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Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Publica

versión impresa ISSN 1726-4634

Rev. perú. med. exp. salud publica v.23 n.2 Lima abr. 2006

 

COMUNICACIÓN CORTA

 

Utilización de Lepidium Peruvianum Maca, como medio de cultivo para el crecimiento de Trypanosoma Cruzi

 

Charles Saldaña C1, Ofelia Córdova P1, Franklin Vargas V1

1 Instituto de Investigación en Microbiología y Parasitología Tropical. Universidad Nacional de Trujillo. La Libertad, Perú.

 


 

RESUMEN

Por sus características nutritivas de alto valor, se ensayó la posible utilidad del Lepidium peruvianum maca, como un medio para cultivar Trypanosoma cruzi. Bajo condiciones experimentales se procedió a incubar epimastigotes de T. cruzi en cuatro medios de cultivo bifásicos diferentes, a base de Lepidium peruvianum maca, los cuales fueron comparados con el medio de cultivo BHI como control. La incorporación de maca como medio de cultivo permitió el crecimiento de Trypanosoma cruzi; se determinó que el medio que contenía maca enriquecida con sangre entre los componentes sólidos y la infusión de maca en la fase líquida, presentó un mayor crecimiento (3,41 x 105 parásitos/mL) con respecto a los otros medios de cultivo al quinto día (p<0,05).

Palabras clave: Trypanosoma cruzi; Medio de cultivo; Lepidium peruvianum (fuente: DeCS BIREME).

 


 

ABSTRACT

Because of its high nutritional value, the possible usefulness of Lepidum peruvianum (maca) was assayed, as a possible culture medium for Trypanosoma cruzi. Under experimental conditions, T. cruzi epimastigota were incubated in four biphasic different culture media including Lepidum peruvianum (maca), and they were compared against BHI culture medium as a control. The inclusion of maca in the culture media allowed Trypanosoma cruzi growth; it was determined that the medium containing blood-enriched maca amongst its solid components and a maca infusion in the liquid phase had better growth (3,41 X 105 parasites/mL) compared to the other culture media after five days (p<0,05). 

Key words: Trypanosoma cruzi; cultive way; Lepidium peruvianum (source: DeCS BIREME).

 


 

INTRODUCCIÓN

La tripanosomiasis americana o enfermedad de Chagas es una zoonosis que se encuentra ampliamente distribuida en el continente americano, desde el sur de los Estados Unidos hasta Chile, Argentina y en algunos países de las Antillas1. Se estima que existen a nivel mundial de 18 a 20 millones de personas infectadas y 40 millones de personas expuestas; las infecciones son asintomáticas y las sintomáticas pueden ser agudas o crónicas2, por sus graves consecuencias sobre la salud y repercusiones socio-económicas constituye un problema de salud pública que está muy relacionado con el desarrollo económico y social1-3. En el Perú, existe 9% de endemia de esta enfermedad, con 600 000 infectados y siete millones de personas en riesgo de adquirirla (34% de la población total), la macrorregión sur del país (Arequipa, Moquegua, Tacna,Ica, Ayacucho y Apurímac) donde existen alrededor de un millón de personas expuestas a la enfermedad, esta considerada como la principal zona chagásica; sin embargo, también se han reportado casos en la vertiente noreste (La Libertad, Tumbes, Piura) y centro oriental de los Andes (Cajamarca, Amazonas, San Martín y Ucayali)4.

El T. cruzi presenta varios estadios durante su crecimiento y desarrollo: el epimastigote, que es móvil y se desarrolla en el intestino del insecto vector, Triatoma infestans, y en los medios de cultivo en el laboratorio; el trypomastigote, que se puede encontrar al final del intestino del triatomino y en la sangre del hospedero vertebrado, es muy móvil; y el amastigote que es el tipo intracelular, inmóvil, se presenta en forma de nidos en el hospedero vertebrado5.

El Trypanosoma cruzi metaboliza la glucosa y otros azúcares, realizando una fermentación aeróbica con excreción de ácidos orgánicos; además tiene un tropismo hacia el componente graso, indicando que este microhábitat le proporciona al parásito compuestos necesarios en sus estrategias para desarrollar su ciclo intracelular6.

El Lepidium peruvianum (maca) es una de las especies con mayor valor alimenticio, por su alto contenido, comparables con los recomendados por la FAO - OMS, de aminoácidos esenciales como la lisina, tirosina y fenialanina. Asimismo, presenta una fracción grasa rica en ácido linoléico, ácido graso muy utilizado por el organismo para la biosíntesis de ácidos grasos esenciales7.

La maca conocida inicialmente como Lepidium meyenii Walpers, desde el punto de vista taxonómico es una planta fanerógama, clase dicotiledónea, orden Papaverales, única representante de la familia Brassicaceae, que crece silvestre y domesticada en las altiplanicies de la meseta de Bombón, entre los departamento de Pasco y Junín, en los Andes Centrales de Perú, entre los 3000 y 4500 msnm. Se desarrolla en temperaturas que oscilan entre los 3 y 7 °C durante el día y hasta -10 °C durante la noche8-10.

Se ha demostrado el valor nutricional y energético de la maca en modelos animales11 y en humanos12, esto debido a que los niveles de minerales, proteínas y vitaminas de la maca son altos comparados con otras especies7,10. Muchos de estos mismos elementos se encuentran en medios de cultivo usados en laboratorio para el cultivo de T. cruzi, por ejemplo el medio BHI, que contiene infusión de cerebro de ternera, infusión de corazón de res, peptona de gelatina, cloruro de sodio, fosfato disódico dodecahidratado, glucosa, agua y cloruro de potasio, a pH 7,0 +/- 0,213.

En consideración a la importancia del cultivo de T. cruzi para su identificación en el laboratorio y otros estudios biológicos y moleculares, creemos conveniente introducir Lepidium peruvianum maca, en el cultivo de tripanosomátidos, aprovechando su riqueza de nutrientes, y que mediante estudios comparativos con otros medios de cultivo se determine su beneficio. 

EL ESTUDIO

MATERIAL BIOLÓGICO

Las raíces de maca fueron adquiridas en el mercado de la ciudad de Trujillo, procedentes de Ayacucho e identi- ficadas como Lepidium peruvianum ecotipo blanca, en el Herbarium Truxillensis de la Universidad Nacional de Trujillo. El estudio se realizó en el Instituto de Microbiología y Parasitología Tropical (INIMYPAT) de la Universidad Nacional de Trujillo. Se usó la cepa de referencia de Trypanosoma cruzi maracay aislada de Panstrongylus chinai, caracterizada en el Laboratorio de Parasitología Molecular de la Universidad de Granada, España, y proporcionada por el Laboratorio de Protozoología de la Universidad Nacional de Trujillo.

PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO A BASE DE MACA

Las raíces de Lepidium peruvianum fueron previamente lavadas con agua destilada y secadas a 60 ºC por una semana, luego se disolvió 50 gramos de maca en un litro de agua destilada, se hirvió por 15 minutos, y luego se dejó enfriar. Finalmente se decantó y la fase líquida se guardó para preparar los medios de cultivo, a los cuales se les denomino medio maca. Se controló el pH del medio maca a 7,2 semejante al pH del medio BHI; se observó que era estable a temperatura ambiente (20 a 25 ºC) y a temperatura de conservación de 4 ºC.

CULTIVOS DE FORMAS EPIMASTIGOTES DE Trypanosoma cruzi

Los cultivos de epimastigotes se realizaron en medios bifásicos conteniendo una fase sólida constituida de 5 mL de agar base de maca solo o con sangre y una fase líquida constituida de 2mL de caldo de maca o solución salina fisiológica (SSF), como medio de cultivo control se utilizó el medio BHI (Tabla 1).Posteriormente, se procedió a sembrar 1x105 parásitos/ mL en los tubos conteniendo los diferentes medios de cultivo y se incubaron a 28 ºC (temperatura óptima de crecimiento de formas epimastigotes) durante siete días. Todos los medios de cultivo se ensayaron por triplicado.Para la determinación de la curva de crecimiento, se siguió el método del recuento total en cámara citométrica, se extrajo una gota del medio de cultivo de los diferentes tratamientos a 0, 24, 48, 72, 96 y 168 horas y se colocó en la cámara de Neubauer para su recuento citométrico bajo observación al microscopio14, los valores encontrados se graficaron en función del tiempo, a fin de determinar la curva de crecimiento.

 

ANÁLISIS DE DATOS

Se creó una base de datos en Excell® y se usó el paquete estadístico Statistic v.5.0. Se evaluaron las diferencias de las medias para cada punto de la curva de crecimiento de epimastigotes entre los medios de cultivos ensayados usando el análisis de varianza (ANOVA) y la prueba de Tukey, se consideró significativo cuando se obtuvo p<0,05.

HALLAZGOS

De los medios de cultivo ensayados, sólo el M3 (agar maca con sangre como fase sólida, e infusión de maca como fase líquida) demostró desarrollo de epimastigotes de Trypanosoma cruzi (Figura 1), teniendo un promedio de 1,115x105 parásitos/mL, mostrando incluso mayor crecimiento que el medio BHI (p<0,05) al quinto día. Así mismo es posible observar que en relación a las cuatro fases de la curva de crecimiento de un microorganismo (fase de reposo, fase logarítmica, fase estacionaria y fase de declive o muerte) la logarítmica o exponencial se da alrededor del 4to al 6to día (96 a 144 horas) del tiempo de incubación (Figura 1).

 

DISCUSIÓN

Los resultados obtenidos con el medio de cultivo M3 (agar maca con sangre como fase sólida, e infusión de maca como fase líquida) evidencian que la incorporación de Lepidium peruvianum maca, puede ser útil como un medio de cultivo para Trypanosoma cruzi lo cual genera nuevas expectativas para el uso de este recurso autóctono, así como por su evidente menor costo y fácil preparación en relación con el medio BHI. La curva de crecimiento dividida en tres fases hallada con el M3 es similar a la encontrada en otros estudios con diferentes medios de cultivo para Trypanosoma cruzi14, así mismo el crecimiento máximo que se da en el quinto día ha sido corroborada con medios de cultivo como medio Grace`s, RPMI-1640, SDM-79, MTL y TC- 19915; esto probablemente por el aporte nutricional que brinda la maca para el desarrollo de este parásito16. Sin embargo, es necesario realizar próximos estudios con el M3, incorporando el uso de diferentes ecotipos de maca (blanca, roja, negra, amarilla) para determinar cual es el ecotipo más recomendable, y analizar los componentes de los medios preparados; así como comparar los resultados con medios más idóneos para el cultivo del T. cruzi y buscar perfeccionar la técnica u otros aditamentos al medio que podrían mejorar su rendimiento.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Correspondencia: Charles Saldaña Chafloque. Instituto de Investigación en Microbiología y Parasitología Tropical. Universidad Nacional de Trujillo.
Dirección: Urb. Manuel Arévalo II-Etapa Mz. B-30 Lote: 26. La Esperanza – Trujillo. La Libertad. Perú. 
Teléfono: 00- 51- 44-274877
Correo electrónico: scorpium211@yahoo.es