INTRODUCCIÓN

La periodontitis es un proceso inflamatorio crónico que se desencadena como respuesta a la presencia de la biopelícula bacteriana ^1,2,3. Los productos solubles generados por las bacterias así como los mediadores proinflamatorios pueden ingresar a la circulación por la permeabilidad que presenta el tejido injuriado del saco periodontal ⁴.La enfermedad produce inflamación gingival, desinserción de las fibras periodontales y reabsorción de la porción coronal del hueso alveolar de soporte ⁵. Aunque el foco inflamatorio está circunscripto en el periodonto , puede repercutir a distancia en otros tejidos y sistemas ⁶. Las bacterias gram negativas periodontopatogenas, predisponen al huésped a sufrir un estado de insuloresistencia (RI) mediado por la respuesta inmuno inflamatoria . Por esta razón estos pacientes presentan un riesgo sistémico aumentado ⁷. Un mal control glucémico en pacientes diabéticos está íntimamente vinculado al avance de la periodontitis ^8,9. Entre los factores de riesgo para el agravamiento de muchas enfermedades inflamatorias crónicas como la diabetes mellitus (DM) se considera a la enfermedad periodontal ¹⁰.

La Asociación Americana de Diabetes, clasificó a la Diabetes en cuatro tipos: DM Tipo 1, DM Tipo 2, DM Gestacional y otros tipos específicos (causadas por medicamentos, enfermedades del páncreas, de las glándulas endocrinas, a enfermedades infecciosas y a trastornos genéticos, etc.).

El porcentaje de hemoglobina glicosilada HbA1c refleja los niveles de glucosa en sangre durante los tres meses (vida media del glóbulo rojo) previos a la toma de muestra. Entre los parámetros que reflejan un control metabólico exitoso se incluye un valor de HbA1c < 7,0%, en pacientes hasta los 60 años de edad que fueron diagnosticados recientemente y sin enfermedades agravantes. Puede considerarse una HbA1c hasta 8.0% en pacientes mayores de 60 años con comorbilidades ^11,12.

P.gingivalis (Porphyromonas gingivalis) es un microorganismo que tiene capacidad de colonizar e invadir tejidos , además cumple un rol fundamental en la alteración de la microbiota normal al obstaculizar la respuesta inmunológica y desarrollarse en disbiosis ¹³. Es un microorganismo patobionte ¹⁴ muy bien documentado y es un componente clave en la periodontitis crónica ¹⁵. P.gingivalis posee vesículas en la membrana externa que le permite la liberación de enzimas al exterior ,estas tienen gran relevancia en la patogenia y en la progresión de la enfermedad periodontal. Seyama et al., ^16), y Tian, et al., ¹⁷, evidenciaron que P.gingivalis juega un papel crítico en el estado de insulinorresistencia ¹⁸. Takamura et al ¹⁹ demostraron que P.gingivalis puede también internalizar y llegar a las células hepáticas HepG2 e interferir en la respuesta a la insulina.

El objetivo de este estudio fue obtener la prevalencia de Porphyromonas gingivalis en pacientes con Diabetes Mellitus tipo 2.

MATERIAL Y MÉTODOS

Este estudio fue de tipo descriptivo transversal. Cada participante firmó el Consentimiento informado aprobado por el Comité de Bioética de la Facultad de Odontología de la Universidad Nacional del Nordeste. El tipo de muestreo fue por conveniencia y la muestra estuvo conformada por 50 pacientes diagnosticados con Diabetes Mellitus tipo 2, del Servicio de Endocrinología, Diabetes y Nutrición del Hospital J.R. Vidal de la ciudad de Corrientes (Argentina) que cumplieron con los criterios de inclusión.

Criterios de inclusión: Pacientes con Diabetes Mellitus tipo 2 pertenecientes a ambos sexos Criterios de exclusión: Embarazo, lactancia, y otras condiciones sistémicas que pudieran influir en la periodontitis, alcohólicos y fumadores crónicos, pacientes edéntulos totales, pacientes que hayan recibido terapia periodontal en el último año, y utilización de antimicrobianos en forma sistémica o tópica en los seis meses previos al examen clínico y a la toma de muestras de fluido crevicular.

Examen clínico

Se realizó el examen odontológico y odontograma para evaluar la presencia de periodontitis. Se clasificó la periodontitis en estadios según los criterios de Papapanou y col. 2018 ²⁰ considerando los datos clínicos recogidos durante el examen periodontal. En la ficha odontológica se registraron parámetros clínicos que incluyeron el índice Índice de O’Leary, profundidad de sondaje (PD), pérdida de inserción clínica (CAL), sangrado al sondaje. Las piezas dentarias inexistentes se tacharon de la respectiva ficha. Se tomaron los valores de PD y CAL en seis sitios por diente (mesiobucal, bucal, distobucal, mesiolingual, lingual y distolingual). Para medir la profundidad de sondaje se utilizó la sonda periodontal Sonda MM PC-15 COLOR-UNC, maniobra ejecutada para medir la profundidad de bolsa empleando la sonda periodontal mencionada (Figura 1).

Figura 1 Sondaje de bolsas periodontales con sonda periodontal. 

Toma de muestra

Se seleccionaron dos sitios de muestreo, con mayor PD, uno en cada arcada. La zona se aisló con algodón y se removió la placa supragingival con torunda de algodón estéril. Se introdujeron puntas de papel absorbente en el surco gingival del sitio elegido durante 60 segundos y se almacenaron -20°C hasta su procesamiento (Figura 2).

Figura 2 Colocación del cono de papel para la toma de muestra de fluido crevicular 

Detección de P.gingivalis: Se realizó por PCR de punto final. Extracción de ADN de las muestras clínicas: Se realizó la extracción de ADN utilizando el Método de Extracción con CTAB y posterior purificación con Cloroformo-alcohol isoamílico. Se emplearon los iniciadores que fueron utilizados por Quintero et al., ²¹, y la banda de amplificación se observó a 197 pares de bases (pb). Las secuencias de cebadores utilizadas fueron: Pg-1 F 5´-TGTAGATGACTGAAAACC-3’ Pg-2 R 5’-ACGTCATCCCCACCTTCCTC-3´

Como control positivo de se utilizó la cepa de American Type Culture Collection (ATCC), Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. Para comprobar la presencia de ADN bacteriano en las muestras de fluido gingival, se realizó una PCR de ARNr16S (procariotas), para ello se utilizó los cebadores BAK4 y BAK11, empleados universalmente para la detección de ARN ribosomal 16S en procariotas. Los amplificados se corrieron electroforéticamente en un gel de agarosa 1,8 % en buffer TBE1X más 3 µL de Gel Green 10,000X (Biotium, USA), diluido 3X en agua destilada-deionizada. Las bandas se visualizaron en foto documentador(MaestroGen) (Figura 3).

Figura 3 Perfil electroforético de amplicones PCR especie específica para P.gingivalis en gel de agarosa (1,8 %) visualizado en fotodocumentador. C- : control negativo (H2O destilada), C+ : control positivo cepa ATCC 33277, Mpm : Marcador de peso molecular. Calles 1-10: pacientes con fragmentos de amplificacion de 197pb pertenecientes a P gingivalis. 

Hemoglobina glicosilada: Las muestras se tomaron por punción venosa, y se midieron los valores de porcentaje de hemoglobina glicosilada (HbA1c) por el método de inhibición inmunoturbidimétrica (Wiener Lab, Argentina).

En el análisis estadístico se empleó la Prueba de Independencia mediante el estadístico Chi-Cuadrado con un 5% de significancia a fin de comprobar si existe relación entre las frecuencias con que se presentan los valores de las variables cualitativas. El análisis estadístico fue realizado mediante el Software InfoStat 2019.

RESULTADOS

La muestra estuvo constituida por 50 pacientes que fueron seleccionados según los criterios de inclusión, 54% correspondieron al sexo femenino y un 46% al sexo masculino. Presentaron una media de edad de 52,12 años con una desviación estándar de 8,29, en un rango entre 24 y 66 años. La media de hemoglobina glicosilada fue de 7,84%, con desviación estándar de 1,64 con un minimo de 6,00% y un máximo de 14,30%.

Se obtuvo una prevalencia del 30 % de P. gingivalis en fluido gingival de la población estudiada. Del análisis de los parámetros clínicos periodontales se obtuvieron los grados de periodontitis que se distribuyeron en, grado 0 56%, 24 % grado I, 8% presentó un grado II y un 12%, un grado III (Gráfico 1). En el análisis estadístico no se obtuvo diferencia estadísticamente significativa entre la prevalencia de P.gingivalis y los grados de periodontitis (Tabla 1).

Gráfico 1 Frecuencia relativa de los Estadios de EP en la población estudiada 

Tabla 1 Relación entre la presencia de P.gingivalis y los grados de Enfermedad periodontal 

*Chi cuadrado Pearson

DISCUSIÓN

En nuestra investigación se obtuvo una prevalencia de P. gingivalis de 30% en pacientes con Diabetes tipo 2, mediante identificación molecular. Resultados similares obtuvieron Correa et al., ²², y Sanchez et al., ²³, que reportaron un 28,6% y un 18 % respectivamente de prevalencia de P. gingivalis en pacientes con Diabetes. Sin embargo autores como Jaques Fuentes et al., hallaron una alta prevalencia de P.gingivalis en una muestra de pacientes diabéticos ²⁴. Asimismo Tervonen y col ²⁵ reportaron una elevada incidencia de P.gingivalis, sin embargo Quinteros et al., informaron que P.gingivalis era la segunda más prevalente en una población de Diabéticos tipo 2 ²¹. En este trabajo se encontró que un 44% de los pacientes presentaron algún grado de periodontitis y un 56% exhibieron un grado 0. Contrariamente autores como Cordovez et al., encontraron una prevalencia de periodontitis en diabéticos del 100%, con una mayor frecuencia de periodontitis moderada 46,8% ²⁶. En este trabajo no se halló significancia estadística en la presencia de P. gingivalis en relación a los grados de periodontitis. Agarwal et al., afirmaron que la diabetes no solo predispone al individuo a la enfermedad bucal, sino que también la periodontitis, una vez establecida exacerba la diabetes y empeora el control de la glucemia ²⁶. Los resultados obtenidos en esta investigación de naturaleza descriptiva se acotan a una muestra pequeña de pacientes diabéticos, no obstante, consideramos que los resultados obtenidos en esta investigación son muy relevantes considerando que los datos científicos en referencia a la prevalencia y rol de las bacterias responsables de la enfermedad periodontal en nuestra región y en pacientes que padecen enfermedades crónicas como la Diabetes son aún escasos. Asimismo, la distribución de los patógenos periodontales difiere en relación a la ubicación geográfica y al grupo racial y étnico por lo cual consideramos que proseguir el estudio de prevalencia de P. gingivalis sobre una muestra mayor ampliaría la evidencia obtenida en esta investigación.

CONCLUSIONES

La prevalencia de P.gingivalis en la muestra de pacientes con diabetes tipo 2 es de un 30% y su distribución es independiente del grado de Enfermedad periodontal. Consideramos pertinente continuar trabajando en esta línea y realizar nuevas investigaciones. El tamaño de la muestra estudiada podemos alegar como una limitación de este trabajo, sin embargo, creemos conveniente continuar nuestra investigación con un tamaño de muestra mayor lo cual nos permitirá realizar comparaciones y obtener más conclusiones sobre el estado periodontal y la presencia de P. gingivalis en pacientes que padecen DM tipo 2.