COMUNICACIÓN

Calidad del semen refrigerado de carneros Assaf y Blackbelly

Quality of refrigerated Assaf and Blackbelly ram semen

 

Jorge Isaac Castro Bedriñana^1,2, Doris Maritza Chirinos Peinado¹, Javier Angel Orellana Chirinos ¹

¹ Facultad de Zootecnia, Universidad Nacional del Centro del Perú, Huancayo, Perú

² E-mail: jorgecastrobe@yahoo.com

 

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RESUMEN

Se comparó la calidad del semen refrigerado de carneros Assaf y Blackbelly utilizados en inseminación artificial y criados en la costa central del Perú. El semen fue colectado con vagina artificial y diluido en Tris-fructosa-yema de huevo. Se determinó la motilidad individual progresiva, la integridad de membrana mediante la prueba hipoosmótica (HOST) y la concentración espermática a través de la cámara de Neubauer a las dos horas de la refrigeración. Los valores porcentuales fueron transformados a ArcSeno %. Se realizaron pruebas de «t» Student para determinar diferencias de medias independientes entre las variables determinadas, según la raza. La motilidad individual progresiva fue de 82.36 ± 6.66 y 83.30 ± 4.92% (p>0.05) ylamotilidadmasalfuede4.28±0.45y4.06± 0.33 (p<0.05) paraloscarnerosAssaf y Blackbelly, respectivamente. La integridad de la membrana espermática fue de 83.50 ± 2.77% paraAssaf y 82.56 ± 3.78% para Blackbelly(p<0.05). La concentración espermática y los porcentajes de espermatozoides vivos y anormales fueron similares en ambas razas.

Palabras clave: calidad de semen; motilidad masal; inseminación artificial; semen refrigerado; concentración espermática

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ABSTRACT

Chilled semen quality ofAssaf and Blackbelly rams used in artificial insemination and raised in the central coast of Peru were compared. Semen was collected with an artificial vagina and diluted with Tris-fructose-egg yolk. The individual progressive motility, the membrane integrity by the hypoosmotic text (HOST), and sperm concentration in the Neubauer chamber were determined after two hours of refrigeration. The percentage values were previously transformed into ArcSen %. The Student «t» test for independent means differences between breeds was performed. Progressive individual motility was 82.36 ± 6.66 and 83.30 ± 4.92% (p>0.05) and the mass motility was 4.28 ± 0.45 and 4.06 ± 0.33 (p<0.05) for the Assaf and for Blackbelly rams, respectively. The integrityofthe spermatic membranewas 83.50 ±2.77%forAssafand 82.56± 3.78% for Blackbelly (p<0.05). Sperm concentration and percentages of live and abnormal spermatozoa were similar in both breeds.

Keywords: semen quality; mass motility; artificial insemination; chilled semen; sperm concentration

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INTRODUCCIÓN

Entre las razas de ovinos introducidas al país, Assaf y Blackbelly tienen un buen desempeño en productividad y eficiencia (Atto, 2007); no obstante, para establecer programas de poblamiento que consideren el uso de la inseminación artificial, la calidad del semen debe estar adecuadamente evaluada (David et al., 2015). Las características macroscópicas y microscópicas del semen de ovinos han sido estudiadas (Evans y Maxwell, 1987; Gibbons et al., 1993; Ramírez, 2002; Bezerra y Soto-Blanco, 2010) y los protocolos propuestos se vienen empleando en estudios de evaluación seminal. Asimismo, las asociaciones entre la raza de los carneros y la calidad del semen (Abdel-Rahman et al., 2000; Rege et al., 2000; Gundogan y Demirci, 2003; Salhab et al., 2003; David et al., 2007; Domínguez, et al., 2008), así como los efectos de diversos dilutores sobre la motilidad individual y progresiva (Gibbons et al., 1993; Salamon y Maxwell, 2000; Vishwanath y Shannon, 2000; Cabrera et al., 2010) y sobre la integralidad funcional de la membrana espermática (Stornelli, 2005; Cabrera et al., 2010) vienen evaluándose en diversos estudios.

El test de endosmosis (Hypoosmotic Swelling Test – Host) permite la comprobación del estado funcional de la membrana plasmática, de allí que podría utilizarse como valor predictivo de fertilidad (Pérez-Llano et al., 2003). Los valores de Host se correlacionan con otros parámetros de calidad seminal, como la motilidad, viabilidad o la morfología, permitiendo predecir la capacidad fecundante del semen (Rota et al., 2000).

El semen de ovinos Assaf presentan concentraciones entre 1780 y 3990 x 10⁶ espermatozoides por mililitro (Epstein, 1985), en tanto que para el semen de carneros Blackbelly, Quispe (1998) reporta 3730 x 10⁶ espermatozoides/ml y 1.46 ml de volumen de eyaculado con 83% de motilidad individual, mientras que Guillén (2001) reporta 84.9% de motilidad individual, 3140 x 10⁶ de espermatozoides/ml, 0.97 ml de volumen de eyaculado y 6.6-6.8 de pH.

Considerando la importancia que tienen las razas Assaf y Blackbelly en la producción de ovinos en la costa y la selva peruana, el objetivo de la presente investigación fue comparar las características macroscópicas y microscópicas del semen, la integridad de las membranas (Host) y la motilidad individual progresiva (MIP) de los espermatozoides en carneros de ambas razas, luego de un periodo de refrigeración de dos horas.

MATERIALES Y MÉTODOS

La investigación se llevó a cabo en el Banco Nacional de Semen de la Universidad Nacional Agraria La Molina (UNALM), situada en Lima, costa subtropical del Perú, con una temperatura promedio anual de 18 ºC y una humedad relativa anual promedio de 75%.

Se utilizaron tres carneros Assaf y tres Blackbelly, de 3.5 años de edad en promedio, pertenecientes a la granja Rigoranch, UNALM, los cuales tuvieron el mismo manejo zootécnico y fueron alimentados con king grass y maíz chala picada, más un suplemento concentrado, ofrecidos diariamente en cantidades similares a cada carnero. Los animales estuvieron alojados en corrales de 2.8 x 3.0 x 1.2 m, provistos de sombra, comedero y bebedero. Las instalaciones tuvieron una adecuada iluminación y ventilación. En cada corral se colocaron dos carneros.

Se hicieron dos colecciones de semen por semana, y un total de 12 colecciones por carnero para los fines del experimento. Hubo una fase de dos semanas de entrenamiento a la colección de semen con vagina artificial. Los eyaculados fueron colocados en baño maría a 34 ºC. Se utilizó Tris-fructosa-yema de huevo como dilutor, cuya composición consideró Tris (3.63 g), fructosa (0.5 g), ácido cítrico (1.95 g), yema de huevo (15 ml), penicilina (100 000 UI), estreptomicina (100 mg), agua destilada (80 ml) y glicerol (5 ml), siguiendo el protocolo de Evans y Maxwell (1987).

La valoración cuantitativa del movimiento de los espermatozoides se determinó inmediatamente después de la colección de semen, siguiendo el protocolo de Evans y Maxwell (1987), empleando la escala de 0 a 5. La motilidad individual progresiva (0100%) fue determinada con base a los protocolos de Gibbons et al. (1993), empleando la cámara de Neubauer. La integridad funcional de membrana espermática se evaluó mediante la prueba hipoosmótica (HOST), siguiendo el protocolo de Correa y Zavos (1994). La morfología de los espermatozoides se determinó mediante el método de frotis de semen teñido, utilizando eosina y nigrosina al 5 y 10%, respectivamente, observando no menos de 300 espermatozoides al microscopio (400X). El porcentaje de espermatozoides vivos se determinó considerando el número porcentual de espermatozoides anormales en relación al número de espermatozoides contados.

La motilidad masal, concentración espermática, porcentaje de espermatozoides vivos y el porcentaje de espermatozoides anormales, HOST refrigerado y MIP-tris-refrigerado del semen de carneros Assaf y Blackbelly fueron comparadas mediante pruebas de «t» para diferencia de medias independientes, empleando el software estadístico SAS (Statistical Analysis System, v. 8.0). Los valores porcentuales fueron previamente transformados angularmente,Arco Seno % (Snedecor y Cochrane, 1989).

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

El volumen de eyaculado de carneros Assaf fue mayor que el de carneros Blackbelly (p<0.05, Cuadro 1). Los volúmenes encontrados se encuentran en el rango normal de eyaculados en ovinos (Hafez (1996).Asimismo, Quispe (1998) reporta volúmenes de 1.46 ml, mientras que Guillén (2001) y Ramírez (2002) reportan eyaculado de 0.97 ml entre 0.83 y 0.97 ml en ovinos Blackbelly criados en Lima, Perú.

Todos los eyaculados fueron de color blanco cremoso, con un pH de 7.0, valor adecuado para el semen de ovinos (Evans y Maxwell, 1987). Por su parte, Guillén (2002) en carneros Blackbelly del Programa de Crianzas Familiares del Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA), Lima, reporta valores de pH ligeramente inferiores al registrado en el presente estudio (6.6-6.8).

En el Cuadro 1 se muestran los resultados correspondientes a las características microscópicas del semen de los carneros Assaf y Blackbelly. La motilidad masal fue alta en las dos razas, pero estadísticamente mayor en los carneros Assaf (p<0.05). Asimismo, los valores fueron similares a los reportados por Cabrera et al. (2010), quiénes también encontraron diferencias significativas a favor de los carneros Assaf.

La mayor motilidad masal en carneros Assaf (p<0.05) podría atribuirse a factores genéticos (Gundogan et al., 2004) y ambientales (Abdel-Rahman et al., 2000; Rege et al., 2000; Gundogan et al., 2004), antecedentes nutricionales (Toe et al., 1994) y variaciones estacionales (Ibrahim, 1997; Rege et al., 2000; Gundogan y Demirci, 2003; Salhab et al., 2003; Domínguez et al., 2008).

La concentración espermática fue similar entre las dos razas, estando los promedios dentro del rango reportado por Epstein (1985) para carneros Assaf, mientras que promedios inferiores a los reportados por Quispe (1998) y Guillén (2001) para carneros

Blackbelly. Por otro lado, Cabrera et al. (2010) refiere valores similares a los del presente estudio, pero con diferencias significativas entre estas razas.

El porcentaje de espermatozoides vivos y anormales en ambas razas fueron similares y con valores que permiten afirmar que el semen colectado fue de buena calidad, tanto por sus características macroscópicas y microscópicas; los mismos quese encuentrandentro del rango reportado por Hafez (1996). El alto porcentaje de espermatozoides vivos guarda relación con el movimiento progresivo.

En el Cuadro 2 se presentan las características del semen diluido y refrigerado. El valor de Host fue significativamente más alto en los carneros Assaf (p<0.05), mientras que la motilidad progresiva fue similar para ambas razas.

Los valores de la prueba de Host superaron el 82%, valor que determina una alta capacidad fecundante de los espermatozoides (Hafez, 1996; Rota et al., 2000; Pérez-Llano et al., 2003). Los valores de Host fueron similares a los reportados por Cabrera et al. (2010) para carneros Assaf (83.3 ± 5.9) y Blackbelly (81.4 ± 3.2) en semen fresco.

La motilidad individual progresiva (MIP) del semen refrigerado fue similar a otros reportes en semen de carneros Blackbelly (Quispe, 1998; Guillén, 2001; Ramírez, 2002), aunque ligeramente inferiores a los valores reportados por Cabrera et al. (2010) de 84.5 ± 3.0 para Assaf y 83.7 ± 3.3 para Blackbelly.

CONCLUSIONES

• Los carneros de la raza Assaf registraron un mayor volumen seminal, motilidad masal e integridad de membrana espermática que los carneros Blackbelly (p<0.05), no habiendo diferencias en concentración espermática, porcentaje de espermatozoides vivos y motilidad individual progresiva.

• El factor raza del carnero no fue influyente ni determinante en relación a las características seminales durante la refrigeración.

Agradecimiento

Al Ing. MSc Próspero Cabrera Villa-nueva, Jefe del Banco Nacional de Semen durante le ejecución del trabajo, por haber brindado las facilidades necesarias para el desarrollo del estudio.

LITERATURA CITADA

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Recibido: 7 de noviembre de 2016

Aceptado para publicación: 30 de marzo de 2017