Sr. Editor,

Los parásitos del género Leishmania sp. adoptan las formas de promastigote y amastigote en su ciclo de vida. En busca de modelos parasitarios, un estudio utilizó amastigotes axénicos de Leishmania mexicana para probar nuevas drogas contra el parásito ^1,2. En el desarrollo de nuevas drogas es importante determinar su farmacodinamia, pudiendo actuar como metabolito secundario directamente sobre el parásito o como un compuesto modificado por la célula hospedera. En estos casos es de importancia el uso del modelo de amastigotes axénicos para conocer el efecto antiparasitario, destacando las ventajas de este modelo sobre los promastigotes que no es la fase que se encuentra en el humano y los amastigotes intracelulares que son más difíciles y costosos de mantener ³. Se ha podido demostrar que la variación de pH y temperatura son claves en la conversión de promastigote a amastigote axénico ^4,5.

Presentamos los resultados de un estudio cuyo objetivo fue la obtención y sostenibilidad del cultivo de amastigotes axénicos de L. peruviana y L. braziliensis como modelos para futuros estudios sobre efectividad de drogas y fisiología del parasito.

Los promastigotes de la cepa referencial HB86 (L. peruviana) y LC53 (L. braziliensis) fueron cedidos por el Laboratorio de Patho-antígenos de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. Los promastigotes procíclicos cedidos fueron inoculados 50 µL en pocillos de microplacas de 96 en una concentración de 2,34 x 10⁶/mL en 300 µL de medio Schneider, suplementados consuero bovino fetal al 20% y penicilina 10 000 U/estreptomicina 10 mg/mL, usando diferentes pH (4,7 - 5,2 - 5,7 - 6,2) a 35 ºC, usando 3 repeticiones por cada pH. Las lecturas se realizaron cada 7 días por 1 mes usando un conteo microscópico de parásitos teñidos por el colorante Wright, usando 10 µL de cultivo fijado en lámina portaobjeto y cubriendo 100 campos.

El porcentaje de conversión por cada pocillo, usando 3 repeticiones para cada pH, se obtuvo usando la siguiente fórmula: número de amastigotes observados en 10 µL/ número de parásitos observados en 10 µL * 100, con el objetivo de determinar el pH optimo donde se observó la total y más rápida conversión de promastigotes a amastigotes axénicos.

Para el mantenimiento se tomó 50 µL de medio de cultivo con parásitos (amastigotes axénicos del pH idóneo) y se agregó en 300 µL de medio con el pH idóneo sin parásitos cada 7 días. La lectura se realizó cada 7 días por 176 días.

El único medio con la variable pH en la que existió 100% de conversión de promastigote a amastigote axénico, tanto para HB 86 como para LC 53, fue a pH 4,7, variando entre 63,7% al 7º día, 97% al día 42º y 100% al día 56º. Manteniéndose al 100% de conversión hasta el día 176 para HB 86, 55,4% al día 7º, 96,7% al día 14º. Para LC53, 100% de conversión al día 56º y hasta el día 176. La carga parasitaria a pH 4,7 estuvo entre 11661/ µL al día 7º, hasta 300/µL al día 56º para HB 86; y entre 9769,5/µL al día 7º, hasta 120/ µL al día 56º. Figura 1.

Figura 1 A la izquierda HB86 (L. peruviana) en mantenimiento a los 14 días a pH 4,7, visto al microscopio de contraste de fases, aumento 400X. A la derecha LC53 (L. braziliensis) en mantenimiento a los 14 días a pH 4,7, visto al microscopio de contraste de fases, aumento 400X. 

Aunque un estudio previo reportó la conversión de L. braziliensis en forma axenica, no se conoce por cuánto tiempo se pudo mantener esta forma in vitro; ya que de no estar conservada esta forma parasitaria, el efecto de las drogas contra el parásito podría estar sobreestimado ³. Otro estudio previo mencionó la conversión del promastigote a amastigote axénico de Leishmania peruviana, aunque su uso fue la infección inmediata a nivel celular sin dilucidar si estos parásitos podrían ser viables en el tiempo en el medio axénico ¹. En contraste, nuestro estudio logró mantener la forma axénica de L. peruviana y L braziliensis al 100% al día 56 y manteniéndose hasta por 176 días donde terminó el estudio.

Concluimos que se obtuvo amastigotes axénicos de Leishmania peruviana y Leishmania braziliensis con una conversión del 100% de promastigotes procíclicos a amastigotes axénicos al día 56º, y que se mantuvo hasta el día 176º a pH 4,7, a 35 Cº. Este hallazgo es de importancia para el estudio de drogas y la fisiología del parásito.