Introducción
Las garrapatas blandas del género Argas (Ixodida, Argasidae) están representadas por 61 especies, de las cuales siete se han citado en Perú: Argas cucumerinus Neumann, 1901; Argas dalei Clifford, Keirans, Hoogstraal & Corwin, 1976; Argas magnus Neumann, 1896; Argas miniatus Koch, 1844; Argas moreli Keirans, Hoogstraal & Clifford, 1979; Argas neghmeiKohls & Hoogstraal, 1961 y Argas persicus (Oken, 1818); de las cuales A. neghmei y A. miniatus requieren confirmación (Need et al. 1991, Aguirre et al. 1997, Guglielmone et al. 2003, Nava et al. 2017). Todas ellas son parasitas de aves domésticas y silvestres, con la particularidad de que A. neghmei ha sido reportada parasitando humanos (Aguirre et al. 1997, Nava et al. 2017).
La distribución geográfica de A. neghmei incluye zonas áridas de Argentina y Chile (Aguirre et al. 1997, González-Acuña et al. 2010), pero a pesar de estar mencionada en la lista de garrapatas del Perú (Need et al. 1991), su presencia en este país es cuestionada (Nava et al. 2017). Actualmente, el gallo doméstico (Gallus gallus domesticus), el canastero (Asthenes dorbignyi) y, ocasionalmente, humanos son considerados los hospederos para A. neghmei (Kohls & Hoogstraal 1961, Aguirre et al. 1997, Di Iorio et al. 2010). En particular, las infestaciones en humanos están asociadas con lesiones nodulares, eritematosas, con punto hemorrágico y prurito (Burchard 1985, Aguirre et al. 1997).
En el presente estudio se confirma mediante el análisis morfológico y molecular la presencia de A. neghmei en el Perú. Asimismo, se proporciona un nuevo registro de hospedero, el carpintero andino (Colaptes rupicola), para esta especie de garrapata.
Material y métodos
La colecta de garrapatas se desarrolló durante los meses de febrero y marzo de 2016. Las garrapatas fueron colectadas de dos carpinteros andinos (C. rupicola) provenientes del Fundo Esmeralda, en el distrito de Nuñoa, provincia de Melgar en el departamento de Puno, Perú (14°31’11.77’’S; 70°32’15.95’’W; 3967 m de altitud) (Fig.1). El estudio fue aprobado por el Servicio Nacional Forestal y de Fauna Silvestre (SERFOR) del Perú (RDG N˚ 023-2018-MINAGRI-SERFOR-DGGSPFFS).

Figura 1 (a) Carpintero andino (Colaptes rupicola). (b) Larva parcialmente ingurgitada de Argas neghmei caminando sobre el plumaje de C. rupicola.
Las garrapatas fueron fijadas y preservadas en etanol al 80% dentro de viales debidamente rotulados. Para el estudio morfológico, las garrapatas fueron aclaradas en una solución acuosa de hidróxido de potasio al 25% y luego montadas en portaobjetos usando medio de Hoyer. Las muestras fueron observadas en un microscopio Carl Zeiss Axioskop 40 (Göttingen, Alemania) y las medidas y fotografías se hicieron utilizando el programa Image-Pro Plus v5.1 y una cámara Olympus DP70 (Olympus Optical, Japón). Las medidas se presentan en micrómetros con el rango entre paréntesis. Los especímenes examinados se encuentran depositados en la Colección de Parásitos del Laboratorio de Epidemiología y Economía Veterinaria de la Facultad de Medicina Veterinaria, UNMSM en Lima, Perú (N˚ de depósito 456 y 843) y en la "Coleção Nacional de Carrapatos, Danilo Gonçalves Saraiva (CNC)" de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de São Paulo, São Paulo, Brasil (N˚ de depósito CNC-4173).
El análisis molecular incluyó la extracción total de ADN de muestras de tejido interno de un espécimen utilizando un protocolo de fenol/cloroformo (Sangioni et al. 2005). Se realizó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar parcialmente el gen 16S ARNr mitocondrial utilizando el protocolo descrito por Mangold et al. (1998). El producto PCR-positivo fue tratado con ExoSAP-IT (USB Corporation, Cleveland, OH, USA), preparado para secuenciación con el kit Big Dye Terminator Cycle Sequencing (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) y secuenciado en un secuenciador automático (ABI 3500 Genetic Analyzer, Applied Biosystems). La secuencia obtenida fue ensamblada y editada con el programa Geneious (Kearse et al. 2012) y posteriormente comparada con secuencias de referencia disponibles en GenBank utilizando BLASTn (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).
Resultados
Un total de 12 y 17 larvas de garrapatas fueron colectadas de cada carpintero andino, respectivamente. Los sitios de infestación fueron las zonas desplumadas del cuello. Los análisis morfológicos indicaron que todas las garrapatas correspondían a larvas del género Argas.
Ocho larvas parcialmente ingurgitadas fueron montadas en medio de Hoyer e identificadas como A. neghmei por poseer el conjunto de los siguientes caracteres morfológicos: cuerpo circular con una longitud de 752 µm (732-760) y un ancho de 763 µm (728-788); placa dorsal de superficie escamosa, ovalada, 376 µm (362-386) de largo y 282 µm (272-290) de ancho; superficie del idiosoma dorsal con 28 pares de setas (20 dorsolaterales y ocho centrales); superficie del idiosoma ventral dotada de siete pares de setas (tres esternales; tres circumanales y un par en valvas anales); hipostoma con fórmula dentaria 2/2, 11 y nueve dientes en las fila 1 y 2, respectivamente; tarso I con órgano de Haller redondo, sensila trumpetiforme presente (Fig. 2).

Figura 2 Larva de Argas neghmei. (a) Vista dorsal. (b) Hipostoma. (c) Tarso I, la flecha indica el órgano de Haller.
Se logró extraer con éxito el ADN de uno de los especímenes estudiados y la amplificación parcial del gen 16S ARNr mitocondrial produjo una secuencia editada de 363 pares de bases. La secuencia fue comparada con secuencias de referencia del GenBank y tuvo una identidad de 100% con secuencias homólogas registradas para A. neghmei de Argentina (FJ853598) y Chile (DQ295781). La secuencia de nucleótidos de este estudio se depositó en la base de datos GenBank con el número de acceso MT328541.
Discusión
Los resultados del análisis morfológico y molecular coinciden con estudios previos (Kohls & Hoogstraal 1961, Di Iorio et al. 2010, Nava et al. 2017), demostrando que los especímenes estudiados corresponden a A. neghmei. De esta forma, los resultados de nuestro estudio confirman la presencia y extienden la distribución geográfica de esta garrapata para Perú. Asimismo, se incluye el primer registro de A. neghmei en el carpintero andino (C. rupicola), sumando un nuevo hospedero para esta especie.
Argas neghmei ha sido descrito como un parásito de aves Galliformes y Passeriformes (Kohls & Hoogstraal 1961, Di Iorio et al. 2010). Nuestros resultados reportan a un Piciformes, el carpintero andino, como nuevo hospedero para esta especie de garrapata. Esta sería la segunda vez que se encuentra a A. neghmei en un hospedero natural, tras el hallazgo en el canastero (A. dorbignyi) en Argentina (Di Iorio et al. 2010). El carpintero andino habita terrenos rocosos de alta montaña, entre los 2000 y 5000 metros sobre el nivel del mar, que se extienden a lo largo de los Andes de Perú, norte de Chile, este de Bolivia y noreste de Argentina (Fjeldså & Krabbe 1990). La distribución altitudinal de C. rupicola coincide con el registro previo de A. neghmei en aves silvestres, localizado a 2800 m en los Andes del norte de Argentina (Di Iorio et al. 2010).
Además de ser un ectoparásito de aves domésticas y silvestres, A. neghmei también se ha observado parasitando humanos (Aguirre et al. 1997). A pesar de esto, el papel de esta garrapata en la transmisión de patógenos a aves y humanos no ha sido estudiado. Será necesario realizar futuros estudios para conocer la biología, ecología e importancia médica y veterinaria de A. neghmei, y así poder aclarar aspectos de su dispersión, hospederos y transmisión de patógenos.