INTRODUCCIÓN
Staphylococcus aureus meticilinorresistente (MRSA, por sus siglas en inglés) fue descrito inicialmente como una bacteria asociada a infecciones nosocomiales, en pacientes con estancia hospitalaria prolongada, cirugía reciente, requerimiento de diálisis o presencia de dispositivos médicos invasivos 1 - 3. MRSA adquirido en el hospital (MRSA-AH) se caracteriza por ser resistente a varias familias de antimicrobianos y ser portador del gen mecA, contenido en el cassette cromosomal estafilocócico mec (SCCmec, por sus siglas en inglés) del tipo I, II y III 3 - 5. Sin embargo, en los años 90, se empezó a describir los primeros casos de infecciones por MRSA adquiridos en la comunidad (MRSA-AC) en los EE. UU. en personas sin factores de riesgo nosocomial; posteriormente las infecciones se diseminaron en todos los continentes 4. El clon de MRSA-AC más prevalente es el USA300 que, característicamente, porta el SCCmec tipo IV y suele ser resistente solo a los β-lactámicos 5 - 6.
En el Perú, se describieron algunos casos importados de MRSA-AC entre los años 2010-2011 7. Un estudio realizado durante 2011-2014, a partir de hemocultivos, demostró que el clon más prevalente en el norte de Sudamérica fue la variante latinoamericana de USA300 (USA300-LV), descrita en el 79%, 72% y 50% de las infecciones por MRSA en Colombia, Ecuador y Venezuela, respectivamente; aunque en el Perú no se encontró ningún caso 8.
El objetivo del estudio fue determinar la frecuencia de MRSA-AC en los aislamientos de S. aureus de pacientes de un hospital de Lima, Perú, y describir sus características moleculares y de resistencia antimicrobiana.
MENSAJES CLAVE
Motivación para realizar el estudio: La bacteria Staphylococcus aureus meticilino resistente comunitaria causa infecciones con poca respuesta a antibióticos, principalmente de piel y partes blandas. La información en Perú sobre su presencia en ambientes hospitalarios es insuficiente, por lo que buscamos determinar su frecuencia para poder instaurar las medidas de bioseguridad preventivas necesarias y su perfil de resistencia para identificar los antibióticos de uso empírico.
Principales hallazgos: El estudio confirma la presencia de dicha bacteria en nuestra localidad.
Implicancias: Es necesario mantener las medidas de vigilancia epidemiológica para evitar su propagación.
EL ESTUDIO
Diseño y población
Se realizó un estudio transversal y descriptivo durante el 2017 en pacientes atendidos en el Hospital Cayetano Heredia (HCH) en Lima, Perú. Este es un hospital público de complejidad III-1, que cuenta con consulta ambulatoria por especialidades y con 367 camas hospitalarias. Durante este periodo se recolectaron todos los aislamientos de S. aureus reportados en sangre, líquido o secreción corporal por el laboratorio de microbiología del hospital, provenientes de pacientes pediátricos o adultos hospitalizados y ambulatorios.
Análisis microbiológico y molecular
Se trasladaron los aislamientos al Instituto de Medicina Tropical «Alexander von Humboldt» para su identificación, según los procedimientos diagnósticos convencionales. La susceptibilidad antimicrobiana se realizó a través del método de Kirby Bauer y se utilizaron los siguientes antimicrobianos: cefoxitina, ceftarolina, gentamicina, eritromicina, tetraciclina, ciprofloxacina, clindamicina, trimetoprim-sulfametoxasol, cloranfenicol, rifampicina y linezolid, considerando los puntos de corte estándar 9. Se usó como control de calidad la cepa S. aureus ATCC 29213.
Para el análisis molecular, se extrajo el ADN según la metodología descrita por Bouillaut et al 10. La identificación de la resistencia a la meticilina mediante la identificación del gen mecA y la subsecuente tipificación de los SCCmec (tipos I, II, III, IVa, IVb, IVc y V) se realizaron por PCR múltiple, siguiendo la metodología descrita por Zhang et al 11. Asimismo, se detectaron los genes lukF.PV y lukS-PV, que codifican la leucocidina Panton-Valentine (PVL, por sus siglas en inglés), por el método de PCR, siguiendo los procedimientos descritos por Lina et al 12.
Aquellos aislamientos que tuvieron discordancia entre el patrón de resistencia a la cefoxitina y la presencia de mecA, o cuyo SCCmec no pudo identificarse fueron enviados al Laboratorio de Investigación de Enfermedades Infecciosas del Hospital Henry Ford (Detroit, Michigan) para su tipificación.
Se definió MRSA de acuerdo a la detección del gen mecA. Debido que no se utilizó una definición clínica, se definió si el aislamiento del MRSA era adquirido en la comunidad basado en el tipo de SCCmec y la presencia de genes que codifican la PVL: si los aislamientos portaban SCCmec tipo IV o V y presentaban los genes lukF.PV y lukS-PV, se consideraron MRSA-AC. Aquellos que portaban SCCmec tipo I, II y III, independiente de la presencia de los genes lukF.PV y lukS-PV, fueron considerados como MRSA-AH 13.
Análisis estadístico
Se utilizó una base de datos en Excel 2007 de Windows XP para recopilar información sobre la procedencia de las cepas de S. aureus reportadas. Para el análisis estadístico de los datos se utilizó STATA SE 16. Se realizó un análisis descriptivo con frecuencias y porcentajes.
Consideraciones éticas
Las muestras y los datos de los pacientes se procesaron y almacenaron bajo estricta confidencialidad. A cada aislamiento de S. aureus se le asignó un código, y la base de datos se guardó con contraseña, a la cual solo tuvieron acceso los investigadores principales. El Comité de Ética Institucional del HCH aprobó el estudio en el 2016, con el código 021-017.
HALLAZGOS
Durante el 2017, se reportaron 152 aislamientos de S. aureus (solo uno por paciente) de los cuales se analizaron en este estudio 120. De estos, se excluyeron cinco aislamientos: cuatro presentaron hallazgos discordantes entre la susceptibilidad a la cefoxitina y la presencia del gen mecA, y uno era S. haemolyticus.
De los 115 aislamientos positivos para S. aureus, se obtuvo el mayor número de aislamientos provenientes de secreciones no especificadas (21,7%), seguido de sangre (20,0%), secreciones tranqueo-bronquiales (14,8%) y piel (14,8%) (Tabla 1). El 46,1% de los aislamientos fueron identificados como MRSA. Entre los aislamientos de MRSA (n = 53), la distribución de los tipos de SCCmec fue la siguiente: I (79,2%), III (1,9%) y IV (7,5%); no se contó con ningún aislamiento con SCCmec tipo II y V. Además, en seis aislamientos (11,3%) no se pudo determinar el tipo de SCCmec (Tabla 2).
Tipo de muestra | Total | MSSA | MRSA | N = 115 n (%) | N = 62 n (%) | N = 53 n (%) |
---|---|---|---|
Secreción no especificada | 25 (21,7) | 11 (17,7) | 14 (26,4) |
Sangre | 23 (20,0) | 13 (21,0) | 10 (18,9) |
Secreción bronquial | 17 (14,8) | 6 (9,7) | 11 (20,8) |
Piel | 17 (14,8) | 13 (21,0) | 4 (7,5) |
Hueso articular | 3 (2,6) | 1 (1,6) | 2 (3,8) |
Umbilical | 1 (0,9) | 1 (1,6) | 0 (0,0) |
Vaginal | 2 (1,7) | 2 (3,2) | 0 (0,0) |
Fístula | 1 (0,9) | 0 (0,0) | 1 (1,9) |
Orina | 1 (0,9) | 1 (1,6) | 0 (0,0) |
Otros | 3 (2,6) | 1 (1,6) | 2 (3,8) |
Desconocido | 22 (19,1) | 13 (21,0) | 9 (17,0) |
MSSA: S. aureus sensible a la meticilina; MRSA: S. aureus meticilinorresistente
Fármacos | MSSA (n = 62) | MRSA (n = 53) | |||
---|---|---|---|---|---|
n (%) | n (%) | ||||
Total | SCCmec tipo I y III a | SCC mec tipo IV | No tipificable | ||
Total | 62 (53,9) | 53 (46,1) | 43 (81,1) | 4 (7,5) | 6 (11,3) |
Eritromicina | 14 (22,2) | 49 (92,5) | 42 (97,7) | 2 (50) | 5 (83,3) |
Gentamicina | 11 (17,7) | 41 (77,5) | 38 (71,7) | 0 (0,0) | 3 (50) |
Clindamicina | 7 (11,1) | 49 (92,5) | 43 (100) | 0 (0,0) | 3 (50) |
Tetraciclina | 6 (9,7) | 1 (1,9) | 1 (2,3) | 0 (0,0) | 0 (0,0) |
Ciprofloxacina | 4 (6,4) | 45 (84,9) | 41 (95,3) | 0 (0,0) | 4 (66,7) |
Trimetropin-sulfametoxazol | 4 (6,5) | 1 (1,9) | 1 (2,3) | 0 (0,0) | 0 (0,0) |
Rifampicina | 3 (4,8) | 4 (7,5) | 3 (5,7) | 0 (0,0) | 1 (16,7) |
Linezolid | 1 (1,6) | 2 (3,8) | 2 (4,7) | 0 (0,0) | 0 (0,0) |
Cloranfenicol | 0 (0,0) | 1 (1,9) | 1 (2,3) | 0 (0,0) | 0 (0,0) |
Ceftarolina | 0 (0,0) | 3 (5,7) | 3 (7,0) | 0 (0,0) | 0 (0,0) |
MSSA: S. aureus sensible a la meticilina; MRSA: S. aureus meticilinorresistente; SCCmec: cassette cromosomal estafilocócico mec
a Solo se contó con un aislamiento portador de SCCmec III
En cuanto al perfil de susceptibilidad antibiótica, entre los aislamientos de S. aureus sensibles a la meticilina (MSSA, n = 62), la frecuencia más alta de resistencia se encontró para la eritromicina (22,2%), gentamicina (17,2%) y clindamicina (11,1%). Por otro lado, la mayoría de aislamientos (>75%) de MRSA mostraron resistencia frente a la clindamicina, eritromicina, gentamicina y, además, ciprofloxacina; esta corresistencia fue más común en los aislamientos portadores de SCCmec tipo I y III (n = 43) (Tabla 2).
Se identificaron los genes que codifican la PVL en diez aislamientos (8,7%): seis aislamientos de MSSA (9,7%) y cuatro aislamientos de MRSA (7,5%). De estos últimos, se catalogaron tres cepas como MRSA-CA, por ser portadoras del SCCmec tipo IV; mientras que solo 1 correspondía a MRSA-HA, por presentar el SCCmec tipo I (Tabla 3).
Tipo de aislamiento (n = 115) | PVL negativo | PVL positivo | Total |
---|---|---|---|
n (%) | n (%) | ||
S. aureus | 105 (91,3) | 10 (8,7) | 115 |
MSSA | 56 (90,3) | 6 (9,7) | 62 |
MRSA | 49 (92,5) | 4 (7,5) | 53 |
Tipo de SCCmec | |||
I | 41 (97,6) | 1 (2,4) | 42 |
III | 1 (100) | 0 (0,0) | 1 |
IV | 1 (25,0) | 3 (75,0) | 4 |
NT | 6 (100) | 0 (0,0) | 6 |
NT: No tipificable; MSSA: S. aureus sensible a la meticilina; MRSA: S. aureus meticilinorresistente; SCCmec: cassette cromosomal estafilocócico mec; PVL: leucocidina Panton-Valentine
DISCUSIÓN
De los 152 aislamientos reportados durante el 2017, se analizaron 115 cepas (75,7%). Dentro de estas, se encontró una gran frecuencia de aislamientos de MRSA (46,1%) y una frecuencia de MRSA-AC del 2,6%.
Estudios multicéntricos previos que han evaluado cepas de S. aureus según su susceptibilidad antimicrobiana y genotipo han demostrado una alta prevalencia (>40%) de MRSA en América Latina, con una distribución heterogénea entre países 14 , 15. Brasil y Venezuela reportan las frecuencias más altas en la región, con 62% y 57%, respectivamente 15. En el caso de Perú, se han reportado una frecuencia de 50%-54% 14 , 15. Las frecuencias descritas son similares a lo hallado en el presente estudio; sin embargo, la comparación con estos estudios 14 , 15 es limitada, ya que solo se consideraron casos de bacteremia. A la fecha no se han realizado estudios en la región que consideren todo tipo de aislamientos.
Existen pocos estudios locales que evalúan la distribución de las cepas MRSA y su tipificación molecular. Uno realizado en el mismo hospital que el presente estudio, que consideró todos los aislamientos de S. aureus, describió una frecuencia del 68% de MRSA en el 2002 16. Posteriormente, un estudio que incluyó aislamientos de S. aureus proveniente de todas las fuentes en tres hospitales de referencia en Lima 17 mostró una frecuencia global del 58%, obteniendo en casi todos los aislamientos, las características moleculares de MRSA-AH. Esto demuestra que la presencia de MRSA sigue siendo una condición prevalente en los hospitales del Perú, por lo que se deben implementar medidas para contener de su diseminación 15.
Desde el punto de vista molecular, el tipo de SCCmec de MRSA tiene una distribución variada en Latinoamérica 18 , 20. En los países del norte de Sudamérica, como Colombia y Ecuador, el clon USA300 portador de SCCmec tipo IV es el más frecuente, seguido por el clon chileno-cordobés, portador de SCCmec tipo I; mientras que en países como Perú y Chile se ha reportado que la mayoría (>90%) de los aislamientos de S. aureus corresponden al clon chileno-cordobés 15.
En el Perú, un estudio multicéntrico realizado en Lima ( 17 reveló que MRSA portador de SCCmec tipo I fue hallado con una frecuencia del 75,2%; además, dichos aislamientos presentaron resistencia a la ciprofloxacina, clindamicina, eritromicina y gentamicina, similar a lo encontrado en el presente estudio. Nuestros hallazgos son similares a estudios previos en hospitales de Lima, lo cual confirma que MRSA portador de SCCmec tipo I no productor de PVL es el clon nosocomial más común en nuestro medio 17 , 18. Respecto a la emergencia de MRSA-AC en la última década en el Perú, varios estudios multicéntricos han demostrado que este es un evento muy infrecuente en los hospitales del Perú 8 , 14. En el presente estudio, se encontró que el 2,6% de los aislamientos contaban con características moleculares de MRSA-AC, a diferencia de países vecinos como Brasil, Ecuador, Venezuela y Colombia, donde se reporta una prevalencia de alrededor del 27% ( 15 , 20. Esto amerita una vigilancia continua ya que si esta proporción aumenta significativamente, esto tendría un impacto en la decisión sobre el tratamiento antibiótico empírico para infecciones de la piel y partes blandas, su presentación más frecuente.
Asimismo, en este estudio se encontró una frecuencia de los genes que codifican la PVL del 8,7%, con una mayor distribución en el grupo de MSSA. Esta exotoxina se describió por primera vez en 1932 en cepas sensibles, como factor asociado a infecciones de piel severas y neumonía necrotizante ( 19. Posteriormente, se describió que su producción podría considerarse como un marcador para identificación de cepas resistentes, especialmente MRSA-AC 19. Sin embargo, en la actualidad dicha teoría es controversial, ya que los genes que codifican la PVL son reportadas en las cepas de MRSA-AH y MSSA. Un estudio realizado en tres hospitales en Lima 17 describió una baja producción de PVL (9,1% de los aislamientos analizados), con una distribución mayor en el grupo de MSSA que en el de MRSA, similar a lo encontrado en nuestro estudio. Dichos hallazgos favorecen la actual teoría que indica que la presencia de PVL no es un marcador fidedigno para la identificación de cepas MRSA-AC.
La primera limitación del estudio fue que el número de aislamientos analizados fue pequeño, lo cual podría alterar la verdadera prevalencia de aislamientos de MRSA-AC. Esto se debió a que la disponibilidad de los aislamientos reportados S. aureus en el periodo del estudio fue parcial y, probablemente, a que en dicha institución no se realiza la toma de muestra sistemática de cultivos en los casos con sospecha de infección de piel y partes bandas, presentación más frecuente de esta infección o que esta se realice luego del inicio de antibióticos. La segunda limitación del estudio fue que no se incluyó la revisión completa de historias clínicas, lo que impide completar la definición clínica de MRSA-AH y MRSA-AC. Además, este estudio no permite evaluar si las muestras obtenidas correspondían a casos de infección o colonización, lo cual brindaría mayor información sobre el impacto de la presencia de esta bacteria en nuestro medio. Paralelamente, hubo un 11,3% de aislamientos de MRSA en los que no se pudo identificar el tipo de SSCmec. La tercera limitación tiene relación con la validez externa del estudio. Este fue realizado en un hospital público de referencia ubicado en la zona norte de la ciudad de Lima, por lo que la información descrita solo corresponde a dicha población. Esto, junto con el reducido número de muestras analizadas, limita la extrapolación de los resultados. Sin embargo, la intención del presente estudio es llamar la atención sobre la importancia de la vigilancia epidemiológica de bacterias multirresistentes.
Nuestro estudio demuestra una baja frecuencia de MRSA-AC en Lima. Sin embargo, consideramos que se debería continuar una vigilancia epidemiológica cercana y ampliar estudios, más aún en el contexto de la creciente migración de países con mayor prevalencia.