Abstract

REVELO R, Alexandra et al. Evaluación de métodos de extracción de ADN genómico para laidentificación de Leptospira spp en muestras de orina bovina mediante por PCR. Rev. investig. vet. Perú [online]. 2020, vol.31, n.2, e15522. ISSN 1609-9117.  http://dx.doi.org/10.15381/rivep.v31i2.15522.

El presente estudio tuvo la finalidad de seleccionar un protocolo de extracción de ADN de Leptospira spp a partir de muestras de orina para el diagnóstico de leptospirosis bovina mediante PCR. Se utilizaron tres métodos de extracción deADN: Etanol-Hidróxido de Sodio (EtNa), resina quelante Chelex® 100 y el estuche de extracción comercial PureLink® Genomic DNAMini Kit. ElADN extraído sirvió para la estandarización de tres protocolos de PCR para la identificación de los genes rrl, hap1 y rrs, respectivamente en el laboratorio de AGROCALIDAD, Ecuador. Se colectaron 72 muestras de orina bovina procedentes de ganaderías de la provincia de Manabí, Ecuador. Se obtuvieron 10 muestras positivas mediante la amplificación del gen rrl, el cual identifica al género Leptospira. De las muestras positivas a género, ocho amplificaron para el gen hap1, el cual codifica para la principal proteína de membrana externa de especies patógenas. Se evaluó la concordancia entre los métodos de extracción de ADN con Chelex-100, y el estuche de extracción comercial PureLink® Genomic DNA Mini Kit, determinándose una concordancia de 0.74 mediante el índice Kappa.

Keywords : leptospirosis; zoonosis; diagnóstico; extracción de ADN; Chelex; PCR.

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