento indicaria la existencia de otros factores influenciando este crecimiento bacteriano. Por ejemplo, en la costa peruana, se encontro una correlacion significativa entre la incidencia del colera y la elevada temperatura de la superficie marina desde octubre de 1997 a junio de 2000, periodo que incluye el fenomeno de El Nino 1997-199818.

En este estudio encontramos que una mayor temperatura del agua (1 °C) esta asociada con un aislamiento positivo, lo cual concuerda con lo mencionado anteriormente. Otros factores ambientales, en el caso del agua marina, son la carga de zooplancton y fitoplancton derivados de las condiciones acuáticas globales o locales, y la presencia de vibriofagos relacionados con el cese de brotes epidémicos19. Este estudio sirvió para demostrar además la necesidad de estimular la cloración del agua (práctica promovida por el Estado), no sólo de aquella que proviene de pozos con bombas manuales (donde debería ser obligatorio), sino incluso de los reservorios, ya que los niveles encontrados resultaron inadecuados para el fin propuesto en la mayoría de muestras (107 de 188). Esto resulta aún más importante considerando que un gran sector de la población de estas localidades se dedica a actividades agrícolas, la mayor parte del día fuera de casa, consumiendo agua derivada de los pozos. Por lo que es imperativo educar a la población en aspectos de promoción y prevención en el consumo de agua potable para evitar más episodios de diarrea20.

En conclusión, si bien se encontró Vibrio cholerae No O1 solamente en 4,6% de las muestras de agua para consumo humano en dos localidades costeras de la provincia Santa, los aislamientos ocurrieron en la mayoría de pozos, independientemente de tener o no reservorio. Acciones educativas y de saneamiento ambiental en forma oportuna resultan prioritarias a fin de evitar el desencadenamiento de brotes epidémicos de enfermedades diarreicas agudas.

Esta investigación contó con el apoyo técnico - financiero del proyecto “Enfrentado las amenazas de las enfermedades infecciosas emergentes y reemergentes” Vigía (MINSA / USAID) en el marco del IV Concurso para Proyectos de Investigación en Enfermedades Infecciosas Emergentes y Reemergentes – año 2003.

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Correspondencia: Ana Victoria García Pino.
Dirección: Hospital de Apoyo La Caleta. Urb. Nicolás Garatea Mz. 45 Lte. 24. Nuevo Chimbote, Santa. Ancash, Perú.
Teléfono: (51) 043-310646.
Correo electrónico: anagp14@hotmail.com, anagp_14@yahoo.com.