El sacha inchi Plukenetia volúbilis L. en nuestro país se encuentra en estado silvestre en diversos lugares de San Martín, Ucayali, Huánuco, Amazonas, Madre de Dios y Loreto. El presente estudio evalúa la presencia de fitoesteroles, compuestos fenólicos, y actividad antioxidante de la semilla de sacha inchi1 . Actualmente son de gran importancia los compuestos fenólicos por sus propiedades como antioxidantes y por sus atributos sensoriales que brindan a los alimentos como: sabor, color, y por brindar estabilidad por su resistencia a la oxidación lipídica2 . Asimismo, son excelentes conservadores naturales brindando estabilidad al alimento desplazando a otros conservadores sintéticos. La proyección en cuanto a su aplicación en la industria alimentaria y farmacéutica está en aumento; evaluar sus propiedades antioxidantes y la presencia de polifenoles permitirá abrir nuevos posibles mercados3 . El objetivo del presente trabajo es determinar el contenido de compuestos fenólicos por HPLC, capacidad antioxidante e identificación y cuantificación de fitoesteroles en semilla de sacha inchi.

La extracción del aceite de las almendras de sacha inchi se llevó a cabo por el prensado en frío. Las presiones de extracción fueron de 300 700 PSIA por espacio de 5 minutos, a la presión y temperatura ambiente. Las extracciones se realizaron con muestras de 90 gramos. Las muestras fueron colocadas en cilindro extractor de acero inoxidable, sometiéndose lentamente hasta llegar a las presiones establecidas, manteniendo la palanca de activación a presión constante por espacio de 5 minutos, controlándose esto con un cronómetro. Terminado el proceso de extracción la torta residual obtenida luego del prensado fue secada a 45 ºC durante 2 horas, luego se envasó y selló en bolsas plásticas grado alimenticio (ziploc®) y mantenidas en refrigeración.

Las pruebas preliminares de cromatografía fueron desarrolladas en la Facultad de Farmacia de la Universidad de Sevilla en un HPLC Agilent Technologies (Waldbronn, Germany), modelo 1100; el sistema consistió de un desgasificador de vacío, bomba cuaternaria, automuestreador, termostato para columna y detector de arreglo de diodo (DAD). El análisis fue corrido en una columna SB C18 (250 x 4,6 mm, 3,5 µm, Agilent Technologies). La fase móvil fue: solvente A (agua ultrapura ajustada con ácido acético a pH 2,65) y solvente B (20 % A y 80 % MeCN). La velocidad de la inyección fue a 1,5 mLmin-1 y la temperatura de la columna a 40 ºC. El tiempo total del análisis fue 45 min y el tiempo post-corrida fue 15 min. El volumen de inyección de la muestra fue 50 µL. Se logró identificar ácido siríngico y cinámico.

Las condiciones del análisis por HPLC fueron previamente descritas por Muñoz et al. (2007)4 . Se elaboraron estándares de ácidos fenólicos donde se pesaron individualmente los ácidos fenólicos: cafeico y ferúlico y se preparó otro estándar con flavonoides: rutina, hesperidina y morina de los que se pesó 10 mg de cada uno y se diluyó con agua en fiola de 100 ml; luego se tomaron 2 ml y se llevó a una fiola de 100 ml con con una mezcla hidroetanólica en el caso de los ácidos fenólicos. De los flavonoides se pesaron 10 mg en fiolas de 50 ml y de ahí se tomó 2 ml para diluirlo en 25 ml con una mezcla hidroetanólica (60:40); seguidamente fueron identificados por su tiempo de retención y calculados en función a sus respectivas áreas de los picos registrados a 370 nm.

La separación cromatográfica fue desarrollada a temperatura ambiente con una columna LiChroCART® 250-4 LiChrospher® 60 RP-18 (5 µm) (Merck KGaA, Alemania). La separación fue corrida a un flujo de 1000 µL min-1 y la fase móvil consistió en una mezcla de gradiente del eluyente A (agua – ácido o-fosfórico, pH 2,5) y eluyente B (acetonitrilo). El programa de gradiente utilizado fue el siguiente: 0 min, 100 % de A; 2 min, 80 % de A y 20 % de B; 15 min, 70 % de A y 30 % de B; 16 min, 40 % de A y 60 % de B; 22 min, 60 % de A y 40 % de B; 26 min, 100 % de A; 28 min, 100 % de A. las concentraciones de los ácidos fenólicos y flavonoles se expresaron en mg/kg de peso. Para el tratamiento de la torta de sacha inchi se trabajó con el extracto acuoso a una concentración de 8%,la misma que fue sonificada 20 minutos y agitada por media hora antes de llevar a volumen.

Se realizó mediante el método descrito por Fierro et al., (2004)5 . Las muestras de torta y aceite de sacha inchi fueron pesadas en tubos diferentes y se les agregaron metanol a una concentración de 10mg/ml. Los tubos fueron agitados en vortex por 30 minutos y 20 minutos sonificados; luego se guardó 24 horas. Despues se procedió a sembrar en las placas cromatográficas con micropipeta 10 ul. Se utilizaron dos sistemas cromatográficos como fase móvil. La primera fase móvil fue (CHCl3 :CH3 OH:H 2O 10:1:0,05) y fue corrida hasta la mitad de la placa cromatográfica. Luego la placa fue secada y corrida completamente en el segundo sistema de solvente (CHCl3 ).

Se realizó el procesamiento de las muestras según el método descrito por el reglamento CCE 2568-916 donde se pesó en un balón 5 gramos de aceite de sacha inchi y se trataron de forma similar al estándar constituido por aproximadamente 10 mg de β-sitosterol y 50 mg de estigmasterol, los que fueron saponificados en baño maría y se les extrajo con éter etílico usando peras de decantación tres veces, llevando a volumen en una fiola de 100 ml; luego se concentró sólo 25 ml con nitrógeno y se reconstituyó con metanol HPLC para ser analizados bajo las condiciones cromatográficas similares a las descritas por Fierro et al5 ., donde se trabajó en un HPLC Lachrom Merck -Hitachi 7100 con detector uv.vis a una longitud de 215 nm con una columna RP 18 250x4 de 5 um con fase móvil ACN:METOH (65:35) con flujo de 1,2 ml por 30 minutos. El tiempo de retención fue de 19,4 minutos para el estigmasterol y de 22,23 minutos el β-sitosterol.

Se utilizó el radical estable DPPH (Brand-Williams et al., 1995; Gómez-Alonso et al., 2003) 7. Se tomó 300 µL de cada fase y se añadió 2700 µL de DPPH de 100 µM, se vorteó durante 1 minuto, luego se centrifugó durante 5 minutos a 3500 rpm; a los 10 minutos se tomaron las lecturas a 515 nm. Los resultados se expresaron en función a Trolox equivalente; el rango de las concentraciones fue de (1, 5, 10 y 15 µmol/L).

Las mediciones del potencial antioxidante total radical-trapping (TRAP), fue desarrollado mediante el ensayo ABAP/ABTS (van Overveld et al., 2000)8 . Se tomaron 150 µL de cada fase y se añadió 2850 µL de ABTS/ABAP; se vorteó durante 1 minuto, luego se centrifugó durante 5 minutos a 3500 rpm; a los 10 minutos se tomaron las lecturas a 734 nm. Los resultados se expresaron en función a Trolox equivalente; el rango de las concentraciones fue de (1, 4, 7 y 10 µmol/L).

Los resultados obtenidos sobre el contenido de compuestos fenólicos en torta de sacha inchi están expresados en la tabla 1. El contenido de compuestos fenólicos muestra cantidades inferiores a la que presenta el aceite de oliva2 . Los frutos secos como el maní y las semillas oleaginosas son buena fuente de de ácidos fenólicos como el cafeico9 . Estudios realizados por Oliveras2 manifiesta que hasta el momento se han detectado los siguientes compuestos polifenólicos en aceite oliva extra virgen: hidroxitirosol, tirosol, cafeico, vanillina, p-cumárico, luteolina, quercetina y apigenina. Asimismo, Oliveras expresa que estos componentes son los que se encuentran con más frecuencia en el aceite de oliva virgen, tal y como lo reflejan numerosos estudios (Pirisi, 1997; Mateos, 2001; Montedoro, 1993; Brenes, 1999)10-13.

La tabla 2 nos muestra el contenido de estigmasterol y β-sitosterol en el aceite de sacha inchi expresados en mg/100 g. Se observa en el cromatograma de la figura 2 la corrida de los estándares estigmasterol y β-sitosterol, y en la figura 3 la corrida correspondiente al aceite de sacha inchi.

En cuanto a fitoesteroles el sacha inchi presenta mayor contenido de β-sitosterol que otros alimentos como los frejoles 17,1 mg/100g y arvejas 49,5 mg/100 g estudiados por Fierro5 y que otros aceites en el mercado según lo que reporta Aparicio14 .

Los límites que establece el reglamento (CEE) Nº 2568/91, modificados en el reglamento (CE) Nº 282/986 para aceite de oliva virgen, los niveles de esteroles totales se establece 1000mg/kg, los que pueden presentar los distintos tipos de esteroles: colesterol 0,5 %, brasicasterol 0,1 %, campesterol: 4,0 %, estigmasterol =campesterol, β-sitosterol 93 %, δ-7- estigmastenol: 0,5 %.

La presencia de fitoesteroles dentro de la fracción insaponificable y su cantidad, está considerado como uno de los en la calidad del aceite de oliva. Por otro lado, altos niveles de estigmasterol se correlacionan con alta acidez y baja calidad sensorial del aceite (Gutiérrez et al., 1999; Soledad et al., 2001)15-16.

• La torta de sacha inchi contiene compuestos fenólicos en promedio: 3,51 mg/kg de cafeico, 1,68 mg/kg de ferúlico, 42,93 mg/kg de rutina, 53,24 mg/kg de morina y 28,46 mg/kg de hesperidina.

• Se detectó en la torta de sacha inchi la presencia de ácido cinámico y siríngico.

• El aceite de sacha inchi contiene en promedio 75,49 mg/100g de estigmasterol y 74,62 mg/100g de β- sitosterol.

• El extracto lipofílico del aceite mostró mayor actividad antioxidante con el método DPPH, mientras el extracto hidrofílico del aceite mostró mayor actividad con el método ABTS.