INTRODUCCIÓN
El timo es un órgano linfoide primario de gran importancia y funcional en neonatos y animales jóvenes en crecimiento, siendo el primero en formarse durante la etapa embrionaria (Carrasco et al., 2004; Dyce et al., 2012). Este órgano permite el desarrollo de la respuesta inmune, debido a que se encarga de la producción, diferenciación, maduración y liberación de linfocitos T, siendo necesario la inmigración de células madre linfoides (provenientes del saco vitelino, hígado embrionario o médula ósea) a través de las arterias y la emigración de linfocitos T maduros por las venas (Valentich y Serra, 2008; Tizard, 2013; Junqueira y Carneiro, 2015; Kierszenbaum y Tres, 2015).
El timo de fetos de alpaca presenta los lóbulos cervicales de forma larga y aplanada dispuestos en "Y" distribuyéndose en la región cervical ventral, y el lóbulo torácico de forma piriforme localizándose en el mediastino craneal (Montenegro, 2006). López (1972) describe parte de la anatomía vascular de alpacas adultos, indicando la existencia de una rama arterial tímica, procedente de la arteria torácica interna o del arco aórtico.
Las características del timo y su anatomía vascular arterial de fetos y neonatos de varias especies de mamíferos herbívoros domésticos ha sido descrita (Bombonato et al., 1986; Silva y Bombonato, 1990; Machado et al., 1991, 2001; Silva et al., 2007; Lima et al., 2011; ICVGAN, 2017), pero la anatomía vascular venosa solo está descrita en neonatos (ICVGAN, 2017). Para el correcto estudio tridimensional y visualización macroscópica de los vasos sanguíneos del timo se debe realizar la técnica anatómica de repleción vascular, siendo una técnica que permite la inyección, dentro de los vasos sanguíneos, de diferentes compuestos o mezclas, tales como gelatina, látex, caucho, metil metacrilato o resina acrílica, a los cuales de ser necesario se les adiciona algún colorante (Hildebrand, 1968; Beard et al., 1989; Olivares et al., 2016; Arch et al., 2017).
La realización de un estudio macroscópico para conocer el patrón del sistema vascular del timo en fetos de alpaca, mediante el uso de la técnica anatómica de repleción vascular, permitirá conocer los vasos sanguíneos que emitirán ramas arteriales y ramas venosas. A su vez, estas investigaciones se podrán complementar con estudios microscópicos, lo que permitiría comprender la fisiología del timo de la alpaca.
MATERIALES Y MÉTODOS
Lugar de Estudio y Material Biológico
Las muestras fueron tomadas en el Camal Municipal de Huancavelica, provincia de Huancavelica, Perú, a una altitud de 3660 msnm. Se obtuvieron 10 fetos a partir de alpacas gestantes de descarte beneficiadas para consumo humano. Se determinó el sexo, se midió el largo del cuerpo y la altura a la cruz, se pesó y se midió el diámetro biparietal (DBP) en centímetros con el uso de un calibrador digital de 6"para calcular la edad gestacional en días de cada feto (Cuadro 1), mediante la siguiente ecuación: Edad gestacional = (DBP-0.11376) x 47.23287, r = 0.98, p<0.001 (Gazitua et al., 2001); donde r es coeficiente de regresión y p es significancia. Se consideró feto a aquel que tenga una edad gestacional de 60 días a más (Bravo, 2002).
Feto | Peso (kg) | DBP (cm) | Edad gestacional | |
---|---|---|---|---|
(días) | (meses) | |||
A - 1 | 0.117 | 2.381 | 107.08 | 3.56 |
B - 2 | 0.288 | 2.559 | 115.49 | 3.84 |
C - 3 | 0.406 | 3.060 | 139.15 | 4.63 |
D - 4 | 2.020 | 5.000 | 230.79 | 7.69 |
E - 5 | 2.347 | 5.122 | 236.55 | 7.88 |
F - 6 | 2.212 | 5.212 | 240.80 | 8.02 |
G - 7 | 3.000 | 5.357 | 247.65 | 8.25 |
H - 8 | 3.974 | 5.584 | 258.38 | 8.61 |
I - 9 | 3.199 | 5.814 | 269.23 | 8.97 |
J - 10 | 3.504 | 6.004 | 278.21 | 9.27 |
Los especímenes colectados fueron transportados al Laboratorio de Anatomía Animal de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, en Lima, en un recipiente con geles refrigerantes, para luego ser conservados en una congeladora.
Los fetos, una vez descongelados, el cordón umbilical fue diseccionado para observar detalladamente las dos arterias y las dos venas umbilicales. Se canuló una de las arterias y una de las venas umbilicales con una sonda uretral de un calibre adecuado para cada una, y se ligó la otra arteria y vena umbilical. Se inyectó dentro de la arteria umbilical agua oxigenada al 3% para eliminar los coágulos de sangre presentes en el sistema vascular.
Técnica Anatómica de Repleción Vascular
Se optó por utilizar resina acrílica auto-curable, el cual es producto de la mezcla del metilmetacrilato, de composición sólido o en polvo, con un monómero, de composición líquido, siendo un material que se adapta fácilmente a cualquier forma (Cavero y Fernández, 2005), al cual además se le adiciona tinta china roja o tinta china azul.
El volumen total de resina acrílica se calculó teniendo en cuenta que el volumen sanguíneo, en litros, de los camélidos sudamericanos representa entre el 6.5 y 8.6% del peso corporal (kg) (Fowler, 2010). Para el cálculo del volumen sanguíneo se empleó el 8% del peso corporal (Cuadro 1). Posteriormente, el volumen obtenido es expresado en mililitros (ml) y dividido en partes iguales para representar a los volúmenes sanguíneos arteriales y venosos.
En un vaso de precipitado se preparó una solución acuosa de resina acrílica compuesta por la mezcla de tres partes de acrílico autopolimerizante líquido (monómero) y una parte de acrílico autocurable polvo (metilmetacrilato). Se adicionó una gota de tinta china roja por cada 2 ml de volumen de la mezcla final. Se inyectó la resina acrílica dentro de la arteria umbilical canulada con una jeringa de 60 ml lo más rápido posible (Figura 1) y al final se ligó la arteria. Luego se preparó la misma solución acuosa de resina acrílica y se adicionó tinta china azul en la misma proporción, mezcla que fue inyectada dentro de la vena umbilical canulada y al final se ligó la vena. El feto trabajado se colocó en un recipiente con formol al 10% para su conservación y para esperar la solidificación de la mezcla inyectada.
Disección de las Arterias y Venas
Se colocó al feto en posición de decúbito ventral para su disección. Se incidió la piel desde el inicio del área cervical, a la altura de la faringe, hasta la última esternebra.
Disección del área cervical ventral
Se divulsionó la piel para la posterior resección de las fascias. Los músculos presentes en el área cervical ventral y lateral fueron reseccionadas, dejando expuestos el timo cervical con sus arterias y venas. Se revisaron con sumo cuidado las ramas arteriales y ramas venosas procedentes de los diferentes vasos sanguíneos que terminaban en el timo cervical. Estos vasos sanguíneos fueron identificados con el uso de la Nómina Anatómica Veterinaria (ICVGAN, 2017). Se realizó varias tomas fotográficas para su documentación.
Disección del área torácica ventral y mediastino craneal
Se divulsionó la piel, las fascias y los músculos presentes en el área esternal. Se cortó las costillas en la unión condrocostal de ambos lados, extrayendo las esternebras. Se expuso el timo torácico y el timo intermedio. Se continuó reseccionando las membranas pleurales que cubrían a los grandes vasos sanguíneos. Se revisó con sumo cuidado las ramas arteriales y ramas venosas procedentes de los diferentes vasos sanguíneos que llegaban a estos dos lóbulos. Se identificó estos vasos sanguíneos con el uso de la Nómina Anatómica Veterinaria (ICVGAN, 2017). Se realizó varias tomas fotográficas para su documentación.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Las edades gestacionales de los 10 fetos de alpaca estuvieron entre 107 y 278 días. El timo se observó como un órgano grande, largo, de amplia distribución, y conformado por lóbulos. Estos fueron el timo cervical craneal derecho, timo cervical craneal izquierdo, timo cervical caudal, timo intermedio y timo torácico, de características y conformaciones similares a la descrita por Montenegro (2006). La conformación del timo en fetos de alpacas varía con el de fetos y neonatos de bovinos (Bombonato et al., 1986; Climent et al., 2013), fetos de búfalos (Machado et al., 2001), fetos de caprinos (Bombonato et al., 2001), neonatos de suidos (Climent et al., 2013), neonatos de équidos (Climent et al., 2013) y neonatos de carnívoros (Climent et al., 2013) (Figura 2).
En su recorrido, la arteria carótida común derecha emite entre 2 y 4 ramas hacia el timo cervical craneal derecho, y entre 4 y 5 ramas hacia la porción caudal del timo cervical caudal (Figura 3). No se describen ramas arteriales procedentes de la arteria carótida común derecha que lleguen a la porción craneal del timo cervical caudal, debido a que esta porción se ubica a la izquierda del cuello sobre el surco yugular izquierdo. La arteria carótida común izquierda emite entre 8 y 15 ramas hacia el timo cervical craneal izquierdo ya todo el timo cervical caudal. Todo esto hace que las arterias carótidas comunes derecha e izquierda sean los principales vasos sanguíneos encargados de la irrigación del timo cervical en toda su extensión. Estos hallazgos con similares a los descrito en fetos y neonatos de bovinos (Bombonato, 1982; Getty, 1982; Bombonato et al., 1986), fetos de búfalos (Machado et al., 2001), fetos y neonatos de caprinos (Getty, 1982; Silva y Bombonato, 1990; Bombonato et al., 2001), y fetos y neonatos de porcinos (Getty, 1982; Silva et al., 2007; Garcia et al., 2012). En neonatos de equinos, Getty (1982) describe muy generalmente que la irrigación es dada por las dos arterias carótidas comunes, pero Machado et al. (1991) encontró que era irrigado por la arteria carótida común derecha.
Las arterias tiroideas craneales derecha e izquierda, que nacen de su respectiva arteria carótida común, emiten una rama hacia el timo cervical craneal derecho (Figura 4) e izquierdo respectivamente. Estos vasos sanguíneos irrigan la porción craneal de los timos cervicales craneales. Los hallazgos son similares a lo descrito en fetos de bovinos (Bombonato, 1982; Bombonato et al., 1986), caprinos (Silva y Bombonato, 1990; Bombonato et al., 2001), y porcinos (Silva et al., 2007).
Las arterias tiroideas caudales derecha e izquierda, que nacen de su respectiva arteria carótida común, emiten una rama hacia el timo cervical craneal derecho (figura 4) e izquierdo respectivamente. Estos vasos sanguíneos irrigan la porción craneal de los timos cervicales craneales. Siendo comparable con lo descrito en fetos de caprinos (Silva y Bombonato, 1990; Bombonato et al, 2001) y porcinos (Silva et al, 2007).
De la superficie ventral del arco aórtico se emiten entre 2 y 3 ramas arteriales hacia la superficie caudal del timo torácico (Figura 5), lo cual es comparable con los resultados obtenidos por López (1972) en alpacas adultas, quien describe que se emite una rama tímica desde el arco aórtico. No se describen hallazgos similares en fetos de otros mamíferos herbívoros domésticos.
López (1972) observó que la rama tímica puede provenir también de la arteria torácica interna, lo cual también está descrito en fetos y neonatos bovinos (Schwarze, 1981; Bombonato, 1982; Getty, 1982; Bombonato et al., 1986; Gloobe, 1989; ICVGAN, 2017), búfalos (Machado et al., 2001), fetos de caprinos (Silva y Bombonato, 1990; Bombonato et al., 2001), fetos y neonatos de equinos (Schwarze, 1981; Machado et al., 1991; ICVGAN, 2017) y en fetos y neonatos de porcinos (Drummond et al., 1996, 2000; Silva et al., 1999; Drummond et al., 2000; Gonçalez et al., 2000; Lima et al., 2011; Garcia et al., 2012; ICVGAN, 2017), pero tales hallazgos no fueron encontrados en el presente estudio.
El tronco braquiocefálico emitió una o dos ramas hacia la superficie dorsal izquierda del timo torácico (Figura 5), siendo similar a lo descrito en fetos de bovinos (Bombonato, 1982; Bombonato et al., 1986), búfalos (Machado et al., 2001), caprinos (Silva y Bombonato, 1990; Bombonato et al., 2001), equinos (Machado et al., 1991) y porcinos (Drummond et al., 1996; Silva et al., 1999; Gonçalez et al., 2000; Lima et al., 2011).
A partir de la arteria subclavia izquierda, una o dos ramas llegaban al timo torácico (Figura 5), siendo comparable con fetos de caprinos (Silva y Bombonato, 1990), fetos de equinos (Machado et al., 1991) y fetos de porcinos (Silva et al., 1999). Por otro lado, Gonçalez et al (2000) solo halló en fetos de porcinos que la arteria subclavia derecha emitía ramas hacia el timo, mientras que Drummond et al. (1996) y Lima et al. (2011) encontraron que las dos arterias subclavias irrigaban la porción derecha e izquierda del timo torácico.
La anatomía macroscópica de las venas del timo no ha sido estudiada en fetos de varias especies de mamíferos domésticos, por lo cual el presente estudió proporciona información acerca de la anatomía vascular venosa del timo en fetos de alpacas. Las venas yugulares externas derecha e izquierda, la vena cava craneal, y la vena costocervical izquierda son los vasos sanguíneos que emiten ramas venosas hacia el timo de fetos de alpaca para su respectivo drenaje sanguíneo.
La vena yugular externa derecha emite entre 5 y 7 ramas hacia el timo cervical craneal derecho, y entre 4 y 6 ramas a la porción caudal del timo cervical caudal (Figura 6). La vena yugular externa izquierda emite entre 10 y 15 ramas hacia el timo cervical craneal izquierdo y a la totalidad del timo cervical caudal, datos corroborables con los reportes en neonatos de otros mamíferos domésticos (Schwarze, 1981; Getty, 1982), aunque esto autores no mencionan la rama que emite la vena cava craneal hacia el timo torácico, la cual está presente en alpacas, y esta única rama posteriormente se divide en otras cuatro ramas (Figura 7). Tampoco se menciona en neonatos de mamíferos domésticos sobre la rama que genera la vena costocervical izquierda hacia el timo torácico, la cual está presente en fetos de alpacas y que posteriormente se ramifica en otras dos ramas (Figura 8). No obstante, se encuentran descritas las numerosas ramas que emite la vena torácica interna, pero que según la Nómina Anatómica Veterinaria (ICVGAN, 2017) deben ser denominadas venas tímicas.
Las arterias y venas no emitieron vasos sanguíneos arteriales y venosos hacia el timo intermedio.
Durante el muestreo no se llegó a obtener fetos con edades gestacionales mayores de 279 días, rango de tiempo que está comprendido en el último tercio de gestación, periodo de alto crecimiento para todo feto mamífero. En ese periodo, el timo aumentará de tamaño y seguirá su desarrollo durante la etapa neonatal (Tizard, 2013), y con ello, posiblemente, otros vasos sanguíneos emitirán ramas arteriales y ramas venosas hacia el timo. Es así el caso de las ramas arteriales que procederán de la arteria torácica interna (Getty, 1982; Gloobe, 1989; Machado et al., 1991; Drummond et al., 2000; Bombonato et al., 2001; Machado et al., 2001; I.C.V.G.A.N., 2017) y de las ramas venosas que precederán de la vena torácica interna (I.C.V.G.A.N., 2017).
CONCLUSIONES
En los fetos de alpaca con edades gestacionales comprendidas entre 107 y 278 días se observó lo siguiente:
El timo se encuentra formado por cinco lóbulos: timo cervical craneal derecho, timo cervical craneal izquierdo, timo cervical caudal, timo intermedio y timo torácico.
Las arterias carótidas comunes derecha e izquierda emitieron cada una entre 8 y 15 ramas arteriales hacia los timos cervicales craneales derecho e izquierdo y hacia el timo cervical caudal. Además, las arterias tiroideas craneales derecha e izquierda emitieron una rama arterial hacia su respectivo timo cervical craneal, mientras que las arterias tiroideas caudales derecha e izquierda emitieron una rama arterial hacia su respectivo timo cervical craneal.
Ninguna arteria emitió ramas arteriales hacia el timo intermedio.
El arco aórtico emitió entre 2 y 3 ramas arteriales hacia el timo torácico. Además, el tronco braquiocefálico emitió 1 o 2 ramas arteriales hacia el mismo lóbulo, y la arteria subclavia emitió entre 1 y 2 ramas arteriales hacia el lóbulo mencionado.
Las venas yugulares externas derecha e izquierda emitieron cada una entre 10 y 15 ramas venosas hacia los timos cervicales craneales derecho e izquierdo y hacia el timo cervical caudal.
Ninguna vena emitió ramas venosas hacia el timo intermedio.
La vena cava craneal emitió una rama venosa hacia el timo torácico, la cual se ramificó en otras cuatro ramas. Además, la vena costocervical izquierda emitió una rama venosa hacia el timo torácico, la cual se ramificó en dos ramas.