Abstract

SOLANO BARQUERO, Melissa; CHACON JIMENEZ, Luz María; BARRANTES JIMENEZ, Kenia  and  ACHI ARAYA, Rosario. Implementación de dos métodos de recuento en placa para la detección de colifagos somáticos, aportes a las metodologías estándar . Rev. peru biol. [online]. 2012, vol.19, n.3, pp.335-340. ISSN 1727-9933.

Los métodos de recuento en placa capa doble y capa simple de agar, para la cuantificación de colifagos somáticos en aguas, fueron implementados utilizando como base metodologías estándar. Diferentes variables fueron ensayadas, lo cual permitió la precisión en algunos pasos no incluidos en metodologías estándares. De los hallazgos de mayor importancia, se exponen las consecuencias de utilizar un cultivo de Escherichia coli excesivamente concentrado y se describe la obtención de un cultivo en fase logarítmica en solo 4 horas de incubación, ajustando la concentración a una densidad óptica de 0,3 a 600nm (3,1 x 10⁸UFC/ mL), o a un McFarland 1 (3,0 x10⁸UFC/ mL). Se determinó que los controles de colifagos deben ser almacenados a -70 °C para reducir su degradación y que se deben evitar cantidades superiores a 20 mL de mezcla de reacción por plato de Petri, para reducir las burbujas que pueden interferir con la lectura de unidades formadoras de placas (UFP). Se demostró que los colifagos de las muestras de agua pueden almacenarse 48 horas a 4 °C sin que sufran degradación y que en las muestras con altas concentraciones de colifagos no se observa UFP porque se da una lisis confluente de la capa bacteriana. No se encontraron diferencias significativas en la recuperación de colifagos al utilizar un método u otro, pero dichos métodos deben ser evaluados por medio de controles, antes de aplicarlos directamente en el análisis de muestras de agua.

Keywords : colifagos somáticos; capa doble de agar; capa simple de agar; aguas; indicadores virales.

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