Artículos primarios

Identificación inmunohistoquímica de antígenos receptores de angiotensina II en arteria umbilical de alpaca (Vicugna pacos)

Inmunohistochemical identification of angiotensin II antigen receptors in umbilical artery of alpaca (Vicugna pacos)

 

Emanuel Ayala C.¹, Alberto Sato S.^1,3, Nieves Sandoval C.², Miluska Navarrete Z.¹

1 Laboratorio de Anatomía Animal y Fauna Silvestre, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú

2 Laboratorio de Histología, Embriología, y Patología Veterinaria, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima, Perú

3 E-mail: albertosato2000@yahoo.com

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RESUMEN

El objetivo de este trabajo fue identificar los antígenos receptores de angiotensina II en la arteria umbilical de la alpaca (Vicugna pacos). Se trabajó con seis úteros grávidos de alpacas procedentes de comunidades alpaqueras a 4000 msnm en Cusco, Perú, cuyo tiempo de gestación fue estimado por el diámetro biparietal del feto. Se obtuvieron cortes histológicos de 5 µm de espesor de cada arteria umbilical. Se aplicó la técnica de inmunohistoquímica (IHQ) Avidina-Biotina-peroxidasa, utilizando reactivos de IHQ y anticuerpos policlonales anti-Angiotensina II. Las láminas fueron analizadas con microscopio binocular Leica DM750 con cámara digital anexada y software LAS 4.7 Leica Macrosystems. La intensidad de marcación se clasificó de manera cualitativa (0: sin marcación; 1: marcación leve; 2: marcación moderada; 3: marcación fuerte). Para el control positivo se empleó muestras de arteria umbilical ovina. Los antígenos receptores de angiotensina II se localizaron en las células musculares lisas de las arterias umbilicales en los tiempos de gestación evaluados. Los antígenos presentaron una intensidad de mar- cación fuerte, lo que demuestra que la angiotensina ejerce su actividad biológica de vasoconstricción en las células musculares lisas del vaso sanguíneo.

Palabras clave: alpaca; angiotensina; arteria umbilical; inmunohistoquímica

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ABSTRACT

The aim of this study was to identify the angiotensin II receptor antigens in the umbilical artery of the alpaca (Vicugna pacos). Six gravid uteri of alpacas from community farms located at 4000 m above the sea level in Cusco, Peru were used. The gestation time was estimated by the biparietal diameter of the foetus. Histological sections of 5 µm thickness were obtained from each umbilical artery. The Avidin-Biotin-peroxidase immunohistochemistry (IHQ) technique was applied, using IHQ reagents and polyclonal anti-Angiotensin II antibodies. The slides were analysed with a Leica DM750 binocular microscope with digital camera attached and LAS 4.7 Leica Macrosystems software. The intensity of marking was classified qualitatively (0: negative; 1: weak; 2: moderate; 3: strong labelling). For the positive control, ovine umbilical artery samples were used. The angiotensin II receptor antigens were in the smooth muscle cells of the umbilical arteries in the various gestation times. The antigens showed a strong labelling intensity, showing that angiotensin exerts its biological activity of vasoconstriction in the smooth muscle cells of the blood vessel.

Key words: alpaca; angiotensin; umbilical artery; inmunohistochemestry

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INTRODUCCIÓN

Las alpacas (Vicugna pacos) habitan mayormente en las tierras altas del Perú, Bolivia, Argentina y Chile, donde las temperaturas caen bajo cero por la noche. Estas especies prefieren baja humedad y altitudes entre 3600 y 4900 m y convierten con eficiencia los pastos nativos en carne y fibras de alta calidad (Iñiguez y Alem, 1996), convirtiéndolos en el mejor medio de sustento para los habitantes de escasos recursos de los países andinos (Quispe, 2009).

Al habitar en altitudes donde los niveles de oxígeno y la presión atmosférica son reducidos (Iñiguez y Alem, 1996) se estima que la irrigación sanguínea fetal puede tener características histoquímicas propias de la especie. La placenta de la alpaca presenta dos venas, dos arterias y un ducto alantoideo (Barrios et al., 2017). Histológicamente, los camélidos sudamericanos tienen un tipo de placenta denominada epitelio-corial difusa (Dellman, 1993), que descansa en un mesénquima ricamente vascularizado (Olivera et al., 2003) sin placentomas (Iturrizaga et al., 2005).

El desarrollo y crecimiento vascular sanguíneo esta mediado por moléculas de angiotensina (Risau e Ingo, 1995), la cual es responsable de la permeabilidad (Peach, 1981; Woods, 1993), del control de la irrigación (Dvorak et al., 1995: Brameld et al., 2011) y del paso de agua hacia la placenta, regulando de esta manera los fluidos amnióticos y alantoides (Faber y Anderson, 1992). En el humano y en el cerdo, la angiotensina es responsable de la angiogénesis placentaria y del desarrollo fetal durante la gestación (Nielsen et al., 1996).

Estudios relacionados a receptores de angiotensina en los vasos sanguíneos del cordón umbilical de la alpaca son aún motivo de investigación. Por esta razón, el objetivo del presente estudio fue identificar antígenos receptores de angiotensina II en las arterias umbilicales de la alpaca (Vicugna pacos) mediante el uso de la inmunohistoquímica.

MATERIALES Y MÉTODOS

Lugar de Ejecución y Animales

Se emplearon seis úteros grávidos (entre 70 y 270 días de gestación) de alpacas Huacaya, procedentes de comunidades alpaqueras de la zona de Cusco, Perú, ubicadas a 4000 msnm, y que formaban parte del estudio «Convenio 097-2014-FONDECYTDE». Los úteros fueron conservados a 8 °C en una caja refrigerada con hielo y transportados durante 3 h al Laboratorio de Anatomía Animal y Fauna Silvestre de la Facultad de Medicina Veterinaria (FMV), Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM), en Lima.

Muestras y Mediciones

Los órganos fueron diseccionados en el laboratorio y los fetos fueron extraídos. El diámetro biparietal fetal (DBP) fue medido con una regla de Vernier para estimar la edad fetal (DBP-0.11376)*47.23287 (Gazitua et al., 2001). Las muestras de arteria se obtuvieron realizando cortes de 2 cm al inicio del cordón umbilical, próximo al feto. Las muestras fueron conservadas en solución de formalina tamponada al 10%, y procesadas con parafina (bloque de tejido o taco) para el estudio histológico. Cortes de 5 ìm de espesor se hicieron en los bloques y se colocaron en láminas portaobjetos positivados. Los cortes histológicos para la identificación de antígenos de angiotensina y endotelina siguieron el protocolo de inmunohistoquímica ABC técnica Avidina – Biotina – Peroxidasa (Doherty et al., 1989; Urpegui et al., 2000), empleando los anticuerpos y reactivos indicados en el Cuadro 1.

Análisis de Láminas

Las láminas fueron analizadas en el microscopio binocular Leica DM750 con cámara digital ICC50 HD anexada y software de medición LAS 4.7 Leica Macrosystems. Se observó el grado de marcación de los antígenos para angiotensina en arterias, denominándose cualitativamente la intensidad del marcaje como 0: sin marcación, 1: marcación leve (+), 2: marcación moderada (++) y 3: marcación fuerte (+++) (Zanuzzi, 2010).

Términos de Ética

Los úteros fueron obtenidos de animales descartados por características fenotípicas indeseables para la crianza y que se encontraban destinados al beneficio en el camal local, concordando de esta manera con las normas establecidas por el Comité de Ética y Bienestar Animal de la FMV-UNMSM.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Arteria Umbilical

La arteria umbilical está conformada por tres capas. La primera, denominada túnica- interna, compuesta por células endoteliales; la segunda capa se subdivide en una zona compacta y otra esponjosa, donde la zona compacta presenta abundante tejido conectivo entremezclado con escasas células musculares lisas, mientras que la zona esponjosa está conformada por abundantes células musculares lisas que recubren toda la zona compacta. La tercera capa de tejido laxo recubre toda la arteria.

Los resultados de inmunohistoquímica muestran intensidad de marcación fuerte (+++) para antígenos receptores de angiotensina II en la zona esponjosa (Figuras 1-4); es decir, en la zona de mayor presencia de células musculares lisas. La fuerte intensidad de marcación antigénica de angiotensina es atribuida a la presencia de gran cantidad de receptores de angiotensina II en las paredes de las células musculares lisas, los cuales cumplen la función de regular el caudal sanguíneo (Dvorak et al., 1995; Brameld et al., 2011).

La placentación y supervivencia fetal depende de la angiogénesis (Risau e Ingo, 1995), la formación de la red vascular en la placenta (Mackenzie et al., 1999), la circulación fetoplacentaria, y el flujo sanguíneo uteroplacentario está mediado por la angiotensina (Krukier y Pogorelova, 2005). La angiotensina II es un agente muy potente que incrementa la presión sanguínea al actuar en el músculo liso (Kaschina y Unger, 2003), regula la resistencia vascular y el flujo sanguíneo (Woods, 1993). Aunque, la alpaca habite en grandes altitudes no es ajena a la presencia de receptores de angiotensina y a su actividad biológica que ejerce en las arterias del cordón umbilical. En el presente estudio se ha demostrado que la zona con abundante músculo liso de la arteria umbilical presenta receptores de angiotensina II durante la gestación.

CONCLUSIÓN

Los antígenos receptores para angiotensina II se encuentran localizados en las paredes de las células musculares lisas de las arterias umbilicales de alpaca durante la gestación, mostrando a través de la técnica de inmunohistoquímica la presencia de gran cantidad de receptores angiotensina II.

 

Agradecimientos

Los autores agradecen al Convenio 0972014-FONDECYT-DE por el financiamiento del presente estudio. Así mismo, al Mg. MVZ Francisco Santos Rueday MVAlexander Chávez Reátegui por el apoyo técnico recibido.

 

LITERATURA CITADA

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Recibido: 13 de junio de 2019

Aceptado para publicación: 20 de septiembre de 2019