INTRODUCCIÓN
La producción de cuyes constituye una actividad económica importante en varios países de la región Andina; sin embargo, las deficiencias sanitarias son una dificultad constante en el manejo y bioseguridad de las granjas. Existen diversos factores que predisponen a la presentación de enfermedades infecciosas bacterianas como son las deficientes condiciones higiénicas y sanitarias, cambios bruscos medioambientales, alta densidad animal y déficit nutricional, entre otros (Chauca, 1997; Avilés et al., 2014; Sánchez-Macías et al., 2018).
Streptococcus pneumoniae es una bacteria relacionada a problemas respiratorios (van der Linden et al., 2009; Harkness et al., 2010), reportándose en un 8.8% de procesos infecciosos en crianzas intensivas de cuyes en Lima (Killerby et al., 2019). La transmisión se da por aerosoles, contacto directo o verticalmente al nacimiento. Los animales pueden ser portadores subclínicos o presentar signos clínicos como anorexia, secreción nasal u ocular, estornudos, tos, disnea y problemas reproductivos (Shomer et al., 2015). Por otro lado, dentro de las principales lesiones observadas se describen la pleuritis fibrinopurulenta, pericarditis, peritonitis y neumonía supurativa (Percy y Barthold, 2007; Harkness et al., 2010).
Bordetella sp se encuentra también asociada a afecciones respiratorias (Fox et al., 2002). La infección puede manifestarse con inapetencia, depresión, flujo respiratorio superior, disnea, cianosis o afecciones reproductivas (Brabb et al., 2012; Shomer et al., 2015). Junto con Pasteurella sp son comensales de la mucosa orofaríngea y tracto gastrointestinal (Songer y Post, 2005), reportada en crianzas familiar-comercial a partir de cuyes con diversa signología (Morales, 2017).
Salmonella sp es un agente transmitido principalmente vía fecal-oral que genera daño entérico en cuyes. Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium) es la serovariedad más frecuentemente aislada en animales sanos portadores (Harkness et al., 2010; Chero et al., 2017). En Perú se reportan aislamientos superiores al 86% a partir de lesiones en hígado y bazo, y en menor porcentaje a nivel de pulmón, útero, vesícula biliar o intestino (Matsuura et al., 2010; Layme et al., 2011).
Otra bacteria como E. coli genera una signología variable con efectos adversos en la barrera intestinal (Harkness et al., 2010; Brabb, 2012; Ren et al., 2017). La transmisión se genera producto de las deficientes condiciones sanitarias y factores ambientales estresantes, ocasionando disbiosis y mortalidad (O’Rourke, 2004). En cuyes lactantes y reproductores ha sido aislada entre 23 y 40% en casos de índole infecciosa (Chuquizuta y Morales, 2017; Obregón et al., 2018; Killerby et al., 2019). Citrobacter sp es además comúnmente identificada en cuyes reproductores de crianza familiar-comercial (Morales, 2012; Killerby et al., 2019); además, es uno de los agentes implicados en cuadros de mortalidad en cuyes neonatos a partir de animales afectados (Chuquizuta y Morales, 2017; Obregón et al., 2018). A su vez, el agente oportunista Klebsiella pneumoniae genera afecciones respiratorias, cuadros septicémicos agudos, y lesiones a nivel toráxico y abdominal (Merino et al., 1992; Percy y Barthold, 2007; Shomer et al., 2015).
No se dispone de muchos estudios de aislados bacterianos y su susceptibilidad antibiótica en cuyes, a excepción de Salmonella (Matsuura et al., 2010; Salvatierra et al., 2018; Huamán et al., 2020). El estudio de la susceptibilidad antibiótica in vitro brinda información complementaria para el abordaje terapéutico, lo cual permite adecuar tratamientos dirigidos que sean efectivos y a su vez no generen resistencia en el tiempo (Cantón, 2010).
La región del Cusco es una zona altamente productiva de cuyes, siendo la provincia de Canchis una de las más importantes (INEI, 2012); sin embargo, son escasos los estudios sobre identificación y frecuencia de patógenos bacterianos asociados a problemas respiratorios y entéricos. El objetivo del presente estudio fue determinar la frecuencia de patógenos bacterianos asociados a lesiones respiratorias y enterohepáticas, así como evaluar el perfil de susceptibilidad antimicrobiana de los aislados provenientes de centros de crianza familiar-comercial de cuyes en Canchis, Cusco.
MATERIALES Y MÉTODOS
Población de Estudio
Se analizaron 230 cuyes de tres etapas productivas: gazapo (n=69), recría (n=74) y adulto (n=87), tanto machos (n=107) como hembras (n=123). Los animales presentaban lesiones macroscópicas a nivel de cavidad toráxica como neumonía, pericarditis, neumotórax (n=100) y a nivel entérico-hepático como ascitis, abscesos, congestión, focos necróticos o hemorrágicos, incluyendo bazo y nódulos linfáticos mesentéricos (n=130). Los especímenes tuvieron desde un día de nacidos hasta 14 meses de edad. Fueron remitidos antes de las dos horas después del sacrificio al Laboratorio de Bacteriología de la estación experimental del Centro de Investigaciones IVITA-UNMSM, sede Maranganí, Cusco, entre septiembre de 2018 a marzo de 2019. Los animales fueron sacrificados por los mismos productores, propietarios de dos centros de crianza familiar-comercial de la provincia de Canchis, Cusco.
Diagnóstico Microbiológico
La toma de muestra de los órganos (hígado, bazo, pulmón e intestino) se realizó durante la necropsia. El cultivo de las muestras se hizo mediante siembra microbiológica directa por agotamiento en agares McConkey, TSA (tripticasa de soya) y sangre (tripticasa de soya base con 5% de sangre desfibrinada de carnero). Las placas fueron puestas en anaerobiosis dentro de una jarra de Brewer hermética utilizando el sistema Anaerocult® C, e incubadas por 24-48 h a 37 ºC. Las colonias resultantes fueron identificadas según sus características y morfología macroscópica, tipo de hemólisis, tinción de Gram, actividad catalasa y pruebas bioquímicas para el caso de Gram negativas (Vadillo et al., 2002).
Susceptibilidad Antibiótica in vitro
La evaluación de la susceptibilidad antibiótica se realizó de acuerdo con el Manual de Procedimientos para la Prueba de Sensibilidad Antimicrobiana por el Método de Disco Difusión (INS, 2002). Para esto, se tomaron varias colonias de un cultivo bacteriano puro y se suspendieron en agua destilada estéril a una concentración equivalente a 0.5 de la escala de McFarland. La suspensión se sembró en tres direcciones con un hisopo estéril sobre una placa con agar Mueller-Hinton, se dejó reposar cinco minutos a temperatura ambiente y se colocó un máximo de cinco discos de antibióticos sobre la superficie del agar. Se incubó seguidamente a 37 ºC por 24 horas.
Los discos comerciales de antibióticos correspondieron a los utilizados en el manejo sanitario de cuyes: enrofloxacina (5 µg), ciprofloxacina (5 µg), gentamicina (10 µg), trimetoprima-sulfametoxazol (1.25/23.75 µg), oxitetraciclina (30 µg) y fosfomicina (20 µg) (Donnelly, 2020). Los halos de inhibición fueron medidos con una regla y expresados en milímetros (mm). Se determinó la cepa como resistente, susceptible o intermedio según indicaciones del fabricante (Oxoid, Inglaterra).
RESULTADOS
En 87% (87/100) de los cuyes con lesiones respiratorias se aisló al menos un tipo de agente bacteriano, resultando 124 cepas aisladas. Asimismo, en 90.8% (118/130) de los cuyes con lesiones enterohepáticas se aisló al menos un agente bacteriano resultando 153 cepas aisladas (Cuadro 1).
La frecuencia de aislamientos con dos agentes bacterianos resultó principalmente para Streptococcus sp y Bordetella sp con 52.9% (46/87), Streptococcus sp y Salmonella sp con 33.3% (29/87) y Bordetella sp y Salmonella sp con 13.8% (12/87) a partir de lesiones respiratorias, y Salmonella sp y E. coli con 36.4% (43/118) a partir de lesiones enterohepáticas.
En la distribución de animales de donde se aislaron agentes bacterianos respiratorios según la etapa productiva, 26.5% (23/87) de gazapos y 16.1% (14/87) de recrías resultaron positivos a Streptococcus sp; además, 13.8% (12/87) de recrías y 10.3% (9/87) de gazapos a Bordetella sp (Figura 1A). Con relación al sexo, 52.9% (46/87) de machos resultaron con lesiones respiratorias y 51.7% (61/118) de hembras resultaron con lesiones enterohepáticas. Respecto a las lesiones enterohepáticas, 36.4% (43/118) de recrías y 15.3% (18/118) de adultos resultaron positivos a Salmonella sp, además del 22.9% (27/118) de recrías y 4.2% (5/118) de gazapos a E. coli (Figura 1B).
En cuanto a los resultados de la evaluación de susceptibilidad antibiótica, se observó una frecuencia de sensibilidad de más del 50% de cepas para todos los antibióticos evaluados, y frecuencias de resistencia de 5.4% para enrofloxacina, 3.6% para trimetoprimasulfametoxazol y 0.7% para gentamicina. Asimismo, se obtuvo una frecuencia de susceptibilidad intermedia de 21.3 y 12.6% para enrofloxacina y trimetoprima-sulfametoxazol, respectivamente (Cuadro 2).
La frecuencia de cepas resistentes fue mayor en E. coli (12.5%) para enrofloxacina, seguido de Salmonella sp (7.3%), mientras que la resistencia para Salmonella sp para trimetoprima-sulfametoxazol y gentamicina fue del 7.7 y 2.2%, respectivamente (Cuadro 3).
DISCUSIÓN
En más del 80% de cuyes afectados en el presente estudio se aisló al menos un agente bacteriano, resultado similar al obtenido por Chuquizuta y Morales (2017) y Killerby et al. (2019) en gazapos y reproductoras a partir de especímenes muertos en sistemas de crianza comercial de Lima. Esto demuestra el alto porcentaje de casos infecciosos donde los agentes bacterianos podrían estar involucrados, además de otras consideraciones multifactoriales.
Streptococcus sp fue la bacteria aislada en mayor frecuencia a partir de lesiones respiratorias, seguido de Bordetella sp, la cual no presenta antecedentes de reporte en Perú para cuyes. Por otro lado, se encontró además Salmonella sp, agente principalmente reportado en problemas entéricos, cuya presencia en localizaciones extra entéricas estaría vinculada a cuadros severos de septicemia (Layme et al., 2011). Además, se aisló en menor grado Klebsiella sp y Pasteurella sp, las cuales también han sido reportadas en cuyes de Lima y Ancash en sistemas de crianza comercial y familiar-comercial, respectivamente (Chuquizuta y Morales, 2017; Morales, 2017; Obregón et al., 2018; Killerby et al., 2019).
Mientras que Salmonella sp fue la bacteria aislada en mayor frecuencia a partir de lesiones enterohepáticas, coincidiendo con otros estudios que registran su presencia en diversas etapas productivas (Matsuura et al., 2010; Obregón et al., 2018; Killerby et al., 2019). La genotipificación de cepas a partir de cuadros severos resultaría relevante, aunque el serovar mayormente reportado corresponde a S. Typhimurium, incluyendo aislamientos a partir de cuadros subclínicos (Harkness et al., 2010; Layme et al., 2011; Chero et al., 2017). El aislamiento de Klebsiella sp y Citrobacter sp es similar a otros estudios (Chuquizuta y Morales, 2017; Obregón et al., 2018; Killerby et al., 2019), lo cual evidencia la presencia ubicua de diferentes géneros de enterobacterias patógenas en cuyes.
Bacterias del género Streptococcus en cuyes ocasionan generalmente cuadros neumónicos y linfadenitis cervical, siendo S. pneumoniae y S. equi subsp. zooepidemicus las especies más frecuentemente asociadas (Percy y Barthold, 2007; Brabb et al., 2012). Las etapas productivas mayormente afectadas en el presente estudio fueron gazapos y recrías, lo cual podría verse asociado a la transmisión vertical o a diversos factores estresantes como inadecuada ventilación, cambios de temperatura, problemas nutricionales, entre otros, que pueden predisponer a la infección (Percy y Barthold, 2007; Shomer et al., 2015).
Referente al antibiograma obtenido para Salmonella, se encontró para enrofloxacina una frecuencia de susceptibilidad intermedia (19%), siendo menor a lo reportado en cuyes de crianza familiar-comercial en Cajamarca y Moquegua (Caballero, 2015). Cabe destacar la baja resistencia encontrada en el presente estudio en comparación con otras investigaciones llevadas a cabo en los últimos cinco años en Cajamarca, Moquegua y Lima en crianzas familiar-comercial y comercial, donde incluso se ha evidenciado cepas multidrogo resistentes (Caballero, 2015; Salvatierra et al., 2018; Huamán et al., 2020).
Por otro lado, para trimetoprimasulfametoxazol se obtuvo una susceptibilidad intermedia de más del 10%, diferente a reportes en Ancash, Cajamarca, Moquegua y Lima en crianzas familiar-comercial y comercial donde este fármaco presentó una sensibilidad mayor al 97% (Matsuura et al., 2010; Caballero, 2015; Salvatierra et al., 2018). No obstante, otros estudios han registrado frecuencias de resistencias mayores a 67% en Cajamarca y Lima (Vásquez, 2019; Huamán et al., 2020). Dichas variaciones podrían encontrarse influenciadas principalmente por el uso inadecuado de antibióticos en cuanto a dosis, tiempo de tratamiento y diagnóstico incorrecto, entre otras causas. Es así que se requiere de estudios adicionales para obtener información sobre la percepción del uso correcto de antibióticos en las diferentes regiones del país.
Salmonella sp fue la bacteria que presentó una mayor frecuencia de resistencia, seguido de E. coli y Streptococcus sp a los antibióticos comúnmente utilizados como la enrofloxacina y trimetoprima-sulfametoxazol. Si bien las resistencias encontradas fueron bajas para antibióticos de amplio espectro, la susceptibilidad intermedia hallada podría potencialmente convertirse en resistente con el tiempo; por lo que es necesario realizar estudios de vigilancia antimicrobiana en el tiempo en diferentes localidades y sistemas de crianza.
E. coli se encuentra asociada a cuadros diarreicos en cuyes, siendo aislada en el presente estudio como el segundo agente implicado en lesiones enterohepáticas. Su alta carga se ve influenciada por la crianza en pozas, donde las heces se acumulan en el ambiente y puede existir un mayor riesgo de contaminación del alimento, forraje y agua, entre otros (Percy y Barthold, 2007; Harkness et al., 2010; Killerby et al., 2019). Asimismo, la mayor frecuencia fue a partir de recrías, donde se ha reportado desde diarreas transitorias leves hasta la muerte de camadas enteras (Richardson, 2000; Harkness et al., 2010). Si bien esta bacteria puede ser autolimitante en casos leves, los estudios de caracterización molecular son necesarios para identificar los patotipos diarrogénicos que podrían estar circulando en los sistemas de crianza.
Aunque no se identificó la especie de Citrobacter en el presente estudio, se ha reportado a C. freundii como una de las más comunes, además de C. diversus y C. amalonaticus en casos de diarrea (Ocholi et al., 1988; Chuquizuta y Morales, 2017). Asimismo, Klebsiella sp se aisló tanto de problemas entéricos como respiratorios, posiblemente influenciado por la implicancia como patógeno oportunista en animales inmunosuprimidos (Merino et al., 1992). Mientras que en Pasteurella sp, la especie más reportada es P. multocida en procesos infecciosos (Fox et al., 2002; Percy y Barthold, 2007).
No se pudieron obtener los antecedentes de los centros de crianza ni de los animales con signología previa al sacrificio; tampoco se pudo evaluar las lesiones a nivel histológico, lo que hubiera contribuido a la comprensión de la patogénesis y etiología. De otra parte, tampoco se llegó a identificar las especies de bacterias aisladas; sin embargo, por la casuística pueden relacionarse a las especies frecuentemente reportadas, lo que es relevante para conocer el estatus epidemiológico en galpones de cuyes. La alta frecuencia encontrada de enterobacterias como Salmonella sugiere realizar evaluaciones periódicas de la carga bacteriana ambiental en los sistemas de crianza, a fin de mitigar posibles brotes. Asimismo, las asociaciones de más de un tipo de bacteria podrían tener implicancia en cuadros infecciosos severos, por lo que es importante aislar e identificar todos los géneros bacterianos involucrados con la finalidad de establecer la antibioterapia de amplio espectro más adecuada.
CONCLUSIONES
Streptococcus sp y Bordetella sp fueron los agentes infecciosos mayormente aislados de cuyes con lesiones respiratorias, principalmente en gazapos y recrías de dos centros de crianza familiar-comercial de la provincia de Canchis, Cusco.
Salmonella sp y E. coli fueron los agentes infecciosos mayormente aislados en animales con lesiones hepático-entéricas, principalmente en recrías.
Los aislados bacterianos mostraron alta susceptibilidad antimicrobiana in vitro para la mayoría de los antibióticos utilizados en sistemas de crianza de cuyes.
Streptococcus sp y Salmonella sp mostraron bajos niveles de resistencia antimicrobiana y menos del 50% de susceptibilidad intermedia para enrofloxacina y trimetoprima-sulfametoxazol