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Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Publica
Print version ISSN 1726-4634
Abstract
FLORES-NUNEZ, Astrid et al. Clonamiento, expresión y seroreactividad de la proteína recombinante de ensamblaje de lipopolisacáridos - D (LptD) de Bartonella bacilliformis. Rev. perú. med. exp. salud publica [online]. 2022, vol.39, n.1, pp.15-23. Epub Mar 31, 2022. ISSN 1726-4634. http://dx.doi.org/10.17843/rpmesp.2022.391.9292.
Objetivo.
Evaluar in silico y a nivel serológico el potencial antigénico del dominio extracelular recombinante de la proteína de ensamblaje de lipopolisacáridos - D (LptD) de Bartonella bacilliformis (dexr_LptD).
Materiales y métodos.
Mediante el análisis in silico se realizó la selección de una proteína de B. bacilliformis con potencial antigénico e inmunogénico. El gen de la proteína seleccionada se clonó en Escherichia coli TOP10 y se expresó en Escherichia coli BL21 (DE3) pLysS. La proteína recombinante fue expresada usando isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) y se optimizaron las condiciones de inducción. Por último, se purificó con resina Ni-IDA (His60 Ni Superflow) y se realizó un ensayo de Western Blot.
Resultados.
In silico, la proteína seleccionada fue LptD por estar localizada en la membrana externa y ser antigénica e inmunogénica. Las condiciones optimizadas para la inducción del dexr_LptD fueron 0,5 mM IPTG, 16 h, medio TB (Terrific Broth), etanol al 3% (v/v), 28 ºC, OD600: 1-1,5 y 200 r.p.m. La purificación se realizó en condiciones denaturantes a pequeña escala y se obtuvo 2,6 µg/mL de dexr_LptD parcialmente purificada. El ensayo de Western Blot mostró una reacción positiva entre los sueros provenientes de pacientes con la enfermedad de Carrión y dexr_LptD, ello evidencia la antigenicidad del dexr_LptD.
Conclusiones.
El dexr_LptD muestra antigenicidad in silico y a nivel serológico, estos resultados son base para posteriores estudios sobre candidatos vacunales contra la enfermedad de Carrión.
Keywords : Infecciones por Bartonella; Bartonella bacilliformis; Proteínas recombinantes; Antigenicidad vacunal, Biología computacional.