Abstract

WATANABE W, Raquel; MANCHEGO S, Alberto  and  RIVERA G, Hermelinda. Expresión In vitro de las interleucinas 2 y 10 de linfocitos de alpacas (Vicugna pacos) en presencia de antígenos clostridiales. Rev. investig. vet. Perú [online]. 2014, vol.25, n.3, pp.419-429. ISSN 1609-9117.

El objetivo del presente estudio fue determinar, mediante la técnica de RT-PCR Tiempo Real y cuantificación relativa según el método 2-rrCt, los niveles relativos de expresión in vitro de ARN mensajero de IL-2 e IL-10 en leucocitos circulantes de alpacas en presencia de antígenos clostridiales, empleándose como control endógeno a GAPDH. Se colectó sangre entera de 10 alpacas adultas. Las muestras fueron centrifugadas para obtener la fracción leucocitaria en gradiente de Ficoll, colectándose la capa flogística. Se hizo un pool de leucocitos que fueron purificados con cloruro de amonio. Se centrifugó yla concentración se ajustó a 500 000 células vivas/ml de medio mínimo esencial (MEM). Fueron cultivados en placas para cultivo celular de 24 pocillos y enfrentados a suspensiones de extracto clostridial a las concentraciones de 400, 16, 0.8 y 0.2 µg/ml por 1, 12 y 24 h. Posteriormente, se realizó la RT-qPCR. La cinética de la expresión de IL-2 mostró una tendencia no significativa inversamente proporcional a la dosis de antígeno clostridial en los tres tiempos de incubación, a diferencia de IL-10 cuya expresión fue variable, alcanzando el máximo a las 12 h de incubación (p<0.05) y mostrandoun patrón similar al de IL-2 en la dosis de 16 µg/ml de antígeno clostridial. La expresión de IL-10 superó hasta en 40 veces lo expresado por el calibrador respecto a IL-2, evidenciándose una marcada respuesta hacia la polarización del subtipo Th2

Keywords : interleucina 2; interleucina 10; Clostridium perfringens; RT-PCR tiempo real; cuantificación relativa.

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