INTRODUCCION
Las determinaciones hematológicas en mamíferos han logrado grandes avances con la introducción de tecnologías automáticas o semiautomáticas que facilitan estos estudios y por la existencia de abundante literatura que detalla los parámetros fisiopatológicos, mientras que el nivel de avance para las aves es bastante menor (Latimer y Bienzle, 2010). La evaluación del perfil hematológico permite evidenciar alguna desviación de lo normal causa- da por alteraciones metabólicas, invasión del cuerpo por agentes patógenos, carencias, stress y otras formas de injurias (Al-Gamal, 2014; Ihedioha et al., 2016). En aves, la hematología permite, asimismo, la evaluación del estado de salud y nutricional, diagnóstico de enfermedades, y la evaluación de la eficacia de tratamientos (Ihedioha et al., 2011).
Los parámetros sanguíneos comúnmente utilizados para evaluar el estado de salud de las aves son el hematocrito, hemoglobina y recuento de glóbulos blancos (Lashev et al., 2009; Samani et al., 2016). El hematocrito se emplea como indicador de la condición corporal y salud de las aves, es un elemento de la triada eritrocítica (hematocrito, hemoglobina y recuento de eritrocitos), pudiendo afectarse por la edad, muda, entrada al esta-do reproductivo, sexo, altitud del hábitat, temperatura climática, gasto de energía, infección parasítica, niveles de la actividad eritropoyética y causas genéticas (Glomoski y Pica, 2011).
Los índices eritrocíticos, tales como el volumen corpuscular medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM) indican el tamaño de un eritrocito, cantidad promedio de hemoglobina presente en un eritrocito, y la concentración de hemoglobina, respectivamente. Estos parámetros se emplean en la caracterización de los eritrocitos de un individuo (orden, familia, género, sexo, edad, etc.), delineación de poblaciones de células rojas por especies (primitivas vs. generación definitiva de células rojas) y la identificación de alteraciones citológicas que acompañan a ciertas condiciones fisiológicas o patológicas (Glomoski y Pica, 2011).
Los leucocitos son células de defensa del organismo, sus niveles tienen una gran participación en la respuesta inmune y la habilidad de los animales para combatir la in- fección (Elarabany, 2018). Incluyen a los linfocitos y monocitos (mononucleares) y granulocitos (heterófilos, eosinófilos y basófilos) (Campbell, 2015).
La paloma doméstica (Columba livia) ha sido criada desde tiempos ancestrales por una variedad de motivos (Fakhri et al., 2013), y en épocas más recientes como mascotas y animales de laboratorio (Ihedioha et al., 2016). La crianza de palomas en la provincia de Chiclayo, ubicada en la costa norte del Perú, se viene incrementando, de allí que se requiere de valores referenciales de sus parámetros hematológicos. Ante esto, el objetivo del estudio fue determinar el perfil hematológico de la paloma (Columba livia) criada en la provincia de Chiclayo.
MATERIALES Y METODOS
La presente investigación fue realizada en el Laboratorio de Fisiología y Patología Aviar de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo (UNPRG), ubicada en la ciudad de Lambayeque, departamento de Lambayeque, Perú. La ciudad de Chiclayo tiene una altitud de 34 msnm y durante la investigación se tuvo un promedio de 26.2 ± 3.2 °C y 18.9 ± 2.7 °C de temperatura ambiental máxima y mínima, respectivamente, 71.5 ± 3.4% de humedad relativa y 4.57 ± 0.57 m/s de velocidad de viento, según datos de la estación climatológica de la UNPRG. La investigación fue aprobada mediante Resolución N°008-2019-CF/ FMV.
Para determinar el tamaño de muestra se tomó la varianza de la hemoglobina de un muestreo piloto de 37 palomas donde se encontró 14.85±2.42 g/dl y se asumió 0.5 g/dl de error obteniéndose un tamaño muestral mínimo de 90; sin embargo, para el estudio se colectaron 96 muestras (51 hembras [31 juveniles y 20 adultas] y 45 machos [24 juveniles y 21 adultos]). Las aves fueron clasificadas de acuerdo con sus características fenotípicas y comportamentales (Fabero, 2001). Las muestras de sangre fueron colectadas en tubos con anticoagulante (EDTA) entre abril y diciembre de 2019 de palomas de crianza casera en los distritos de la provincia de Chiclayo. Se registró el ID, sexo, edad y peso de las aves, el cual fue determinado con una balanza digital DAKOTA ACS5T con sensibilidad de 0.1 g. Las palo- mas se encontraban en una crianza semi-extensiva y con libre acceso al alimento y agua ad libitum. La alimentación era a base de maíz, granza y suplemento de concentrado. Las aves muestreadas se encontraban en aparente buen estado de salud y negativas a hemoparásitos, lo que fue constatado en los frotis sanguíneos.
Se determinó el hematocrito (Hct, %), mediante el método de microhematocrito (Campbell, 2015), hemoglobina (Hb, g/dl) por el método estándar de cianometahemoglobina con la solución de Drabkin y leídas en un espectrofotómetro Greetmed con 540 nm de longitud de onda (Clark et al., 2009; Campbell, 2015).
El recuento de eritrocitos y leucocitos se realizó mediante el método de Natt y Herrick. Para el recuento de eritrocitos se usó una pipeta dilutor de células rojas (pipeta de Thoma), cámara de Neubauer y solución de Natt y Herrick (dilución 1:200), y se contó el número de eritrocitos en cinco cuadros del retículo central de un lado de la cámara de recuento y se multiplicó el número de eritrocitos por 10 000 (expresado en eritrocitos/µl). Para el recuento de leucocitos (células/µl) se contó el número de leucocitos en los nueve cuadros grandes del mismo lado de la cámara + el 10% del total obtenido y a este resultado se le multiplicó x 200 (Campbell, 1995, 2015). Las lecturas se hicieron en el microscopio a 400x.
Para determinar el VCM (fl) se dividió el hematocrito entre el recuento eritrocítico y multiplicó por 10; para la HCM (pg) se dividió la hemoglobina entre el recuento eritrocítico y multiplicó por 10; para la CHCM (g/dl) se dividió la hemoglobina entre el hematocrito y multiplicó por 100 (Campbell, 1995; Galvez et al., 2009).
El recuento diferencial de leucocitos (%) se obtuvo por evaluación microscópica (1000x) de 100 leucocitos en la monocapa de los frotis sanguíneos teñidos con Wright. El número absoluto de cada tipo de célula (heterófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos y monocitos) fue obtenido multiplicando la concentración total de leucocitos por el porcentaje de cada célula y dividido entre 100 (Campbell, 2015).
En recuento de plaquetas se obtuvo por el método estimativo, dividiendo el número promedio de trombocitos en cinco campos de inmersión entre el número promedio de eritrocitos en cinco campos de inmersión y multiplicado por el número de eritrocitos de cada ave con hematocrito normal (40-50%). En el caso de aves con hematocrito fuera del rango, el número de trombocitos total fue equivalente a la cuenta estimada de trombocitos previa, multiplicada por el cociente resultante del hematocrito respectivo de cada ave y el hematocrito normal (45%) (Campbell, 1995).
El análisis de los datos se realizó en el programa Excel del paquete Microsoft Office Profesional Plus 2016, usando el complemento Mega Stat 2007. Los datos se presentan como valores promedio, desviación estándar e intervalos de confianza. Para determinar la significancia se utilizó la prueba Z para valores porcentuales y la prueba de T para valores enteros.
RESULTADOS Y DISCUSION
Los promedios del peso corporal y de los valores eritrocíticos y plaquetarios de las palomas se presentan en el Cuadro 1. Se encontraron diferencias significativas (p<0.05) en peso entre juveniles y adultas en ambos sexos, resultado que concuerda con los hallazgos de Al-Gamal (2014).
Se encontraron diferencias significativas (p<0.05) en el hematocrito entre juveniles y adultas en ambos sexos, resultados concordantes con las investigaciones de Al- Gamal (2014), Samani et al. (2016) y Razavi et al. (2016), al igual que los valores mínimos y máximos (Campbell, 1995; Glomoski y Pica, 2011; Ihedioha et al., 2016). El hematocrito es el indicador más rápido y práctico para la evaluación de la masa de células rojas de las aves (Samani et al., 2016).
Los valores promedio de hemoglobina fueron significativamente mayores en hembras adultas con relación a las hembras juveniles (p<0.05), hallazgos que concuerdan con otros reportes (Glomoski y Pica, 2011; Al- Gamal, 2014; Razavi et al., 2016). Estas diferencias podrían deberse a la mayor demanda de oxígeno de las hembras por la actividad reproductiva y la gran habilidad para el vuelo que estas aves desarrollan (Al-Gamal, 2014).
Los promedios del recuento total de glóbulos rojos son homogéneos, las pequeñas diferencias no fueron significativas, para la categoría edad y sexo (p>0.05), y los valores mínimos y máximos son congruentes a los reportados por Alzota et al. (2006), Ihedioha et al. (2016); asimismo los valores de este estudio están dentro de los rangos de 2.5(106/ µl) - 3.5(106/µl) para la mayoría de las aves reportados por Glomoski y Pica (2011).
Los valores de VCM, HCM y CHCM obtenidos se encuentran dentro de los rangos reportados por otros autores (Alzola et al., 2006; Glomoski y Pica, 2011; Ihedioha et al., 2016) y sin encontrar diferencias significativas por efecto del sexo o la edad. En el recuento de plaquetas tampoco se encontraron diferencias significativas por efecto del sexo o la edad, y los valores estuvieron dentro del rango reportado por Campbell (2010), aun- que menores a los observados por Azeez et al. (2013) en palomas adultas clínicamente sanas en Nigeria.
En el Cuadro 2 se presentan los recuentos totales, diferenciales y absolutos de leucocitos, así como el ratio Heterófilos: Linfocitos (H/L). Se encontraron diferencias significativas para la edad y sexo (p<0.05) en los recuentos totales de leucocitos. Los valores mínimos y máximos se encuentran en los rangos reportados para palomas por Scope et al. (2002), Azeez et al. (2013) e Ihedioha et al. (2016), pero ligeramente superiores a los reportados en cisnes, citácidos y gallinas White Leghorn reportados por Dolka et al. (2014), Campbell (2010) y Colas et al. (2016) respectivamente, e inferiores a los valores reportados en palomas de Bulgaria, Croacia e Irán, según Lashev et al. (2009), Pavlak et al. (2005) y Samani et al. (2016), respectivamente. La influencia significativa de la edad y sexo en los recuentos leucocitarios concuerda con Bounous et al. (2000) y Latimer y Bienzle (2010).
Se encontraron diferencias significativas (p<0.05) para edad y sexo en el recuento diferencial y los valores absolutos de los heterófilos, para la edad en los linfocitos y para el sexo en monocitos, eosinófilos y basófilos. Los recuentos diferenciales se encuentran dentro de los rangos reportados por Campbell (2015) para palomas, con excepción de los monocitos que se encontraban ligeramente aumentados, aunque dentro del rango de 5-19% reportado por Ihedioha et al. (2016). Asimismo, los valores de heterófilos, eosinófilos y basófilos fueron similares a los reportados por Samani et al. (2016). Los resultados demuestran la mayor frecuencia de heterófilos, lo cual concuerda con múltiples reportes en aves (Campbell, 1995, 2015; Clark et al., 2009; Latimer y Bienzle, 2010).
Los valores promedios del ratio heterófilos: linfocitos (H/L) estuvieron entre 1.4 para los machos adultos y 1.8 para las hembras juveniles (p<0.05), valores que están por debajo del 1.95 reportado por Azeez et al. (2013) para palomas en Nigeria, y superiores a 0.7 reportados por Lashev et al. (2009) y Al-Gamal (2014). Cabe remarcar la importancia de conocer este parámetro en aves saludables dada la relación entre concentraciones de heterófilos y linfocitos, don- de la hormona corticosterona ante un estrés incrementa los heterófilos y disminuye los linfocitos, causando grandes cambios en el ratio H/L (Scanes, 2015); asimismo, también debe tenerse en cuenta que el ratio puede incrementarse con heterofilia absoluta o con linfopenia absoluta (Latimer y Bienzle, 2010).
CONCLUSIONES
Los valores hematológicos se encontraron dentro de los rangos reportados para el orden Columbiforme y reflejaron buena salud de las aves.
Los heterófilos fueron los leucocitos más comunes encontrados en la sangre periférica de las palomas, seguido de los linfocitos.
No se encontraron diferencias significativas en los valores eritrocíticos y plaquetarios de las palomas respecto al sexo y edad, excepto en el hematocrito y hemoglobina para el factor edad.
Se encontró influencia significativa de la edad y sexo de las palomas en el recuento total de leucocitos.