INTRODUCCIÓN

El tumor venéreo transmisible canino (TVTC) es una neoplasia que se presenta en caninos y que se transmite por una transferencia alogénica de células cancerígenas vivas durante el coito (^{Strakova y Murchison, 2015}), aunque también puede transmitirse mediante el lamido y olfateo (^{Murchison, 2009}; ^{Castro et al., 2017}). TVTC es endémico en al menos 90 países y se cree que es la célula tumoral más diseminada y longeva que existe (^{Strakova y Murchison 2014}; ^{Ostrander et al., 2016}), presentándose principalmente en caninos que viven o tienen acceso permanente a la calle (^{Sousa et al., 2000}). El análisis del genoma del TVTC ha permitido esclarecer su origen y evolución ubicándolo como el cáncer en caninos más antiguo hasta ahora conocido (^{Murchison et al., 2014}).

El diagnóstico se realiza por las manifestaciones clínicas de la neoplasia, como son textura friable con aspecto de coliflor, nodular o multilobulado (^{Ganguly et al., 2013}). Asimismo, la observación de las células tumorales por citología e histopatología suele ser suficiente para determinar la patología; sin embargo, el diagnóstico molecular es oportuno para confirmar el caso, siendo esta una herramienta útil en aquellos casos de difícil diagnóstico (^{Castro et al., 2017}). En la rutina clínica se utiliza el examen citológico mediante la técnica Biopsia Aspirativa con Aguja Fina (BACAF), que permite clasificar la neoplasia como de células redondas con los subtipos linfocitoide y plasmocitoide o una mezcla de ambos llamada mixto (^{Amaral et al., 2007}; ^{Montoya et al., 2012}).

Algunos autores afirman que el tumor que presenta un patrón celular plasmocitoide es más difícil para el manejo médico, requiriendo un mayor número de sesiones de quimioterapia en comparación con los otros subtipos, e inclusive puede llegar a presentar resistencia al tratamiento y hacer metástasis (^{Gaspar et al., 2009}; ^{Valençola et al., 2015}; ^{Setthawongsin et al., 2018}). En la citología se puede hallar, además, infiltrado inflamatorio como neutrófilos, linfocitos y macrófagos, sobre todo en aquellos pacientes con contaminaciones secundarias asociadas a bacterias, hongos o parásitos (^{Santos et al., 2005}; ^{Stockmann et al., 2011}).

Estudios de trasplante experimental caracterizan clínicamente el TVTC de acuerdo con los periodos de crecimiento en tres fases: progresión, estacionaria y regresión (^{Epstein y Bennett, 1974}; ^{Frampton et al., 2018}). De otra parte, en el examen histopatológico se han usado fases con los nombres de progresión, regresión temprana y regresión tardía, identificando para cada una ellas sus respectivas características de crecimiento y tisulares (Epstein y Bennett, 1974; ^{Yang et al., 1987}; ^{Mukaratirwa et al., 2004}). El protocolo terapéutico establecido para el TVTC con mayor éxito es el sulfato de vincristina como único fármaco, siendo una aplicación semanal a dosis de 0.5-0.7 mg/m2, administrando entre 4 a 8 dosis vía intravenosa (^{Oliveira et al., 2013}; ^{Otter et al., 2015}).

Figura 1 Formas de presentación macroscópica del tumor venéreo transmisible canino (TVTC) en canes pacientes del Hospital Veterinario de la Universidad de Caldas (Colombia): A, masa como coliflor; B, nodular; C, multilobulado 

El objetivo de este trabajo fue evaluar la posible relación de la clasificación de los subtipos citológicos y las fases histopatológicas del TVTC con la respuesta al tratamiento que permita inferir el número de quimioterapias requeridas hasta alcanzar la regresión total tumoral, permitiendo así establecer un factor pronóstico desde el diagnóstico. En el conocimiento de los autores, aún no se cuenta con un sistema que permita usar los subtipos citológicos como un factor de pronóstico del comportamiento biológico de la neoplasia.

MATERIALES Y MÉTODOS

Diagnóstico Molecular

En biopsias mantenidas en RNA Latter, todos los casos fueron confirmados como TVTC por qPCR mediante la identificación de un reordenamiento característico que implica un largo intercalado elemento nuclear (LINE) ubicado cerca al locus MYC (^{Castro et al., 2017}; ^{Setthawongsin et al., 2018}). Estas muestras fueron analizadas por el grupo de investigación en Cáncer Transmisible del departamento de Medicina Veterinaria en la Universidad de Cambridge Inglaterra.

Figura 2 Clasificación citomorfológica del tumor venéreo transmisible canino (TVTC). Linfocitoide. 40x (A) y 100x (B). Plasmocitoide. 40x (C) y 100x (D). Coloración Diff Quick 

RESULTADOS

En el laboratorio de patología veterinaria ingresaron 838 casos de caninos (521 de razas puras y 317 de raza mestiza) con algún tipo de neoplasia durante el periodo del estudio. De estos, 52 caninos llegaron naturalmente enfermos por TVTC genital, donde el 67.3% (35/52) fueron hembras y el 32.7% (17/52) machos. Entre estos, el 2.3% (n=12) correspondieron a caninos de razas puras y 12.6% (n=40) a caminos mestizos.

Figura 3 Etapas histológicas del tumor venéreo transmisible canino (TVTC) establecidas por ^{Mukaratirwa et al. (2004}). A. Proliferación. B. Regresión temprana. C. Regresión tardía. Fotografías tomadas con el lente 10x 

Figura 4 Proporción de subtipos citológicos del tumor venéreo transmisible canino (TVTC) en las tres fases histopatológicas 

El tratamiento con sulfato de vincristina fue efectivo en todos pacientes del estudio, requiriéndose cinco sesiones de quimioterapia en promedio para la involución tumoral, sin diferencia significativa para las variables analizadas. En cuanto a la citomorfología, 42.3% (22/52) de los pacientes fueron clasificados en el subtipo morfológico linfocitoide; 34.6% (18/52) como plasmocitoide y los restantes 23.1% (12/52) como mixtos.

La descripción morfológica de los subtipos celulares estuvo acorde con lo indicado en la literatura, pero adicionalmente se encontró que estas células tienen una marcada anisocitosis y son más grandes que los linfocitos y polimorfonucleares que generalmente acompañan el tumor. Las células linfocitoides midieron entre 18.48 y 28.32 µm (21.4 ± 3.6 µm) con núcleos que oscilaron entre los 10.5 y 18.4 µm (14.3 ± 2.3 µm), mostrando un valor en la relación núcleo/citoplasma de 1:1.5 para este subtipo. El tamaño de las células plasmocitoides estuvo entre 28.4 y 51.95 µm (34.2 ± 5.9 µm); mientras su núcleo midió entre 13.6 y 22.05 µm (16.6 ± 2.6 µm), siendo la relación núcleo/citoplasma de 1:2.

Cuadro 1 Número de quimioterapias requeridas para la involución total del tumor venéreo transmisible canino (TVTC) en pacientes clasificados por la fase histopatológica, seguido del subtipo citomorfológico 

Por otro lado, y respecto a las fases histopatológicas se encontró que 71.2% (37/52) de los pacientes presentaron tumores en etapa de progresión, 25% (13/52) en etapa de regresión temprana y 3.8% (2/52) en regresión tardía (Cuadro 1). Estos dos últimos pacientes eran hembras, cuyos subtipos citológicos y presentación macroscópica correspondió en un caso a una linfocitoide con un tumor de consistencia firme y nodulado y en otro caso a un plasmocitoide con un tumor friable en forma de coliflor, los cuales requirieron 6 y 4 sesiones de quimioterapia, respectivamente.

Los subtipos citológicos se presentaron en las tres fases histopatológicas (Figura 4). Se encontró que el 68.2% (15/22), 72.2% (13/18) y 75% (9/12) de los casos linfocitoides, plasmocitoides y mixtos, estaban en fase de progresión, respectivamente. De igual manera, al relacionar la histopatología con los subtipos citológicos se encontró que 37 pacientes cuyos tumores estaban en progresión, donde el 40.5% (15/37) se clasificaron citológicamente como linfocitoides, 35.1% (13/37) como plasmocitoides y el 24.3% (9/37) como mixtos (Cuadro 1).

DISCUSIÓN

Todos los pacientes presentaron una o varias masas tumorales en el área genital, diagnosticándose clínica, citológica, histopatológica y molecularmente como perros afectados por TVTC, aunque se desconocía el tiempo de evolución de la neoplasia. La mayoría de estos fueron hembras mestizas, lo cual coincide con ^{Brandão et al. (2002}); ^{Amaral et al. (2007}) y ^{Oliveira et al. (2013}). Ningún caso fue considerado como resistente, ya que todos los pacientes mostraron regresión total del tumor con el tratamiento empleado.

Respecto a la clasificación de los subtipos citológicos de los tumores, se encontraron más pacientes con TVTC linfocitoide, seguidos por plasmocitoide y por último mixto, contrario a otros reportes que indican un mayor número de tumores de tipo plasmocitoide, seguidos por el mixto y en menor frecuencia por linfocitoide (^{Gaspar et al., 2010}; ^{Oliveira et al., 2013}; ^{Setthawongsin et al., 2018}), y al estudio de ^{Fêo et al. (2018)} quienes solo observaron el tipo plasmocitoide.

Estudios previos demuestran que la infiltración intra-tumoral de linfocitos es mayor en la fase de regresión comparada con la fase de progresión (^{Hsiao et al., 2002}), incrementando gradualmente el infiltrado de una fase a otra (^{Liao et al., 2003}); asimismo, ^{Pérez et al. (1998}) sugieren que no solo los linfocitos T sino las células plasmáticas participan en una efectiva respuesta inmune contra TVTC mediante la producción de anticuerpos y macrófagos. En este sentido, ^{Frampton et al. (2018}) analizaron biopsias de TVTC de pacientes tratados con vincristina y observaron que algunas expresiones de genes ocurrían paralelamente con los cambios histopatológicos, mostrando que la regresión tumoral ocurre en pasos secuenciales implicando la activación del sistema inmune innato y la infiltración inmunitaria del tumor. En el presente estudio, si bien no se realizó una marcación o medición de las posibles células implicadas en la respuesta inmune contra el TVTC, se pudo evidenciar que la sola clasificación histopatológica no establece ningún pronóstico con respecto al tiempo de tratamiento, pues no se evidenciaron diferencias significativas en el número de quimioterapias requeridas para la involución total del tumor.

En el análisis de los subtipos citológicos de los tumores relacionadas con las fases histopatológicas no se pudo concluir ninguna relación entre ellas, además de evidenciarse que no es posible definir solo con el subtipo citológico el estado histopatológico en el cual llega el paciente antes de comenzar tratamiento quimioterapéutico. Debido a que en este estudio los pacientes fueron afectados naturalmente con TVTC y se desconocía el tiempo de evolución tumoral, no se pudo tener un punto de partida similar u homogéneo para todos los pacientes. Estudios experimentales realizados en ratones han mostrado que las células de TVTC mantienen sus características citológicas, histológicas y moleculares (^{Harmelin et al., 2002}), además que este modelo facilitaría el estudio de trasplante, progresión y metástasis del TVTC (^{Harmelin et al., 2001}). Esto permite sugerir la ejecución de estudios experimentales en ratones que permitan tener un control y registro de los tiempos en que desarrolla esta neoplasia y la respuesta a tratamiento en cada una de las fases.

Es importante mencionar que se presentaron nueve casos TVTC extragenital en cavidad nasal que no fueron incluidos en los análisis debido a la dificultad de la obtención de la muestra por biopsia incisional. Igualmente se debe indicar que ninguno de los 52 pacientes analizados se evidenció desarrollo de metástasis, contrario a los reportes de ^{Amaral et al. (2007}) y ^{Setthawongsin et al. (2018}) que sugieren que el tipo plasmocitoide tiene una mayor capacidad de desarrollo extragenital y de metástasis. En forma similar, si bien no se observó resistencia o diferencias en el número de semanas de tratamiento con sulfato de vincristina, ^{Valençola et al. (2015}) y ^{Simermann et al. (2009}) encontraron que el subtipo plasmocitoide requiere de más sesiones de tratamiento y en algunos casos presentaron resistencia a este.

Se puede concluir que los resultados presentados no mostraron relación entre las clasificaciones analizadas y factores como respuesta parcial al tratamiento, grado de benignidad o malignidad tumoral, metástasis o resistencia al medicamento. Este estudio podría contribuir a generar investigaciones moleculares o genéticas que profundicen en las reales diferencias e importancias que estos subtipos y fases puedan tener en la patogénesis del TVTC y si existe algún posible pronóstico de respuesta al tratamiento