RESUMEN

El presente estudio tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia de los pestivirus de la enfermedad de la diarrea viral bovina (DVB) y enfermedad de la frontera (EF) en rumiantes de la comunidad de Silly, provincia de Canchis, Cusco, a través de la detección de anticuerpos en el suero sanguíneo de alpacas (n=200), bovinos (n=38) y ovinos (n=45) hembras adultas, mediante la prueba de virus-neutralización. El 11.5 ± 4.4% (23/200) y el 9.5 ± 4.1% (19/200) de las alpacas presentaron anticuerpos neutralizantes contra los virus DVB y EF. El 73.7 ± 13.9% (28/38) y 76.3 ± 13.5% (29/38) de los bovinos y el 13.3 ± 9.9% (6/45) y 15.5 ± 10.6% (7/45) de los ovinos presentaron anticuerpos contra la DVB y EF, respectivamente. Estos resultados confirman la presencia de la infección pestiviral en rumiantes bajo un sistema de crianza mixto en una comunidad campesina del Cusco.

Palabras clave: Diarrea viral bovina, enfermedad de la frontera, alpacas, bovinos, ovinos, anticuerpos, virus-neutralización.

ABSTRACT

The seroprevalence of bovine viral diarrhoea virus (BVDV) and border disease virus (BDV) in serum samples of alpacas (n=200), bovine (n=38) and ovine (n=45) of a rural community of Cusco, Perú was carried out by virus-neutralization test. The 11.5 ± 4.4% (23/200) and 9.5 ± 4.1% (19/200) of alpacas had neutralizing antibodies against BVD and BD virus. The 73.7 ± 13.9% (28/38) and 76.3 ± 13.5% (29/38) of bovine and the 13.3 ± 9.9% (6/45) and 15.5 ± 10.6% (7/45) of ovine had antibodies to BVDV and BDV respectively. These results confirm the presence of pestiviral infection in ruminants of a mixed breeding system in a rural community.

Key words: Bovine viral diarrhoea virus, border disease virus, alpaca, bovine, sheep, antibodies, virus-neutralization.

INTRODUCCIÓN

Los pestivirus constituyen un género de la familia Flaviviridae, conformado por el virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB), el virus de la Fiebre Porcina Clásica (VFPC) y el virus de la Enfermedad de la Frontera (VEF); agentes relacionados estructural y antigénicamente que presentan reacciones cruzadas entre ellos (Carlsson, 1991; Sakoda et al., 1999) y causan infecciones entre especies (Becher et al., 1999). El éxito en los rumiantes es debido a su habilidad de cruzar la barrera placentaria, invadir el feto y generar una infección persistente que continua durante la vida postnatal, clínicamente inaparente, excretando el virus y diseminándolo a un amplio rango de hospederos Artiodactyla (Becher et al., 1997; Paton et al., 1999).

La transmisión puede ser por inhalación o ingestión de saliva, descarga oculonasal, orina, heces, leche, secreciones uterinas, fluido amniótico, placenta y semen de animales infectados (Baker, 1995). Los pestivirus poseen un especial tropismo por las células del sistema inmune y células epiteliales de los tractos reproductivo, entérico y respiratorio ocasionando como consecuencia de su replicación en estas células un conjunto de patologías dependiendo de la cepa viral y momento en que ocurre la infección durante la gestación (Potgieter, 1995).

Estudios serológicos han demostrado la presencia de la DVB en alpacas de una empresa asociativa de Puno (Rivera et al., 1987) y de una comunidad campesina con crianza mixta de Arequipa (Manchego, 1991), pero no ha sido detectado en alpacas criadas bajo un buen sistema de manejo (Risco et al., 1998).

Más del 80% de los camélidos en el sur del país están en manos de pequeños criadores que utilizan el sistema de crianza mixto, el cual promueve la transmisión interespecie de los pestivirus (Rivera et al., 1987). El bajo índice de natalidad y la mortalidad neonatal constituyen severos problemas en la crianza de camélidos en crianza mixta y el rol de los pestivirus en la presentación de estos problemas aún no ha sido elucidada, por lo que el presente trabajo tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia del VDVB y VEF en alpacas, bovinos y ovinos de crianza mixta en una comunidad campesina.

MATERIALES Y MÉTODOS

Animales y muestras

El estudio se realizó en una comunidad campesina de Silly, localizada en la Provincia de Canchis, Cusco. Se utilizaron 200 alpacas, 38 bovinos y 45 ovinos hembras criollos adultas, que eran parte del grupo mixto de producción de la comunidad.

El tamaño muestral para la población de alpacas (n=200) se obtuvo mediante el método para estimar una proporción a través de la aproximación normal a la distribución normal, utilizando para su cálculo una proporción de 0.14 y un nivel de confianza del 95% (Manchego, 1991). El número de bovinos y ovinos utilizados en el estudio estuvo en función de las posibilidades de la comunidad.

Las muestras de sangre fueron obtenidas individualmente por punción de la vena yugular utilizando vacutainers, y transportadas al Laboratorio de Microbiología del IVITA-Maranganí de la Facultad de Medicina Veterinaria (FMV) de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM) para la obtención del suero sanguíneo. Las muestras procesadas fueron transportadas al Laboratorio de Virología de la FMV, UNMSM donde fueron mantenidas en congelación a -20°C hasta su procesamiento.

Reactivos

Se utilizaron cultivos primarios de células de cornete nasal de feto bovino (CNB) libres de VDVB y VEF como sistema indicador de prueba de neutralización viral; medios de cultivo MEN (Eagle Minimal Essencial Medium) y L-15 (Leibovitz) (SIGMA) en una proporción 50:50 suplementadas con el 10% de suero fetal bovino libre de VDVB (SIGMA) y antibióticos. Las cepa "Singer" del VDVB y la cepa Cosbay del VEF, obtenidas comercialmente (NVS, AMES-IOWA, USA) fueron utilizadas como antígenos en la prueba de neutralización viral.

Detección de anticuerpos pestivirales

La detección y cuantificación de los anticuerpos contra el VDVB y VEF fue realizada separadamente mediante la prueba de neutralización viral según el protocolo disponible en el Laboratorio de Virología de la FMV-UNMSM. El título del suero fue la dilución más alta capaz de neutralizar las 100 DI₅₀CC/50µl del virus, evidenciado por la ausencia de lesión celular. Títulos del suero iguales o mayores a 1:2 fueron considerados positivos a anticuerpos.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

El 11.5 (23/200) y 9.5% (19/200) de las alpacas adultas fueron seroreactoras al VDVB y al VEF frente a 73.7 (28/38) y 76.3% (29/38) en bovinos y 13.3 (6/45) y 15.5% (7/45) en ovinos, respectivamente (Cuadro 1).

La habilidad de los pestivirus de cruzar la barrera de especie (Brownlie et al., 1998) debería ser altamente favorecida en un sistema de crianza mixto pero, al parecer, la infección pestiviral en los camélidos sudamericanos tiene un patrón diferente como lo indica el bajo nivel de alpacas seroreactores al VDVB y VEF, pese a que ambos virus tuvieron amplia distribución en bovinos del mismo rebaño.

La seroprevalencia del VDVB en alpacas resultó similar (11.1%) a lo reportado por Rivera et al. (1987) y Manchego (1991) hace más de una década. Esta baja seroprevalencia de los pestivirus en alpacas adultas sugiere la existencia de factores que disminuyen la transmisibilidad viral hacia los camélidos. Algunos de estos factores podrían ser la directa incidencia de los rayos ultravioleta que no permitiría la sobrevivencia viral, así como el sistema de pastoreo en donde los bovinos pastan primero seguido por las alpacas y después los ovinos.

No hay duda de la susceptibilidad de las alpacas a los pestivirus como lo demuestran los estudios de Rivera et al. (1987) y Manchego (1991), pero al parecer el mecanismo de la infección pestiviral en las alpacas difiere de los otros rumiantes pues usualmente cuando el VDVB ingresa a un hato de bovinos susceptibles se difunde rápidamente, los animales seroconvierten y los anticuerpos perduran en niveles detectables por un tiempo largo (Fredriksen et al., 1999).

Se pudo determinar que más del 30% de las alpacas presentaron títulos de anticuerpos contra el VDVB y VEF mayores a 1:256 (Cuadros 2 y 3) los cuales en animales no vacunados son considerados títulos altos y significan un continuo desafío o infecciones recientemente adquiridas a partir de animales infectados como lo indica Luzzago et al. (1999). En este caso es probable que la infección provenga a partir de los bovinos, ya que esta especie es la principal fuente de infección a otras especies (Carlsson, 1991; Paton et al., 1999) o durante las exposiciones de alpacas, bovinos u ovinos en las ferias comunales en donde son confinados animales de diversos estados sanitarios.

El permanente estado de estrés debido a fallas nutricionales, carga parasitaria, manejo deficiente etc., podrían estar favoreciendo la circulación de los pestivirus DVB y EF en los bovinos de la comunidad como lo indican los títulos de anticuerpos detectados que van desde 1:8 hasta mayores a 1:256 para el caso del VDVB (Cuadro 2) y con ligeras variaciones en el caso del VEF (Cuadro 3), sugiriendo diversos grados de exposiciones de los bovinos y ovinos a ambos virus.

En el presente estudio se utilizó la cepa Cosbay (VEF) como antígeno para detectar anticuerpos contra el VEF en las tres especies de rumiantes de la comunidad, esperándose encontrar en el ovino una prevalencia mayor o igual al reportado en el bovino (76.3%), pero sólo el 15.5% de ovinos fueron reactores al VEF. Esta diferencia frente al bovino podría ser debido al escaso número de muestras o que el VEF no está muy difundido en los ovinos de la comunidad.