Localización y Duración

El presente estudio se realizó en una nave convencional (1.20 m de alto, 4 m de ancho y 12 m de largo) de producción de aves de corral, ubicado en un área destinada para la crianza de aves de la Carrera de Medicina Veterinaria, en la Escuela Superior Politécnica Agropecuaria de Manabí Manuel Félix López (ESPAM MFL), Ecuador. La crianza de las aves fue por 42 días, entre febrero y marzo de 2019. Las condiciones climáticas fueron: precipitación media anual de 911 mm, temperatura media anual de 31 °C, humedad relativa anual de 86.8%, heliofania anual de 1109.8 h y una evaporación media anual de 499.6 mm.

Alimentación y Tratamientos

El consumo de agua y alimento fue ad libitum durante los primeros 14 días. Los pollos fueron asignados al azar a dos tratamientos a partir del día 15: Suministro de AEO y promotores de crecimiento.

El alimento fue ofrecido a voluntad con dietas formuladas por semanas (Cuadro 1) y de acuerdo con los requerimientos establecidos para pollos de engorde Coob 500 (^{Cobb- Vantres, 2018}). Para los cálculos de requerimientos nutricionales se utilizaron las ecuaciones sugeridas por ^{Rostagno et al. (2017}). El suministro de agua fue constante. El agua fue tratada con un neutralizador avícola llamado Neutralizador® (Pharmacy & Nutrition) a razón de 1 ml/10 L de agua, además de cloro (4 mg/l).

Los tratamientos fueron:

T01 = Control 1 - alimento balanceado comercial + (bacitracina) 25 ppm

T02= Control 2 - alimento balanceado (Cuadro 1) + Orego-Stim (Chemical Pharm, Ecuador) 25 ppm

T1= Alimento balanceado (Cuadro 1) + aceite esencial de orégano 100 ppm

T2= alimento balanceado (Cuadro 1) + aceite esencial de orégano 200 ppm

T3= alimento balanceado (Cuadro 1) + aceite esencial de orégano 300 ppm

Animales

Se utilizaron 400 pollos de un día de edad (unidades observacionales) de la línea Cobb 500, procedentes de la incubadora de la institución. Los pollos fueron colocados en 40 cubículos prefabricados de malla negra de polietileno (1.25 x 0.75 x 0.9 m). El primer día se tuvo una densidad de 30 pollos/m2, pero cada tres días se retiraron 5 pollos/m2 hasta quedar con 10 pollos/m2. Cada cubículo es- tuvo constituido por 40 pollos que corresponden a cuatro repeticiones por tratamiento y 10 pollos por repetición, lo cual conformó una unidad experimental.

La limpieza y desinfección del galpón y los equipos se realizó dos semanas antes de la recepción de los pollos. Se utilizó agua y detergente para la limpieza general del galpón además de yodo 25% como un agente desinfectante mediante el método de aspersión con una dosis de 25 ml/l de agua.

Las calentadoras (focos 150 watts) fue- ron encendidos 6 h antes de la recepción de los pollos para obtener una temperatura óptima del galpón. Además, se usaron cortinas durante los primeros 14 días para evitar las corrientes de aire y mantener el calor. El con- trol de la temperatura y humedad relativa se monitoreó tres veces al día mediante la ayuda de un higrómetro Vicks®.

Muestras

Se seleccionaron 30 pollos (cinco por tratamiento) los días 21 y 42. La técnica usa- da para la selección fue de tipo probabilístico, con muestreo aleatorio simple (Muestreo Sim- ple al Azar), en donde cada sujeto tiene una probabilidad igual de ser seleccionado para el estudio (^{Walpole et al., 2012}). El manejo de los animales se realizó siguiendo el Manual de Aplicabilidad de las Buenas Prácticas Avícolas de Agrocalidad del Ecuador (^{Vizcaíno et al., 2013}).

Los animales se sacrificaron mediante electroshock y desangrado. Luego se incidió la cavidad abdominal y se expuso el tracto gastrointestinal, para realizar el análisis morfopatológico a fin de identificar alteraciones macroscópicas. Finalmente, se tomaron muestras del duodeno por medio de cortes transversales de 1 cm de la región proximal, medial y distal (total: 180 muestras). Las muestras fueron fijadas con solución tamponada de formol al 10% y se colocaron en un cooler para el transporte hacia el laboratorio de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Técnica de Manabí (UTM).

Estudio Morfométrico

Las muestras fueron sometidas al procesamiento histológico estándar, y se realizaron cortes transversales de 3 mm. Las láminas fueron observadas en un microscopio óptico trinocular estándar (Optika B-383PLi, Italia). La captura de las imágenes de las láminas histológicas se realizó con ayuda de una cámara acoplada al microscopio (AmScope MU1000) mediante el software AmScope 3.0, utilizando el objetivo de 4x, con un campo de visión de 2000 µm2 de área. Se registraron las siguientes variables de las vellosidades intestinales: ALP: Altura proximal; ALM: Altura medial; ALD: Altura distal; AP: Ancho proximal; AM: Ancho medial; AD: Ancho distal; PP: Profundidad proximal; PM: Profundidad medial y PD: Profundidad distal. Todas las mediciones se tomaron en milímetros (mm) y posteriormente se las transformó a micrómetros (µm) para trabajar con datos de mayor precisión.

La altura de las vellosidades se mide desde el área basal, coincidiendo con la porción superior de las criptas hasta su vértice. Esta medida permite además determinar el número de vellosidades presentes un área determinada. La altura de las criptas se mide desde la base a la región de transición de la cripta (^{Pelicano et al., 2003}).

Análisis estadístico

e aplicaron las pruebas de Shapiro- Wilk y Levene para probar la normalidad de los datos y homogeneidad de la varianza de las variables en estudio. Se utilizó el análisis de varianza de una vía en un diseño completamente aleatorizado utilizando un paquete de software estadístico con el procedimiento GLM del ^{SAS v. 9.4 (2013}). Se utilizó la prueba de Tukey para detectar significancia (p<0.05) entre las medias. La prueba de rango múltiple de Dunnett se aplicó como una prueba post-hoc para las diferencias entre la media de cada nivel de factor (tratamiento) y la media de un grupo de control con intervalo de confianza al 95% (p<0.05). Los resultados se presentaron como media ± error estándar de la media.

Variables Morfométricas

En los resultados de la morfometría de las vellosidades intestinales en el periodo de 21 días (cuadros 2 y 3), se encontró diferencia significativa en la variable ancho proximal, a favor del tratamiento con AEO 200 ppm (183 µm).

Estudios como el de ^{Macari et al. (2002}) afirman que las vellosidades del duodeno son más largas que las del yeyuno e íleon, inde- pendientemente de la edad; asimismo, cuanto más lejos del proventrículo y de la molleja, más pequeñas serán las vellosidades y menos los cambios morfológicos. Es por esto que el presente estudio se realizó con mues- tras de duodeno, por ser la sección del intestino delgado con mayor capacidad de digestión y absorción, tal como lo ha indicado ^{Boaro et al. (2011}).

^{Betancourt et al. (2012}) obtuvieron resultados similares al analizar el efecto de los aceites esenciales de orégano en pollos de engorde sobre el ancho de las vellosidades a la misma edad, obteniendo una diferencia a favor de 4.70%, siendo un indicador positivo para la buena absorción de nutrientes, y estimulación del sistema inmune (^{Kondo, 2003}).

A los 42 días se pudo notar que existen diferencias estadísticas para la variable profundidad proximal, siendo el tratamiento AEO 300 ppm el de mayor efecto (cuadros 4 y 5; p<0.05). El promedio encontrado (256 µm) es similar al reportado por ^{Madrid et al. (2018}), quienes encontraron mayor profundidad y altura de las vellosidades intestinales del duodeno al incluir tres niveles diferentes de AEO en pollos de engorde Cobb 500. En tal sentido, la morfología intestinal se mejora por efecto del orégano sobre las toxinas. Se sabe que las toxinas bacterianas tienen efectos negativos sobre la morfología intestinal (^{Samadian et al., 2013}).

Cuadro 2 Promedios y error estándar en variables morfométricas del duodeno de pollos Cobb 500 a los 21 días de edad 

Cuadro 3. Ancho proximal de las vellosidades intestinales del duodeno de pollos Cobb 500 a los 21 días de edad (Test Dunnett) 

No hubo diferencias significativas con respecto a las demás variables en estudio, similar al reporte de ^{Botsoglou et al. (2010}), quienes no detectan efectos destacables en la histomorfometría del intestino delgado en pollos con dietas que incluyen aceites esenciales de orégano. Por otro lado, ^{Ayala et al. (2006}) y ^{Shiva et al. (2012}), utilizando oré- gano como promotor de crecimiento tampoco encontraron diferencias favorables en parámetros productivos como ganancia de peso, consumo de alimento y conversión alimenticia en comparación a los antibióticos promotores de crecimiento.

Cuadro 4.Promedios y error estándar en variables morfométricas del duodeno de pollos Cobb 500 a los 42 días de edad 

Cuadro 5 Ancho proximal de las vellosidades intestinales del duodeno de pollos Cobb 500 a los 42 días de edad (Test Dunnett)