INTRODUCCIÓN
La crianza de camélidos sudamericanos es de importancia económica para los pobladores altoandinos por la producción de fibra y carne y gran adaptabilidad a la altura (Huanca et al., 2007); sin embargo, presenta serias limitaciones en su eficiencia productiva y reproductiva, de allí que se viene investigando diversas alternativas de mejoramiento de la producción, incluyendo biotecnologías reproductivas, entre las cuales destacan los estudios sobre el control del desarrollo folicular (Trasorras et al., 2013).
La fisiología reproductiva de los camélidos sudamericanos tiene la peculiar característica de ser animales de ovulación inducida; es decir, necesitan de un estímulo externo, como la cópula, para que las hembras ovulen (San Martín et al., 1968; England et al., 1969; Fernández Baca et al., 1970). Sin embargo, un 5% de animales llega a ovular espontáneamente con solo estímulos olfatorios, auditivos o visuales (Fernández Baca et al., 1970).
Se ha reportado que en el plasma seminal de los camélidos sudamericanos se encuentra un Factor Inductor de la Ovulación (FIO), que ha sido identificado como el factor de crecimiento neural-B (NGF-B), siendo este el responsable de la ocurrencia de ovulación (Adams et al., 2005; Kershaw-Young et al., 2012; Ratto et al., 2012). Este factor también se encuentra en especies de ovulación espontánea, pero en menor concentración; de allí que al aplicar plasma seminal de toros en hembras camélidas se obtiene una tasa de ovulación de 25% en comparación con tasas de ovulación de 100 cuando se aplica plasma seminal de llama o de alpaca (López et al., 2006).
El mecanismo de acción del FIO/NGFB no está del todo esclarecido. Se ha reportado que el plasma seminal de la alpaca estimula la secreción de LH a nivel hipofisiario, no encontrándose diferencias en los niveles de secreción al adicionar un anticuerpo anti-GnRH (Paolicchi et al., 1999); sin embargo, Silva et al. (2012) encontraron una menor secreción de LH en llamas ovariectomizadas, que mejora cuando se les aplica estradiol exógeno, lo cual estaría indicando que el FIO/ NGF necesitaría la acción del estradiol a nivel hipotalámico. Esto ha sido sugerido en un estudio reciente, señalando que la inducción de la ovulación estaría mediada por neuronas Kisspeptin (El-Allali et al., 2017).
El efecto inhibitorio que tiene el folículo dominante sobre los demás folículos subordinados ha sido atribuido a factores intraováricos, tales como la inhibina (Ginther, 2000), por lo que se sugiere eliminar la presencia de folículos >7 mm en camélidos, y trabajar con la onda folicular emergente siguiente (Ratto et al., 2003). Los protocolos hormonales más usados para la sincronización de la onda folicular son en base a GnRH (Andrade, 2007) y LH (Ratto et al., 2003; Andrade, 2007), contando con un intervalo a la emergencia de una nueva onda folicular de 4 y 2-5 días, respectivamente. Asimismo, la ablación folicular se ha aplicado como un tratamiento no-hormonal habiéndose reportado un intervalo a la aparición de folículos >3 mm de 4 días (Ratto et al., 2003) y 2 días (Silva et al., 2018) en promedio. Sin embargo, no hay reportes sobre el efecto del plasma seminal de camélidos sudamericanos sobre la dinámica folicular en los camélidos. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto de la aplicación de plasma seminal, un análogo de GnRH y la ablación folicular sobre la dinámica folicular en llamas.
MATERIALES Y MÉTODOS
Lugar de Estudio
El estudio se llevó a cabo durante el mes de enero de 2018 en el Centro de Investigación y Producción La Raya, perteneciente a la Universidad Nacional delAltiplano (UNA). El centro está ubicado entre los 4200 y 5500 msnm, en el distrito de Santa Rosa, provincia de Melgar, Puno, Perú. La zona está considerada como una zona agroecológica de puna húmeda.
Unidades Experimentales
Se utilizaron 24 llamas, con un rango de edad entre 6 a 8 años, sin cría al pie, sin antecedentes de problemas reproductivos y que habían tenido por lo menos un parto. Se les hizo una ecografía transrectal para determinar la presencia de un folículo preovulatorio >7 mm, con un ecógrafo ALOKA SSD 500 (Tokyo, Japón) equipado con un transductor lineal rectal de 5 MHz. Los animales estuvieron bajo las mismas condiciones y se encontraban al pastoreo sobre praderas de pasto natural.
Plasma Seminal
El plasma seminal fue obtenido mediante la colección de semen de cuatro alpacas macho de 4-7 años, pertenecientes al Laboratorio de Reproducción Animal de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Lima. Se hicieron colectas de semen, 2-3 veces por semana durante dos meses antes de la fase experimental, con ayuda de una vagina artificial adaptada de ovinos.
El semen colectado fue diluido con fosfato buffer salino (PBS, Gibco, EEUU) en proporción 1:1 y sometido a un procedimiento mecánico de pasaje por una aguja N.º 21 y jeringa de 10 ml, con el propósito de romper la viscosidad seminal. Posteriormente fue centrifugado a 1500 g, durante 20 min, repitiéndose el procedimiento para asegurar el retiro de espermatozoides en el sobrenadante. Las muestras obtenidas se colocaron en tubos falcón de 15 ml, añadiéndole sulfato de gentamicina (10 µg/10 ml de solución), formando un pool del plasma de las muestras de todos los machos. El plasma fue congelado a -20 °C hasta su utilización.
Ablación Folicular
Se realizó anestesia epidural baja, aplicando 2 ml de lidocaína al 2% sin epinefrina, para facilitar el manejo del animal La aspiración transvaginal eco-guiada del folículo dominante fue realizada con un ecógrafo ALOKA SSD 500, equipado con un transductor transvaginal convexo de 5 MHz y con una guía para posicionar la aguja de aspiración a lo largo de la línea de punción. Previamente. Se facilitó el aspirado con una bomba de vacío con una presión de 70 mm Hg.
Tratamientos
Los 24 animales fueron distribuidos en forma aleatoria en cuatro grupos experimentales de seis animales cada uno: T1: grupo control, 1 ml de PBS, vía IM; T2, 2 ml de plasma seminal, vía IM; T3, 1 ml de análogo de GnRH (0.0084 mg de acetato de buserelina, Conceptase®), vía IM; T4, ablación folicular.
El día 0 (D0) fue el día de aplicación de los tratamientos. Los animales del grupo T2 y T3 fueron evaluados mediante ecografía cada 2 h desde las 20 hasta las 36 horas pos-aplicación del tratamiento, para determinar el intervalo a la ovulación, con base a la ausencia del folículo dominante. Luego, fueron evaluados en forma diaria hasta el día 9 y y luego cada dos días hasta el día 15 pos-aplicación del estímulo. Estas evaluaciones se hicieron con un ecógrafo ALOKA SSD 500 y un transductor lineal modo B de 7.5 MHz con el fin de determinar el intervalo a la emergencia de una nueva onda folicular, a partir de la observación de folículos >3 mm, y el intervalo a la presencia de un nuevo folículo >7 mm.
Análisis Estadístico
Las mediciones del intervalo de tratamiento a la emergencia de folículos >3 mm, intervalo de tratamiento a folículos >7 mm, intervalo de tratamiento a la ocurrencia de ovulación y tamaño del cuerpo lúteo al día 8 pos-tratamiento fueron analizados mediante una prueba de análisis de varianza, utilizando el paquete estadístico IBM SPSS Statistics 25.
RESULTADOS
El intervalo desde la aplicación de los tratamientos hasta la emergencia de una nueva onda folicular (observación de folículos >3 mm) y al nuevo folículo >7 mm (nuevo folículo dominante) fue similar para los cuatro grupos (Cuadro 1).
No se encontró diferencia significativa para el intervalo a la ovulación entre los grupos T2 y T3. En todas estas ovulaciones, el cuerpo lúteo resultante fue de similar tamaño en el día 8 en ambos grupos (Cuadro 2)
Cavilla et al. (2013) indican que ocurre un tipo de solapamiento de la emergencia de ondas foliculares sucesivas, que explica que el intervalo desde la aplicación de los tratamientos a la emergencia de una nueva onda folicular se haya presentado el mismo día en todos los grupos, incluyendo el control.
DISCUSIÓN
Cavilla et al. (2013) indican que ocurre un tipo de solapamiento de la emergencia de ondas foliculares sucesivas, que explica que el intervalo desde la aplicación de los tratamientos a la emergencia de una nueva onda folicular se haya presentado el mismo día en todos los grupos, incluyendo el control.
Se dispone de reportes donde el intervalo a la emergencia de una nueva onda folicular como respuesta a la ablación folicular se presentó a los 3.1 ± 0.9 días con base a ecografías diarias (Ratto et al., 2003) y de 1.8 ± 0.4 días con ecografías cada 12 horas (Silva et al., 2018). Asimismo, Andrade (2007), con la aplicación de GnRH reportó el desarrollo de folículos >3 mm a los 4.6 ± 1.2 días. No obstante, las ecografías se realizaron en el presente estudio cada dos horas entre las 20 y las 36 h de la aplicación de los tratamientos para determinar la desaparición del folículo dominante, de allí que esta frecuencia de observaciones haya sido un factor determinante para determinar con mayor precisión el momento de la emergencia de una nueva onda folicular.
El intervalo al nuevo folículo dominante (>7 mm) en el presente estudio fue entre 8 y 10 días, sin diferencias entre grupos, incluyendo el grupo control, posiblemente atribuido al hecho que en todos los grupos se reportó la emergencia de una nueva onda folicular al mismo día, considerándose así como una especie de sincronización. Al respecto, Ratto et al. (2003) reportan un intervalo de 5.8 ± 1.0 días luego de la ablación folicular; mientras que Andrade (2007), aplicando GnRH reportó un intervalo de 7.9 ± 1.6 días.
Los resultados muestran que no existen diferencias significativas en el intervalo a la ovulación al aplicar GnRH o plasma seminal, siendo similar a lo reportado por otros autores (Adams et al., 2005; Ratto et al., 2006). Por otra parte, Adams et al. (2005) reportan que aplicando plasma seminal se genera un cuerpo lúteo más grande que al usar GnRH, pero partiendo con folículo dominante inicial de 11 mm. Es posible, que, entonces, además de requerirse un diámetro mínimo del folículo dominante >7 mm para inducir la ovulación, se tenga que considerar el rango de tamaño de estos folículos para obtener cuerpos lúteos de mayor tamaño.
CONCLUSIONES
Los intervalos a la emergencia de una nueva onda folicular y a la aparición de un nuevo folículo dominante en llamas no difieren entre los tratamientos con plasma seminal, GnRH o ablación folicular.
El intervalo entre la aplicación del tratamiento a la ovulación y el diámetro del cuerpo lúteo al día 8 de la aplicación de los tratamientos fueron similares al aplicar plasma seminal o GnRH.