ARTÍCULOS PRIMARIOS

 

Seroprevalencia de Neospora caninum en bovinos de Lima y comparación entre ELISA e IFI

Seroprevalence Neospora Caninum in Bovines of Lima and Comparison Between Elisaand Ifat

 

Enrique Serrano-Martínez^1,2, Roberto Evaristo R.¹, Marco Quispe H.¹, Elizabeth Hinostroza M.¹

¹ Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Peruana Cayetano Heredia, Lima, Perú

² E-mail: enrique.serrano@upch.pe

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RESUMEN

El objetivo del estudio fue evaluar la prevalencia de anticuerpos frente a Neospora caninum en bovinos de establos de la cuenca lechera del departamento de Lima, Perú, y la concordancia entre dos técnicas diagnósticas empleadas para la detección de anticuerpos en suero: ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) e inmunofluorescencia indirecta (IFI). El estudio se realizó entre junio de 2015 y diciembre de 2016 en muestras de suero de 3407 bovinos lecheros provenientes de 101 establos de Lima (Barranca, Huaura, Huaral, Canta, Lima, Huarochirí, Cañete yYauyos). La prevalencia de la infección a N. caninum fue de 31.0% (1023/3407) obtenida por ELISA y 29.9% (1018/3407) por IFI. La concordancia entre ambas técnicas diagnósticas fue buena (K=0.98) y estadísticamente significativa (p<0.001). Asimismo, 69 de los 101 establos resultaron positivos (68.3%). Los resultados demostraron que los bovinos de establos lecheros de Lima tienen prevalencia individual moderada y alta prevalencia intra-rebaño frente a N. caninum.

Palabras clave: neosporosis; producción láctea; epidemiologia; IFI; ELISA

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ABSTRACT

The objective of this study was to evaluate the prevalence of antibodies against Neospora caninum in dairy cattle farms of the department of Lima, Peru, and the conconrdance between two diagnostic techniques used for the detection of antibodies in serum: enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunofluorescence antibody test (IFAT). The study was conducted between June 2015 and December 2016 in serum samples of 3407 dairy cattle from 101 farms in Lima (Barranca, Huaura, Huaral, Canta, Lima, Huarochirí, Cañete and Yauyos). The prevalence of infection to N. caninum was 31.0%(1023/3407) byELISAand 29.9% (1018/3407) byIFAT.The concordance between both diagnostic techniques was good (K=0.98) and statistically significant (p<0.001). Likewise, 69 of the 101 farms were positive (68.3%). The results showed that cattle from Lima dairy farms have moderate individual prevalence and high intra-herd prevalence against N. caninum.

Key words: neosporosis; milk production; epidemiology, IFAT; ELISA

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INTRODUCCIÓN

La neosporosis es una enfermedad cosmopolita que ocasiona importantes pérdidas económicas, afectando a una gran variedad de animales, principalmente a bovinos y es considerada como una de las principales causas de abortos a nivel mundial (Dubey, 2003). Neospora caninum es un parásito intracelular obligado que pertenece a la familia Apicomplexa, donde también se hallan los géneros Toxoplasma, Isospora y Sarcosystis, los cuales se diferencian por el tipo de huéspedes que intervienen durante su ciclo evolutivo (Dubey et al., 2007). La neosporosis es considerada una enfermedad importante debido a las infecciones reportadas en varios países, incluyendo Perú (Rivera et al., 2000).

El ciclo biológico se terminó de describir en 1998 al comprobarse que el perro era el hospedero definitivo (McAllister et al., 1998), siendo más susceptibles de presentar patologías neuromusculares los perros jóvenes (Knowler y Wheeler, 1995; Dubey y Lindsay, 1996). Por ello, la cercanía de estos con bovinos estabulados condiciona a la transmisión. La infección en caninos y bovinos ha sido reportada en varios países, pero con escasa manifestación neurológica (Dubey, 2003; Dubey et al., 2007; Dubey y Shares, 2011). En los estudios epidemiológicos realizados por Basso et al. (2001) se demostraron prevalencias variadas, donde los caninos de zonas urbanas presentaron menor infección comparado con aquellos de establos; asimismo refiere que la prevalencia aumenta cuando los canes proceden de establos con mayor casuística de abortos bovinos.

La infección por N. caninum se ha presentado en establos bovinos del Perú (Horna et al., 2003; Quevedo et al., 2003). La cuenca lechera de Lima no es ajena a los problemas reproductivos y la presencia de N. caninum, ya que ha sido demostrada en varios establos de Lima (Silva et al., 2002) desconociéndose la fuente de infección. Por otro lado, Rivera et al. (2000) reportaron que 62.1% de las vacas en Lima con antecedentes de aborto tenían anticuerpos anti-Neospora caninum. Asimismo, Rivera (2001) reportó que 40% de los fetos bovinos abortados fueron positivos a este parásito.

Dubey et al. (1996) menciona que las técnicas serológicas de diagnóstico usadas para la detección de anticuerpos frente a este parásito son el ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), inmunofluorescencia indirecta (IFI), test de aglutinación para Neospora y Western Blot. El presente estudio tuvo como objetivo determinar la seroprevalencia de Neospora caninum en bovinos de establos lecheros de Lima, Perú, mediante las técnicas de ELISA e IFI, así como determinar la concordancia entre ambas técnicas.

MATERIALES Y MÉTODOS

El estudio fue realizado en bovinos lecheros estabulados del valle de Lima, ubicado en la costa central del Perú. La zona se encuentra ubicada entre los 0 y los 500 msnm, de clima templado, con alta nubosidad en el invierno y humedad relativa de 75-80% (SENAMHI, 2016). El tamaño muestral fue calculado con base al censo del Instituto Nacional de Estadística e Informática (INEI, 2012).

Entre junio de 2015 y diciembre de 2016 fueron muestreados 3407 bovinos provenientes de 101 establos lecheros ubicados en el valle de Lima: Barranca (103), Huaura (581), Huaral (412), Canta (263), Lima (570), Huarochirí (446), Cañete (450) y Yauyos (582). Las muestras de sangre se extrajeron por punción de la vena yugular y se llevaron al Laboratorio de Parasitología Animal de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Peruana Cayetano Heredia, Lima, donde fueron centrifugadas a 1500 g por 5 minutos. El suero obtenido se colocó en microtubos de 1.5 ml y se les mantuvo en congelación hasta su procesamiento.

La presencia de anticuerpos frente a N. caninum de determinó mediante la técnica de ELISA utilizando el kit comercial Neospora Ab Test (IDEXX, EEUU), considerando el protocolo del fabricante. La sensibilidad y especificidad de las pruebas es de 100 y 99.2%, respectivamente. Los valores de la densidad óptica se midieron usando un espectrofotómetro de 650 nm.

La detección de anticuerpos de N. caninum en suero se determinó, además, mediante la técnica del IFI. Se utilizó el antígeno de N. caninum (10⁷/ml taquizoítos formolados, cepa NcSp7), Anti IgG bovino marcado con isotiocianato de fluoresceína (VMRD, EEUU), en una dilución de 1:200. Asimismo, se utilizaron suero bovino control positivo y negativo a anticuerpos contra N. caninum. Para la interpretación se consideraron como muestras positivas al observarse el color fluorescente total del taquizoíto y negativas al carecer de fluorescencia o presentar fluorescencia parcial.

Los resultados de prevalencia se expresaron en forma porcentual. Se estimó la sensibilidad (S = VPI(VPI+FPI)*100), especificidad (E = VNI/(FNI+ VNI)*100), valor predictivo positivo (VPP = VPI/ (VPI+FPI)*100) y valor predictivo negativo (VPN = VNI/(FNI+VNI)*100) de ambas técnicas, donde VPI y VNI = verdaderos positivos y negativos a IFI, respectivamente, y FPI y FNI = Falsos positivos y negativos a IFI, respectivamente. Los resultados fueron categorizados como positivos y negativos en tabulación cruzada, y comparados por posibilidades de ser positivos mediante el test de kappa de Cohen (concordancia) con un nivel de significancia de 95%. La técnica de ELISA fue considerada como «gold standard».

RESULTADOS

La seropositividad de anticuerpos frente a N. caninum en bovinos provenientes del valle lechero de Lima fue de 31.0% (1023/ 3407) mediante la técnica de ELISA y 29.9% (1018/3407) mediante IFI (Cuadro 1). De los 101 establos evaluados, 69 de ellos (68.3%) presentaron bovinos con anticuerpos contra el parásito detectados por ambas pruebas serológicas. La concordancia entre las dos técnicas diagnósticas fue buena (K=0.98) y estadísticamente significativa (p<0.001) (Cuadro 2).

La sensibilidad de IFI fue 98.1% y la especificidad de 99.4%. Los cálculos de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN) con 95% de intervalo de confianza se muestran en el Cuadro 3.

DISCUSIÓN

La seroprevalencia del protozoario Neospora caninum en ganado bovino lechero ha sido estudiado en diversas partes del mundo (Huong et al., 1998; Bae et al., 2000; Ooi et al. 2000), así como su importancia como agente causal de abortos en bovinos (Gondim et al., 1999; Atkinson et al. 2000). La cuenca lechera de Lima es una de las principales fuentes de abastecimiento de productos lácteos del Perú, y el presente estudio reveló una prevalencia anti-N. caninum de 31.0% (1023/3407) en sueros bovinos provenientes de 101 establos lecheros mediante la prueba de ELISA y 29.8% (1018/3407) mediante la técnica de IFI, además de una seroprevalencia intra-rebaño de 68.3% (69/101) mediante ambas técnicas. Estos resultados demuestran que la seroprevalencia frente a N. caninum en los establos lecheros de Lima es moderada de manera individual y alta a nivel intra-rebaño.

Davison et al. (1999) evaluaron en el Reino Unido mediante la prueba de ELISA a 372 vacas con terneros neonatos previos a la ingesta de calostro, encontrando 124 vacas y 188 terneros seropositivos a N. caninum, dando una probabilidad de trasmisión vertical de 95.2%. Estos resultados revelan que las vacas seropositivas tienen mayor probabilidad de producir terneros infectados y perpetuar la infección del hato.

Los resultados confirman la presencia continuada de N. caninum en el departamento de Lima. En estudios en otras localidades, como en Chachapoyas en bovinos lecheros de crianza extensiva mayores de dos años se encontró 40.4% (107/265) de seropositividad a este parásito mediante IFI (Quevedo et al., 2003), mientras en Junín, utilizando la misma técnica, se encontró 12.8±3.5% (45/347) de prevalencia (Puray et al., 2006).

N. caninum tiene un gran impacto a nivel mundial. Gondim et al. (1999) reportaron una prevalencia de 14.1% en 447 bovinos en Bahia, Brasil; Campero et al. (1998) encontró una seroprevalencia de 56.9% en Argentina; Buxton et al (1997) señalaron una seroprevalencia de 59% en vacas con historias de abortos en Escocia; Ooi et al. (2000) encontraron 44.9% de anticuerpos positivos a N. caninum en Taiwán; y Atkinson et al. (2000) reportaron 24% de seroprevalencia en 266 bovinos lecheros en Australia tras un periodo de abortos. Todos los resultados mencionados fueron determinados a través de IFI. Por otro lado, estudios realizados mediante la técnica de ELISA por Kowalczyk et al. (2016) en 97 hatos lecheros en Polonia reportaron una prevalencia de 56.7% (56/97) frente a N. caninum; en tanto que Enachescu et al. (2014) reportaron en el sur de Rumanía seroprevalencias de N. caninum de 45 y 56.8%, utilizando dos kits comerciales de ELISA. Estos resultados demuestran que el parásito es cosmopolita y la prevalencia es mayor en el ganado lechero por el propósito y tiempo de vida.

CONCLUSIONES

• Se encontró una prevalencia individual moderada de anticuerpos frente a N. caninum de 31.0 ± 1.5% mediante la técnica de ELISA y 29.8 ± 1.5% mediante la técnica de IFI en 3407 bovinos de propósito lechero de Lima, Perú.

• La concordancia diagnóstica entre las técnicas serológicas ELISA e IFI frente a N. caninum en bovinos es buena (K=0.98).

• Se encontró una prevalencia intra-rebaño alta de anticuerpos frente a N. caninum (68.3%; 69/101) mediante las técnicas de ELISA e IFI.

Agradecimientos

Los autores agradecen el financiamiento del estudio al Fondo para la Innovación, Ciencia y Tecnología (FINCyT-Innóvate Perú), Proyecto «Obtención y caracterización del primer aislado de Neospora caninum causante de abortos y mortalidad neonatal en la producción bovina lechera del Perú, con fines inmunodiagnóstico y vacunal» (Contrato 167-PNICP-PIAP-2015 FINCYT); al Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo (CYTED) por el apoyo financiero brindado a la Red Temática 113RT0469 PROTOZOOVAC: «Diagnóstico y control de las protozoosis reproductivas del ganado bovino» que permitió la capacitación técnica de los investigadores para la ejecución del estudio. Del mismo modo, al Dr. Luis Miguel Ortega-Mora y al Grupo SALUVET de la Universidad Complutense de Madrid, España, por la donación de la cepa de Neospora caninum (NcSp7).

 

LITERATURA CITADA

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Recibido: 26 de octubre de 2017

Aceptado para publicación: 15 de marzo de 2018